【摘要】目的：探讨细菌药物敏感试验的方法及其质量控制。方法：细菌药物敏感试验的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)是最常用的药敏试验。影响试验结果因素较多，综合监测的方法是按照K-B法推荐的标准菌株，采用同样方法对抑菌环变动范围进行监测。结果：依据抗菌药物药敏纸片判断标准和解释，实验中注意操作标准，确保药敏试验结果的准确无误码，给临床用药提供依据。结论：药物敏感试验应严格按NCCLS规定的培养基、操作方法、药敏纸片和判定标准进行。为了监控试验过程的质量，必须做好药敏质控。
【关键词】细菌药物敏感试验；纸片扩散法；其质量控制
【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）27-0332-01
抗菌药物敏感性试验的主要目的是检出细菌的耐药性，预测抗菌药物的临床治疗效果，并为临床医生针对某一特定的临床感染问题选用药物提供依据[1]。最常用的药敏试验是CLSI推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法(K-B法)。该法将药敏试验抑菌环大小分为三个等级，即敏感、中介、耐药。纸片扩散法操作简单，价格便宜，为临床常规使用的方法。细菌药敏试验结果为临床治疗细菌性感染，合理应用抗生素，提高临床疗效，避免滥用抗生素药物。
1.材料与方法
1.1 材料
选取我院门诊和住院患者的血液、痰液、粪便、尿液、咽拭纸、分泌物等标本100株。其中金黄色葡萄球菌13株，其他葡萄球菌25株，大肠埃希菌16株，肠杆菌科其他细菌35株，铜绿假单胞菌3株，其他非发酵菌8株。
1.2 材料
药敏琼脂 Mueller-Hinton培养基(市售成品)，按说明书溶化琼脂，高压灭菌后倾注直径90mm平板，每皿25ml，琼脂板厚度为4mm。用塑胶袋密封，4℃可存放10天左右。使用前35℃烘干表面水分。药敏纸片应在质量监测合格后方可使用。贴纸片前1h将保存在4℃冰箱中的纸片取出，打开前平衡至室温；用无菌镊子或纸片分配器将纸片贴于琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完全接触，各纸片中心相距应大于24mm，纸片中心距平皿边缘不小于15mm。一旦纸片贴上后不能再移动[2]。
1.3 方法
取待检菌接种于肉汤管，培养4～6h后用无菌生理盐水作适当稀释，使其浓度相当于0.5号麦氏比浊管(1.75%氯化钡0.5ml。加入1%硫酸99.5ml，浊度相当于1.5～1.6亿菌数/ml)。用无菌棉拭蘸取菌液，将多余液体于管壁上挤去。在药敏琼脂上从头至尾涂布一遍，转动平板60度，再次涂布，转动至第3次涂布后，沿平板边缘绕涂2周。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆放置数分钟，待其表面液体渗入琼脂后，沿平板四周贴附抗生素纸片，据边缘15mm，两片间距约24mm，平板中心处可贴一片，每份平皿最多可贴7片，35℃培养18～24h后量取抑菌环直径。
1.4 结果
用薄胶尺量取抑菌环直径，应以肉眼见不到细菌明显生长区域为抑菌环边缘。有很难辨认的细小菌落不算，抑菌环内较大菌落需转种出来，确认为同一菌时，可能为耐药株，应重新选择合适抗生素纸片进行药敏试验，分别报告[3]。结果判读用游标卡尺在黑色背景下量取抑菌圈直径，以报告毫米数，检测苯唑西林和万古霉素对葡萄球菌和肠球菌的抑菌圈直径需要用透射光辨认抑菌圈内是否有小菌落；对其他菌落，若抑菌圈内有独立菌落生长考虑菌种不纯或耐药株，需重新鉴定加以证实；变形杆菌在明显的抑菌圈内有薄膜样爬行生长可忽略；对于甲氧苄啶和磺胺测量比较明显的边缘。
2.药敏试验的影响因素
2.1 培养基
不应含抗菌药物拮抗剂；pH应控制在7.2～7.4之问，以避免对部分抗生素活性的影响；琼脂厚度应为4mm，太厚使抑菌环缩小，太薄则扩大；琼脂含量应以试验最后结果符合质控范围为准，培养基用塑袋封装保存，避免水分丧失。
2.2 待检菌
浓度应为1.5亿/ml左右，对于生长速度快的细菌可适当减低，生长速度慢的细菌可适当增加，使最后生长状态为半融合状。应避免使用衰老菌。
2.3 药敏纸片
含量必须准确，抗菌药活性稳定，但市售及保存纸片均可能丧失活性，应经常进行监测。每批纸片应取若干片测定抑菌环片间差，在同一平板上每片纸片出现抑菌环直径差别通常在1～3mm。
3.质量控制
影响试验结果因素较多，综合监测的方法是按照K-B法推荐的标准菌株，采用同样方法对抑菌环变动范围进行监测。凡质控菌不能进入要求范围时，应检查原因。质控菌抑菌环的监测至少每周1～2次，或每批培养基制备时、纸片更换时测定数次。药敏试验可用质控图表示[4]。尽管质控标准菌株比其他一些菌株药敏结果是相对稳定的，但反复多次的传代不可避免地造成菌株的变异。为防止变异，必须将标准菌株冻干保存。在质控中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换。反复传代也易使其敏感性变异，尤其是铜绿假单胞菌(ATCC27853)，将会丢失对脲基青霉素的敏感性。质控菌株应随着临床分离株一起进行药敏试验，质控株的药敏试验结果如果在 NCCLS质控规定范围内，说明实验条件符合要求，结果可信；如不在NCCLS质控规定范围内，则实验中可能存在差错。由于质控允许范围的最大值与最小值是质控株在标准条件下多次重复实验的95％可信限，故20次连续质控结果中仅允许1次落在范围外，但不能偏离质控允许范围中间值4个标准差。常规的药敏质控可连续测定某药对质控株的药敏结果，每天一次，共30天，取得30个值。如果仅有3个值以下超出允许范围，则结果基本可信，可改每周1次。每次失控均要查找原因，纠正后才能发出报告。每当改变试剂、药敏纸片和培养基等时，均要重新进行每天一次，共30天的质控。
【参考文献】
[1]车凌云，张妮.谈纸片扩散法细菌药敏试验的影响因素[J].内蒙古中医药，2011，30(22)：8-9.
[2]苏建荣，马纪平，高乐宁.扩散法细菌药物敏感试验质量控制监测及其评价[J].中华检验医学杂志，2000，23(3)：175-176.
[3]侯艳杰，李发斌，李娜.细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法的室内质控[J].黑龙江医学，2001，25(3)：192-193.
[4]彭碧华，黄海花，梁佩婵，等.纸片扩散法常规检测淋球菌药敏试验可靠性研究[J].实用预防医学，2011，18(7)：1353-1355.
论文作者:徐贺
论文发表刊物:《心理医生》2017年27期
论文发表时间:2017/11/27
标签：纸片论文; 琼脂论文; 细菌论文; 抑菌论文; 菌株论文; 药物论文; 培养基论文; 《心理医生》2017年27期论文;