张卉[1]2003年在《IMS-PCR检测番茄细菌性斑点病种子带菌研究》文中研究表明番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄产量和品质的病害。这种病害由丁香假单胞杆菌番茄致病变种(PST)引起。种子带菌是田间主要初侵染源之一，也是病害从一年传染到下一年的原因，还是病害从一个地区传染到其它地区的原因。因此制定快速可靠灵敏的种子带菌检测方案尤为重要。 本研究在中国农科院植保所国家重点实验室进行，所做的工作在国内是首次进行的。采用两种方法制备得到两种抗原，分别对应两种注射方法，得到叁种血清：抗PST全菌体血清、抗PST2844-87血清和抗PST18血清。用试管凝集法测定了所得血清的效价：抗全菌体血清效价为640，另外两种血清效价为1280以上。用ELISA检测所获抗体的专一性，叁种血清的专一性基本相近，抗18血清交叉反应最少，抗全菌体血清交叉反应在其次，假阳性反应最多的是抗87血清。 提取了供试74种细菌的基因组DNA，确定了检测PST的PCR条件；得到能够扩增两个特异基因片段的引物，引物对p1、p2和引物对p3、p4。引物p3、p4扩增的基因特异性较强，可以供检测用，而引物p1、p2所扩增的基因片段的特异性较弱，可作辅助检测用。制备得到了具有磁心的琼脂糖微球载体，保存于4℃。进行了抗血清IgG的粗提。 将上述实验结果应用于种子带菌检测。在实验中设定不同梯度的人工接菌浓度，其中ELISA的检出临界值是1％。PCR的检出值是0.1％。
李志栋[2]2010年在《内蒙古加工型番茄细菌性斑点病病原鉴定及种子带菌检测技术的研究》文中进行了进一步梳理2009年从内蒙古巴彦淖尔市加工型番茄种植区采集到细菌性病害的病样,从病样上分离到7株细菌;经致病性测定,这7株细菌均能在加工型番茄上引起与田间发病症状相一致的症状,而且从接种病株上又重新分离到了相同的细菌。经菌体形态、培养性状、革兰氏染色反应观察和生理生化特性、16SrDNA基因测定,病原菌鉴定为丁香假单胞杆菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato)。本研究制备了抗PST菌体血清和抗PST菌体全蛋白血清,用试管凝集法测定两种抗血清的效价均达到了1:1280以上。用试管凝集法和免疫分离法检测抗血清专一性的试验中,两种抗血清的检测结果一致,供试PST菌株反应为阳性,同PST亲缘性较近的丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)的反应为阴性,说明供试的两种抗血清都具有较高的专一性。采用免疫分离法模拟种子带菌的检测,灵敏度达到了0.8×102 cfu/ml。采用常规PCR法模拟种子带菌检测,检测的灵敏度为2.8×105cfu/ml。
参考文献：
[1]. IMS-PCR检测番茄细菌性斑点病种子带菌研究[D]. 张卉. 东北农业大学. 2003
[2]. 内蒙古加工型番茄细菌性斑点病病原鉴定及种子带菌检测技术的研究[D]. 李志栋. 内蒙古农业大学. 2010