陶 佳
川北医学院病理教研室 四川 南充 ６３７０００
【摘要】 目的 探讨PLCε１基因在食管癌发生、进展中的作用及机制.方法 随机选取２０１０年１月~２０１５年１月收治的食管癌患者５２０例和健康对照个体５２０例,采集研究对象静脉抗凝血５ml,应用蛋白酶K消化－饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA,并用PCR－LDP方法行基因分型,探讨其于食管癌遗传易感性间的关系.结果 观察组UGIC家族史阳性比例明显高于对照组,差异明显(P＜０．０５);观察组患者,PLCε１基因分型分布符合Hardy－Weinberg平衡(P＞０．０５),携带AG/GG基因型家族史阴性个体、携带AG/GG基因型家族史阳性个体RSCC发病风险较高.结论 食管癌为常见癌变,在发生与进展中,PLCε１基因发挥着重要作用,可作为人群ESCC发病风险标志物之一. 【关键词】 PLCε１基因; 食管癌; 进展; 机制; 研究【中图分类号】R７３５【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０７１６－０２
食管癌为临床常见的癌变类型之一,是环境以遗传因素综合叠加的结果, 感染、吸烟与饮酒等均可增加食管癌的发生几率.在目前的临床研究上,食管癌发生、进展机制研究已经取得了较大成果[１].PLCε１基因为Ras原癌基因效应子,在肿瘤发生、进展中发挥着重要的作用.探讨其在食管癌发生、进展中的作用与机制,对于提高食管癌的预防、治疗具有重要意义[２].本研究通过比较,探讨了PLCε１基因在食管癌发生、进展中的作用与机制,现报道如下. １ 资料与方法
１．１ 一般资料随机选取２０１０年１月~２０１５年１月期间我院附属医院收治的食管癌患者５２０例和健康对照组个体５２０例作为研究对象.食管癌患者均经内镜普查与本地医院经组织学检查确诊,住院或门诊患者,均为鳞状细胞癌.同期,选择健康对照组内镜检查无消化道肿瘤(UGIC)个体.其中,观察组男性３４０例, 女性１８０例,年龄３１~８４岁,平均年龄(６１．５±３．６)岁;健康对照组男性３４１例, 女性１７９例,年龄３２~８２岁,平均年龄(６２．５±２．３)岁.通过询问获取两组患者吸烟习惯、家族史等.两组患者在年龄、性别及血样采集等方面无明显差异(P＞０．０５),存在可比性.
１．２ 方法采集患者静脉血５ml,放置于４℃冰箱中,并于采血７d后提取外周血白细胞DNA.其中,研究对象外周血DNA 提取用蛋白酶K 消化－饱和氯化钠盐析法:(１)将５ml外周血加入冷蒸馏水４５ml,以２５００rpm 速度离心１５min,并弃上清,重复２~３次,直至红细胞全部裂解为止;(２)加入４５ml０．１％Triton－X１００,并以２５００rpm 速度离心１５min,弃上清;(３)加入３mlDNA 提取液,充分混合均匀,并悬浮白细胞;(４)加入１０％SDS１５０ul,剧烈振荡,直至无凝块后;(５)将上清置入另外一个玻璃瓶中,在上清中加入８ml无水乙醇,并混合均匀;(６)弃７０％乙醇,并将Ep管倒置,待乙醇发挥干净后,按照DNA 团块,适量加入TE溶解DNA;在４℃室温中放置２４h以上,待其完全溶解后,测定DNA 纯度与浓度[３].
