成都中医药大学附属医院药剂科 四川成都 610072
【中图分类号】 Ｒ285 【文献标识码】 C 【文章编号】 1550-1868（2016）6
摘要：目的：在采用共水蒸馏法提取川芎挥发油的前提下，对川芎药材的粉碎度、加水量、浸泡情况、提取时间、加热程度,5个影响因素进行动态考察，研究在不同提取条件下川芎挥发油中藁本内酯含量变化规律。方法：采用单因素实验法以不同提取条件下川芎挥发油得率和藁本内酯含量作为评价指标，并进行3个水平实验取平均值,采用高效液相色谱仪进行藁本内酯含量测定，同时与含量测定所得HPLC色谱图进行综合分析。结果：以上5因素对得油率以及挥发油中藁本内酯的含量均有一定程度的影响。结论：本研究对川芎挥发油有效成分的提取有积极意义。
关键词:川芎；挥发油；共水蒸馏；藁本内酯；含量测定 分类号:R285 文献标识码:C
川芎是著名的传统中药之一,为伞形科藁本属多年生植物川芎Ligusticm chuanxiong Hort.的干燥根茎。有关川芎化学成分已有许多研究报道，据科学检验测定川芎中含有挥发油，生物碱，内酯类，有机酸等多种成分。藁本内酯(Ligustilide)是川芎挥发油中含量最高的有效成分,且具有重要的生理活性.目前关于川芎挥发油的提取方法有很多，但经比较：共水蒸馏法是传统川芎挥发油提取方法，此法设备简单，易操作，投资少，适合在试验室进行，并且提取后药渣可以再提取酚酸类及生物碱类物质，从而实现川芎药材的分别提取，分部利用，故选择共水蒸馏法进行提取。但此法提取川芎挥发油的影响因素较多，而现有的文献报道中少有对此法提取条件的改变产生的对挥发油有效成分含量的影响进行系统研究，因此为了对这一问题进行初步的探讨，我们对川芎挥发油中藁本内酯含量变化情况进行了考察研究。
1.不同条件下川芎挥发油的提取
1.1仪器 挥发油提取器及回流冷凝装置（四川大学华西医学中心玻璃仪器厂）；sartorius BP211D 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；BUT25-12超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)；XMTB型恒温水浴锅(北京国华医疗器械厂)。
1.2 材料 伞形科植物川芎Ligusticm chuanxiong Hort.的干燥根茎。产地为四川，经成都中医药大学药学院中药鉴定教研室鉴定，符合《中国药典》2015版一部川芎项下有关规定。试剂均为分析纯。
1.3方法 称取川芎药材500g于10000ml圆底烧瓶中，加入药材一定倍量的蒸馏水未浸泡或浸泡一定时间后,连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水至充满挥发油测定器刻度，并溢流入烧瓶中为止。加热至沸腾后，保持微沸，提取8小时后，停止加热，并放置片刻，开启测定器下端的活塞，接取下端的挥发油后关闭活塞。稍置片刻再将浮于芳香水上层的挥发油照上法接取。为纯化挥发油，将所得挥发油与等体积的乙醚,同时加入分液漏斗中充分摇匀，放置，萃取。将分离出的乙醚层经无水硫酸钠脱水后，装于干燥至恒重的蒸发皿中,置于50℃水浴中挥至无乙醚味,将盛有浅黄色油状物的蒸发皿再次干燥至恒重，记录挥发油得量。平行实验三次，取其平均值。收集挥发油，将其装入锥底塑料瓶中密闭,编号,冰箱保存备用。
1.4结果 采用单因素实验法对药材的粉碎度、药材的加水量、是否浸泡、蒸馏时间、加热功率各因素进行考察。由“挥发油得率=挥发油质量/药材质量×100%”可得出在不同提取条件下川芎挥发油得率。
①对药材粉碎度的考察均在药材加8倍水，浸泡12h，加热功率800w时连续提取8h，加热程度均同等的条件下进行的。其中粗颗粒直径为6㎜,薄饮片厚度为3~4㎜,厚饮片厚度为6~7㎜。结果如下： 粗颗粒得油率0.4796%，重油2.2189g，轻油0.1789g，总油2.3978g
薄饮片得油率0.3122%，重油:1.4118g，轻油0.1494g，总油1.5612g
厚饮片得油率0.1632%，重油0.7071g，轻油0.1091g，总油0.8162g
②对加水量的考察均在药材饮片浸泡12h，加热功率为400w连续提取8h的条件下进行的。结果如下：6倍加水量得油率0.0920%，重油0.2916g，轻油0.1685g，总油0.4601g
8倍加水量得油率0.1226%，重油0.5099g，轻油0.1044g，总油0.6143g
10倍加水量得油率0.0840%，重油0.2544g，轻油0.1656g，总油0.4200g
③对浸泡情况的考察均是在药材饮片加8倍水，加热功率为800w连续提取8h的条件下进行的。结果如下：浸泡12h得油率0.3968%，重油:1.8101g，轻油0.1738g，总油1.9839g
未浸泡得油率0.3620%，重油:1.5166g，轻油0.2935g，总油1.8101g
④对蒸馏时间的考察均是在药材饮片加8倍水，浸泡12h，加热功率为1200w时，8h内每2h分段提取一次共4次。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆结果如下：蒸馏时间0~2h得油率0.1525%，总油0.7627g
