潍坊市人民医院妇科 山东潍坊 261041
摘要：目的：探讨新辅助化疗（NACT）对宫颈癌Ki-67、Twist表达的影响，并分析其表达变化与临床疗效的关系。方法：用免疫组化SP法分别检测4８例ⅠＢ２～ⅡＢ期宫颈癌患者NACT前后Ki-67、Twist的表达。结果：NACT前Ki-67、Twist 的阳性表达率（81.25％、68.75％）均显著高于 NACT 后（12.50％、25％）（Ｐ＜0.01），且NACT前Ki-67 表达阳性者化疗有效率（92.31％）高于表达阴性者（33.33％）（Ｐ＜0.01）；但NACT前Twist阳性组的化疗有效率为84.85％，阴性组的化疗有效率为73.33%，差异无显著性（Ｐ＞0.05）。结论 Ki-67、Twist在宫颈癌组织中均有较高的表达水平，其变化与 NACT 疗效具有显著的相关性，Ki-67的表达水平可作为预测宫颈癌对化疗敏感性的指标。
关键词：新辅助化疗；宫颈癌；Ki-67；Twist
宫颈癌是妇科临床上最常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势。由于新的化疗药物及方法的出现，新 辅 助 化 疗（neoadjuvant chemotherapy，NACT），在巨块型宫颈癌的综合治疗中越来越重要。但NACT并非适合所有患者，部分患者对其不敏感，实施 NACT 将延误治疗。因此，寻找预测对化疗敏感性的相关肿瘤基因表达是临床研究的热点。本研究运用免疫组化方法研究Ki-67、Twist 在NACT前后表达水平的变化，探讨其预测宫颈癌NACT敏感性价值，以期为临床个体化的治疗方案提供参考依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2011年1月至2013年12月于潍坊市人民医院妇科确诊为宫颈鳞癌的48例患者为研究对象，患者均为初治患者，一般情况良好，无手术、化疗禁忌。纳入标准：组织活检病理学确诊为宫颈鳞癌（ⅠB2~ⅡB期），局部肿瘤直径≥4 cm。年龄31~57岁，平均45.4岁，其中IB2期20例，IIA期16例，IIB期12例；组织学分级：高分化14例，中分化13例，低分化21例；（本研究获潍坊市人民医院伦理委员会批准，并取得患者知情同意）。
1.2 方法 患者术前均接受2个疗程PT方案化疗，具体用药：紫杉醇175mg/m2滴注3小时，随后滴注顺铂75mg/m2，疗程间隔3周。结合妇科查体及盆腔CT或MRI检查，观察化疗前及化疗结束后（第21天）肿瘤大小及盆腔情况。据WHO标准：完全缓解（CR）：妇科检查和影像学检查显示肿瘤完全消失；部分缓解（PR）：肿瘤体积缩小50%以上；稳定（SD）：肿瘤体积缩小小于50%或无变化；进展（PD）：肿瘤体积增大或有新病灶出现；临床有效 = CＲ + PＲ，临床无效 = SD+ PD。化疗后3周接受手术，手术方式均为广泛性子宫切除术＋双附件切除＋盆腔淋巴结清扫术。
1.3 Ki-67和Twist 检测
所有患者于NACT前行宫颈组织活检，并检测肿瘤组织中Ki-67和Twist的表达。术后大体标本检测肿瘤组织中Ki-67和Twist的表达变化情况。检测方法为免疫组化SP法，操作按照试剂盒说明进行。用PBS代替一抗作为阴性对照，用已知的阳性切片作为阳性对照。一抗及试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。Ki-67细胞增殖抗原的阳性表达为染色均匀或颗粒状核色。Twist阳性表达为细胞膜和细胞质内出现棕黄色染色。在400倍的光镜下随机观察10个视野，计数阳性细胞数，并计算出肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比。阳性细胞比例≥25％为阳性，＜25％为阴性。
１.4 统计学分析
应用SPSS16.0统计软件分析处理数据，采用χ２检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
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２ 结果
2.1新辅助化疗的临床疗效
4８例宫颈癌患者NACT后，CR5例（10.41％），PR34例（70.83％），SD8例（16.67％），PD１例（2.08％），临床总有效率达81.25％。
2.2 Ki-67在NACT 前后的阳性率比较
患者NACT前，Ki-67的阳性表达率为81.25％，经２个疗程新辅助化疗后，鳞癌组织中Ki-67阳性表达率为12.50％，较化疗前显著降低（Ｐ＜0.01）。NACT前Ki-67阳性组的化疗有效率为92.31％，阴性组的化疗有效率为33.33％，显著高于阴性组（Ｐ＜0.01）。