１．３ PLCε１基因分型分析使用聚合酶链反应－连接酶检测反应(PCR－LDR)分析PLCε１基因分型,分为两种基因类型,即rs２２７４２２３A/GSNP与rs１１５９９６７２T/GSNP[４]. １．４ 计学方法本研究数据均采用SPSS１４．０软件包进行处理,两组基因型频率分布比较使用卡方检验,单体型频率与连锁不平衡分析,采用２LD 与EH 软件分析,以P＜０．０５表示差异显著,非条件Logistic回归分析风险向,以９５％为可信区间. ２ 结果２．１PLCε１基因rs２２７４２２３A/GSNP与食管癌的关联性通过PCR 与LDR 法检测两组患者的rs２２７４２２３A/GSNP 基因型,在对照组中,其符合Hardy－Weinberg平衡(p＞０．０５),对照组rs２２７４２２３A/GSNP频率为６９．５％、A 频率为３０．４％、G等位基因频率为７５．４％,明显低于观察组等位基因频率,差异明显(P＜０．０５),具有统计学意义.按照患者性别、吸烟史与年龄等分层分析,≥６０岁存在较长吸烟史的男性,以及UGIC 家族史阴性个体发生食管癌的危险性较高. ２．２PLCε１基因rs１１５９９６７２T/GSNP与食管癌发生的关联本研究纳入的两组患者的DNA 血样标本,均使用PCR－LDR 法检测rs１１５９９６７２T/GSNP基因型,对照组的基因型符合Hardy－Weinberg平衡(P＜０．０５).其中,PLCε１基因中T、G等位基因的频率分别为７３．４％、２７．１％、７２．５％级２７．１％,与观察组比较,无明显差异(P＞０．０５),即与TT 基因型相比较而言,人群携带TG、GG 与TG/GG基因型,对食管癌的发生的风险没有影响. 经校正研究对象性别、年龄与吸烟史等,根据上述指标分层发现,携带TG/GG基因型对食管癌发生的风险没有影响,携带TT 基因型家族史阳性个体,发生食管癌的危险性较大(OR＝１．４６). ２．３PLCε１基因SNPs连锁不平衡与单体型分布分析通过采用２LD 软件分析PLCε１基因的两种类型,发现两个多态性位点之间,没有出现连锁不平衡状况.在人群中,单体型AT为最常见类型,在对照组中,其分布频率为５５％,明显高于其他单体型频率,差异明显(P＜０．０５),增加了食管癌发生的危险性(OR＝１．３５,９５％CI＝１．０９~１．７２).具体见表１.
表１ PLCε１基因SNPs连锁不平衡与单体型分布与食管癌的关联性
３ 讨论在全球范围内,食管癌是高发的癌变类型之一,属于常见的恶性肿瘤之一.而中国地区是食管癌的高发地区,对人们的健康与生命构成较大威胁.但是多数食管癌患者早期症状不明显,确诊是已经是中晚期,虽然当前的手术治疗水平已有了较大提高,但是患者五年生存率仍旧比较低.所以,为了提高食管癌患者的生存年限,早发现、早诊断和早治疗是关键,可提高病人生存质量,提高患者生存率[５].研究认为,UGIC家族史,会增加食管癌发生、进展的风险,其在食管癌发生与进展中发挥着重要作用. 在磷脂酶C家族成员中,PLCε１基因包括羧基末端两个Ras相关结构域、CDC２５结构域等,受小G蛋白调节,同时也受异源三体G 蛋白调节.所以,对于不同信号,PLCε１基因可以做出相应的反应,而将多个信号进行整合,可参与持续信号的产生.根据本研究的结果,认为在食管癌的发生、进展中,PLCε１ 基因发挥着重要的作用,可作为诊断食管癌的重要指标之一. 综上所述,食管癌为常见癌变类型,在其发生、进展中,PLCε１基因发挥着重要的作用,可作为人群ESCC发病风险标志物,便于疾病的早发现、早诊断与早治疗,提高临床治疗效果,延长患者生存年限,提高生存质量.
参考文献[１] SongC,HuCD,MasagoM,etal．RegulationofanovelhumanphosＧpholipaseC,PLCepsilon,through membranetargetingby Ras．JBiol[ Chem,２００１,２７６(４):２７５２~２７５７． ２] JinTG,SatohT,LiaoY,etal．RoleoftheCDC２５homologydomainofphospholipaseCepsiloninamplificationofRap１－dependentsignaling．J[ BiolChem,２０１１,２７(３２):３３０１~３３０７． ３] 周荣秒．PLCε１基因在食管癌发生、进展中的作用及机制研究[D]．河北医科大学,２０１４． [４] 尚晓庆,赵瑾.李峰．核黄素与食管癌发生的研究进展[J]．现代生物医学进展,２０１３,２３(０９):１２４－１２５． [５] 白伟哲,谭家驹．食管癌发生发展的相关因素最新研究进展[J]．中外医学研究,２０１２,２１(０３):１１０９－１１１０．
论文作者:陶佳
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/29
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