蒸馏时间2~4h得油率0.1161%，总油0.5806g
蒸馏时间4~6h得油率0.1030%，总油0.5149g
蒸馏时间6~8h得油率0.0820%，总油0.4098g
⑤对加热程度的考察均是在药材饮片加8倍水，浸泡12h，连续提取8h的条件下进行的。结果如下：功率400得油率0.1229%，重油0.5099g，轻油0.1044g，总油0.6143g
功率800得油率0.3968%，重油1.8101g，轻油0.1738g，总油1.9839g
功率1200得油率=，0.4691%，重油2.1895g，轻油0.1559g，总油0.4691g
2.川芎挥发油中藁本内酯的含量测定
2.1仪器 Shimadzu LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-M10Avp检测器，浙江智达N2000色谱工作站；sartorius BP211D 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)
2.2材料 川芎挥发油（自制）、藁本内酯对照品（批号：12180-5,Chroma-Dex公司）、甲醇（色谱纯Fisher），其它试剂均为分析纯。
2.3色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6㎜×250㎜）；流动相：甲醇:水（65:35）；
流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：10µl
2.4样品的含量测定 精密量取不同提取条件下所得挥发油适量，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度后摇匀。再用移液管精密量取各量瓶中溶液1ml于25ml量瓶中，加甲醇稀释摇匀，定容。吸取10µl进样，照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版）有关项下规定测定。记录色谱图，测定峰面积，计算藁本内酯含量。结果如下:
粗颗粒：重油中含52.3% 轻油含40.9% 薄饮片：重油中含42.1% 轻油含51.3%
厚饮片：重油中含35.5% 轻油含21.4%
6倍水量：重油中含38.7% 轻油含37.8% 8倍水量：重油中含49.0% 轻油含45.5%
10倍水量：重油中含45.2% 轻油含43.9%
浸泡12h：重油中含47.7% 轻油含52.0% 未浸泡：重油中含46.2% 轻油含46.6%
蒸馏0~2h总油含50.1% 蒸馏2~4h总油含49.9% 蒸馏4~6h总油含45.5% 蒸馏6~8h总油含42.8%
加热400w：重油中含49.0% 轻油含45.0% 加热800w：重油中含47.7% 轻油含52.1%
加热1200w：重油中含53.1% 轻油含52.5%
3结论与讨论
3.1影响共水蒸馏法得油率的因素与川芎挥发油中藁本内酯的含量分析
不同粉碎度情况所得挥发油得率粗颗粒最高，说明粉碎度与成分的浸出、扩散的关系很大。将HPLC测得藁本内酯含量结果结合其色谱图分析发现：粗颗粒所提油中藁本内酯含量也较高，且重轻油中主要化学成分峰的比例较稳定。不同加水量的挥发油得率8倍水最高，这可能是与加水量多少会影响到产气量有关，所提油中藁本内酯含量也最高，其中重油及轻油中各化学成分的色谱峰比例较稳定和相似。浸泡12h的川芎药材的得油率比未浸泡的药材得油率稍高，其中藁本内酯的含量也稍高，但色谱图表明浸泡过的药材所提轻油及重油中的化学成分的比例差异较大，说明浸泡对药材内的化学成分有一定的影响。。共水蒸馏法提取川芎挥发油8h,在最初的4h内得油率达到最高，油中藁本内酯含量也较高，但其化学成分比例较不稳定，而4h后得油率逐渐降低，油中藁本内酯含量逐渐减少，但其挥发油中的化学成分比例已趋于平衡。加热功率为400w时所提油中重轻油中化学成分的比例差异较小，较相似。而800w及1200w时所提重轻油的化学成分差异就较明显。加热程度对得油率影响很大，不仅影响提油速度，同时因剧烈的沸腾，使水蒸汽与挥发油之间的相互作用加剧，易产生乳化现象。
3.2关于收油方法
据文献报道川芎挥发油密度大于1,属于重油,但是在提取挥发油时发现除了沉于水层底部的重油外,还有一层油浮于水面上,大大影响了得油率。因此本实验初次将重油、轻油分别收集并加以研究,但此种收集方法仍需更多的试验验证。
参考文献
【1】中华人民共和国卫生部药典委员会编《中华人民共和国药典》2015年版一部，四部，中国医药科技出版社，
【2】 李慧，王一涛．不同方法提取川芎挥发油的比较分析．中国中药杂志．2003，28（4）：379~380。
【3】阮琴，张颖，等．不同制备方法对川芎挥发油化学成分影响．中国中药杂志．2003，28（6）：572~574。
【4】林燕芝，唐星，等．RP-HPLC测定川芎挥发油中藁本内酯的含量．中国中药杂志．2004，29（2）：154~157
论文作者:白雪
论文发表刊物:《医药界》2016年6月第6期
论文发表时间:2016/9/21
标签：挥发油论文; 轻油论文; 川芎论文; 藁本论文; 重油论文; 内酯论文; 含量论文; 《医药界》2016年6月第6期论文;