隋美玲1 翟金凤1 刘珍1 于月1
1.牡丹江市第二人民医院 黑龙江牡丹江 157000
摘要：目的 探讨CYP3A5*3基因多态性与高血压患者服用苯磺酸氨氯地平后，不同基因型对苯磺酸氨氯地平降压疗效的影响，为临床高血压病的个体化治疗提供实验室依据。方法 采用荧光染色原位杂技术（FISH）对实验对象进行CYP3A5*3 基因检测，记录患者服药后的血压情况，比较不同基因型对苯磺酸氨氯地平降压疗效的影响。结果CYP3A5*3基因型各组之间收缩压及舒张压变化情况存在明显统计学差异，（p<0.05），AA组降压幅度明显高于GG组与AG组，实行基因导向治疗后，记录基因导向治疗前及基因导向治疗后收缩压与舒张压的变化情况。结果三组组内收缩压下降幅度无明显差异，（P=0.067，P>0.05），舒张压下降幅度亦无明显统计学差异，（P=0.364，P>0.05）。
关键词：CYP3A5*3；原发性高血压病；氨氯地平；精准医疗
20世纪早期，就已经开始对药物与基因之间的关系进行研究，Archibald 提出遗传变异可能是导致药物作用差异的关键因素[1]。高血压是多种病因引起的心血管综合征[2]，钙通道阻滞剂在高血压病的治疗中，占有重要的地位。氨氯地平作为钙通道阻滞剂的代表药物主要经由 CYP3A代谢。国外学者在通过对韩国四十四名健康男性受试者的研究[3]发现，钙通道阻滞剂氨氯地平血药浓度在CYP3A5*3/*3 携带者明显偏低。本文通过对高血压患者携带CYP3A5基因型的不同与服用苯磺酸氨氯地平后药效学差异之间的相关性的研究，可以为苯磺酸氨氯地平的个体化治疗提供遗传学依据。
1 材料
诊断标准：依据《2010年中国高血压防治指南》的诊断标准，平静状态下连续3次（非同日）测得的血压值，收缩压≥140 mmHg（1mmHg=0.1133 kPa）或舒张压≥90 mmHg。
纳入标准：居住于黑龙江省东部地区佳木斯市的居民，三代以内均为汉族，无血缘关系。
排除标准：继发性高血压、严重的肾脏疾病或肝功能障碍、肿瘤、严重的瓣膜性心脏病、严重心功能障碍的患者。
实验对象：
病例组：2016年9月至2017年7月就诊于佳木斯大学附属第一医院心内科门诊或病房的未口服任何降压药物及任何影响血压变化的药物的高血压病1级和2级患者108例，均低盐低脂饮食，记录性别、年龄、体重、ALT、AST、BUN、CR、血钠、基线血压值等一般数据。
2 方法
2.1 检测方法
基因型检测使用荧光染色原位杂交法，采集受试者静脉血2 mL于紫色抗凝真空采血管中，放置冰箱中冷藏保存。
2.2 富集白细胞
（1）取预处理液（10×NH4Cl）110 μL与990 μL灭菌注射用水加入透明EP管中，稀释预处理液。
（2）取静脉血200 μL，加入稀释后的预处理液中，充分混匀，室温静置5 min。
（3）透明后，指弹混匀，放入离心机中室温3500 r/min（700 g）离心5 min后，弃去上清液。
2.3 加样及上机扩增
（1）取50 μL耀金宝（核酸纯化试剂）加入富集了白细胞的EP管中，指弹EP管至混合均匀（成透明状，浅绿或略带红色）。
（2）取1.5 μL加入耀金宝的白细胞，直接加入对应基因型的耀金分试剂中，通过离心，除去气泡。上机检测。检测条件：95 ℃预变性600 s；95 ℃变性30 s，65 ℃复性末点检测75 s，50个循环。
（3）剩余白细胞于-20 ℃冰箱中冷冻保存。
2.4 血压测定
待患者静息30min以上，使用水银柱血压计，取坐位，测量双侧上臂血压，测量时上臂位置应与心脏水平，早、中、晚各平行测量三次，取平均数为该受试者血压值。
3 结果
3.1 基因型检测结果
经检测，佳木斯地区CYP3A5*3基因型分布频率如表3-1所示，病例组108例，其中GG型66例，频率为61.1%，AG型36例，频率为33.3%，AA型6例，频率为5.6%。
将血压变化情况经t检验处理，CC、CT型舒张压与收缩压变化比较，结果均为p>0.05，没有差异；CC、TT型舒张压与收缩压变化比较，均为p<0.05，血压变化存在差异性。