2.3 Twist在NACT 前后的阳性率比较
患者NACT前，Twist的阳性表达率为68.75％，经２个疗程新辅助化疗后，鳞癌组织中Twist阳性表达率为25％，较化疗前显著降低（Ｐ＜0.01）。NACT前Twist阳性组的化疗有效率为84.85％，阴性组的化疗有效率为73.33%，差异无显著性（Ｐ＞0.05）。
3 讨论
宫颈癌居全球女性生殖道恶性肿瘤发病率的首位，其中巨块型宫颈癌因其局部肿瘤体积大、淋巴转移率高，单纯手术治疗常不能得到满意的手术切除率，术前使用新辅助化疗，其意义在于缩小肿瘤体积，降低肿瘤的分期，为根治手术创造条件，最大可能的避免放疗，保留年轻患者的卵巢功能和阴道功能；其次是清除或抑制亚临床病灶，减少复发的潜在风险，防止远处转移[1]。但新辅助化疗并非适合所有患者，我们的观察中NACT 总有效率为81.25％，其中完全缓解率为10.41%，与既往报道一致[2]。若对化学治疗无效的患者实施 NACT将延误治疗，并带来不良反应及加重患者的经济负担。故治疗前预测患者肿瘤细胞对 NACT 的敏感性至关重要。
Ki-67抗原是一种与细胞有丝分裂周期密切相关的增殖细胞核抗原，是反映细胞群体增殖活性的可靠指标，与多种肿瘤的发生、发展、转移及预后相关，已成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标[3]。本研究结果显示，经过２个疗程TP方案的NACT，宫颈鳞癌中的Ki-67表达明显降低，且NACT前Ki-67阳性表达的患者化疗有效率显著高于阴性表达者，差异有统计学意义（P＜0.01），说明肿瘤细胞增殖能力越强对化疗的敏感性越好，治疗效果越显著。与因此Ki-67可作为预测和判定化疗疗效的敏感性指标。
Twist是一种高度保守碱性螺旋-环-螺旋蛋白转录调控因子，与细胞凋亡、肿瘤转移和血管生成密切相关，在多数恶性肿瘤中过度表达[4]。有研究显示，Twist蛋白表达升高可导致微管干扰紫杉醇的耐药性，抑制其表达可增强肿瘤细胞对化疗的敏感性[5]。我们发现经过２个疗程TP方案的NACT，宫颈鳞癌中的Twist表达明显降低，但阳性表达者化疗有效率与阴性表达者比较，差异无统计学意义（P＞0.05），提示Twist不宜作为预测 NACT 疗效敏感性的指标。我们推测可能与参照癌灶直径大小判断疗效有关，而化疗抑制Twist表达主要表现为癌细胞侵袭和转移受抑制而细胞增殖不受影响。因此，还可能存在其他的机制对Twist表达阴性者发挥抗肿瘤作用，这有待于进一步研究。
综上所述，本实验观察NACT前后ⅠＢ２～ⅡＢ期宫颈鳞癌患者组织Ki-67、Twist的表达情况，结果发现NACT可显著降低Ki-67、Twist表达，可能通过抑制肿瘤细胞增殖和侵袭转移发挥治疗效果。Ki-67表达与化疗敏感性和疗效显著相关，因此检测Ki-67表达水平可作为预测宫颈鳞癌NACT疗效的指标，而Twist 尚无法作为化疗敏感性指标预测宫颈鳞癌NACT疗效。由于本研究属小样本，故有待进一步加大样本并进行深层次研究。
参考文献：
[1]郝敏，张娜.宫颈癌新辅助化疗与同步放化疗[J]，中国实用妇科与产科杂志，2010，26（3）：168-174.
[2]赵虹，王晓燕，邵淑丽，等.Ⅰb2-Ⅱb 期宫颈鳞癌新辅助化疗前后Bcl-2和Bax的表达差异[J].山西医科大学学报，2008，39（11）：995-997.
[3]程玲瑗.P16 和 Ki-67 联合检测在宫颈上皮内瘤、不成熟鳞化及宫颈癌诊断中的作用[J]，中国初级卫生保健2013，27（11）：52-53.
[4]Kupferman ME Jiffar T，EL-Naggar A，et al.TrkB induces EMT and has a key role in invasion of head and neck squamous cell carcinoma.Oncogen-e，2010，29；2047-2059.
[5]Wang X，Ling MT，Guan XY，et al.Identification of a novel function of TWIST，a bHLH protein，in the development of acquired taxol resistance in human cancer cells[J].Oncogene，2004，23（2）：474-482.
作者简介：牟召霞 女 主管护师 大学本科
论文作者:牟召霞
论文发表刊物:《健康世界》2015年3期供稿
论文发表时间:2015/10/28
标签：阳性论文; 宫颈癌论文; 肿瘤论文; 患者论文; 阴性论文; 敏感性论文; 宫颈论文; 《健康世界》2015年3期供稿论文;