3.3 CYP3A5基因导向治疗后不同基因型高血压患者服用苯磺酸氨氯地平后血压变化情况
根据高血压患者基因检测结果，将实验对象纳入基因导向组，依据CYP3A5的不同基因型，给予受试对象不同剂量的苯磺酸氨氯地平。嘱A组（GG型）59例、B组（AG型）32例患者晨起口服苯磺酸氨氯地平10 mg，每日一次。C组（AA型）6例患者晨起空腹口服苯磺酸氨氯地平5 mg，每日一次。记录收缩压与舒张压的平均值，随访用药两个月后血压的变化情况，在随访中出现失访、未规律服用药物的患者7例，故给予排除，入组的对象为90例，A组（GG型）55例，B组（AG型）30例，C组（AA型）5例，比较基因导向组组内苯磺酸氨氯地平的降压疗效有无差异。
给予患者不同剂量进行基因导向治疗，基因导向组中A（GG型）、B（AG型）、C（AA型）三组组内收缩压下降幅度无明显差异，（P=0.067，P>0.05），舒张压下降幅度亦无明显统计学差异，（P=0.364，P>0.05）。
4 讨论
佳木斯地区高血压患者CYP3A5*3基因表达比例为22.2%，远远低于中国人CYP3A5*3表达百分比70%-77%，原因可能为所选择患者为高血压患者，CYP3A5*3基因多态性可能与高血压的发病有关，有待与健康人基因多态性进行分析，进一步探讨CYP3A5*3与高血压病的相关性。
实验结果显示，C组（AA型）高血压患者的降压幅度明显高于A组（GG型）和B组（AG型），差异具有统计学意义。研究表明，CYP3A5 野生型定义为 CYP3A5*1，携带至少一个 CYP3A5*1 等位基因的个体才可以正常表达 CYP3A5 蛋白。CYP3A5与药物的吸收、口服首过代谢及消除密切相关，主要分布在人体的肝脏、小肠、肾脏等部位[4]。苯磺酸氨氯地平为活性药物，经肝脏代谢灭活，其吸收及代谢过程受到CYP450酶系及转运蛋白的影响，CYP3A5基因多态性对苯磺酸氨率地平的血药浓度存在影响。基因导向治疗结果显示，三组降压幅度无显著差异，提示高血压患者CYP3A5*3基因型检测结果，可以为高血压患者的苯磺酸氨氯地平个体化治疗提供遗传学依据，以避免治疗失败或因过量应用，增加患者经济负担或因药物蓄积导致不良反应的发生。
本研究中选用的为心内科高血压病患者，普遍年龄较大，同时存在多种疾病，治疗药物种类繁多，CYP3A5与ABCB1 基因多态性与多种心血管疾病用药有关，如心内科长用抗血小板聚集药硫酸氢氯吡格雷[5]、用于调节血脂、稳定斑块、保护血管内皮的他汀类药物[6-7]，强心药地高辛，心内科患者一般高龄，心衰的患者可能同时伴有肺淤血，容易发生肺部感染，对于长期卧床的患者，好发肺部感染外，因护理、导尿管等等原因，发生泌尿系感染的可能性加大，因此该部分患者还可能会同时应用抗感染药物，已有研究表明，大环内酯类药物的代谢受CYP3A5酶的影响。对于大部分高血压患者，降压治疗可能需要两种或两种以上降压药物联合应用，ARB类降压药物的体内过程也受ABCB1 基因多态性的影响，因此，对于心内科的高血压患者，口服苯磺酸氨氯地平的同时，还会或多或少的同时服用其他心血管常用药物，本研究中没有排除其他药物对苯磺酸氨氯地平药动学及药效学的影响。同时，在本研究中，将CYP3A5与ABCB1两种基因多态性进行独立的分析研究，没有对两种基因型对氨氯地平的共同影响进行分析，已有研究表明，ABCB1与CYP3A5之间有相互影响。因此，实验结果可能存在偏倚，因此今后的研究需要进一步深入探讨纵多因素之间的关系。
参考文献：
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论文作者:隋美玲1,翟金凤1,刘珍1,于月1
论文发表刊物:《健康世界》2018年19期
论文发表时间:2018/11/20
标签：地平论文; 基因论文; 收缩压论文; 多态性论文; 药物论文; 高血压论文; 磺酸论文; 《健康世界》2018年19期论文;