方恋恋 李雪丽 蒋丽华（通讯作者）
（柳州市妇幼保健院 广西柳州 545001）
【摘要】目的：验证与评价全自动化学发光测定仪（AutoLumo A2000）检测巨细胞病毒IgM抗体的性能。方法：参考美国临床和实验室标准协会（CLSI）系列文件和相关文献，并结合厂家要求对AutoLumo A2000化学发光测定仪测定巨细胞病毒IgM抗体的分析灵敏度、精密度、正确度、线性范围、干扰试验进行验证。结果：灵敏度为0.001AU/ml；高值和低值批内精密度分别为4.27%、4.36%，批间精密度分别为6.75%、5.03%；线性相关系数r为0.999；回收实验回收率R为94.21%；临床样本添加1000mg/dl血红蛋白、20mg/dl胆红素、3000mg/dl后测得结果满足偏差均不大于±15%。结论：经验证，巨细胞病毒IgM抗体定量检测系统的各项性能指标均合格，能为临床提供准确可靠的检验结果。
【关键词】性能验证；CMV；IgM；化学发光AutoLumo A2000
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2019）05-0018-02
在我国巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染广泛流行，成人感染率超过95%[1]，然而成人感染常缺乏明显的临床症状，孕妇感染则可能导致流产、胎儿先天性畸形、缺陷或死亡等[2]。巨细胞病毒感染的早期诊断对控制巨细胞病毒传播、促进优生优育、降低器官移植患者死亡率有重要意义。目前国内文献对巨细胞病毒抗体的检测主要为ELISA定性检测[3]，通过化学发光定量检测分析抗体浓度变化，在广西地区并不多见。为了保证新方法检验结果的准确性，现对其进行性能验证，报告如下。
1.材料与方法
1.1 仪器与试剂
AutoLumo A2000化学发光测定仪；巨细胞病毒IgM抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法）（试剂批号20160630）及校准品、质控品，郑州安图生物工程有限公司生产。
1.2 方法
按本室标准操作程序对AutoLumo A2000进行日保养及质控检测，质控结果在控后进行试验操作。
1.2.1灵敏度 将校准品S0作为样本进行检测，重复测定10次，计算均值M、SD，将M+2SD代入linear-log拟合的标准曲线方程中，求出对应的浓度值。
1.2.2精密度
1.2.2.1批内精密性 将高、低值两支混合血清或室内质控品（Q1、Q2）重复检测20次，计算均值，SD，及CV值。
1.2.2.2批间精密性 检测高、低值两支混合血清或室内质控品（Q1、Q2），要求重复测定5天，每天重复4次。计算每个浓度水平的均值，SD，及CV值。
1.2.3线性范围 将接近线性范围上限的高值混合样本（H），用低值混合样本（L）安排不同稀释比例制备出至少3个梯度样本，每份样本重复测定2次，计算出测定均值，与理论浓度按照最小二乘法进行拟合，得出线性回归方程：Y=bX+a，并计算线性相关系数r。
1.2.4准确度验证 将CMV-IgM高值混合样本A加入到低值混合样本B中，样本A与样本B的体积比例为1:9，配置成样本C，分别测量样本A、B和C，各重复2次，计算出测定均值，并计算回收率R。
1.2.5干扰实验 选择不同浓度的三份新鲜临床血清样本进行混合，将每个样本分为四份，一份作为对照组，添加相同体积的生理盐水。另三份再分别各分为两份作为干扰组，一份分别添加1000mg/dl血红蛋白、20mg/dl胆红素、3000mg/dl甘油三酯（应避免引入其它干扰物质，添加物体积相同且不超过样本体积的5%），另一份仅添加相应溶剂。各样本分别重复测定3次，计算浓度均值，并依据公式计算干扰率G。
2.结果
2.1 灵敏度
测得均值5464.2AU/ml，SD为252.67AU/ml，分析灵敏度验证结果0.001AU/ml。
2.2 精密度
高值和低值样品批内精密度（CV%）分别为4.27%、4.36%，批间精密度（CV%）分别为6.75%、5.03%。见表1。
3.讨论
妊娠期发生初次或复发感染，体内产生抗体是一个急剧变化的过程，只有通过定量分析浓度变化才能检测到。部分人群IgM感染后可连续存在数年，阳性并不代表个体正发生急性感染。定量分析有助于鉴别急慢性感染，判断妊娠期初次或复发感染，及及时发现假阳性及假阴性[4]。
根据ISO 15189的相关要求，仪器设备项目在应用于临床之前，都需要对其检验方法和相关程序进行分析性能验证。本实验灵敏度验证结果为0.001AU/ml，符合标准要求：不大于0.1AU/ml，说明仪器灵敏度高；高值和低值批内精密度分别为4.27%、4.36%，批间精密度分别为6.75%、5.03%，符合批内、批间精密度（CV%）标准要求：不大于15%，说明该仪器的重复性好。线性相关系数r为0.999，符合标准要求：r应不小于0.9900，说明检测相关性好，符合实验预期；回收实验回收率R为94.21%，符合标准要求：回收率应在85%～115%范围内，说明检测正确度高；临床样本添加1000mg/dl血红蛋白、20mg/dl胆红素、3000mg/dl后测得结果满足偏差均不大于±15%，说明检测受标本状态影响较小，结果较稳定。
综上所述，本实验对AutoLumo A2000全自动化学发光测定仪检测血清CMV-IgM的灵敏度、精密度、正确度、线性范围和干扰试验进行验证和评价，各项结果均满足厂家声明的分析性能，能够为临床提供可靠、准确的检测结果，有助于育龄妇女孕前和孕早期的优生优育筛查。
【参考文献】
[1] Popovic M，Smiljanic K，Dobutovic B，et al．Human cytomegalovirus infection and atherothrombosis[J]．J Thromb Thrombolysis，2012，33(2):160-172.
[2]曾庆贺，董加秀，孟艳，等.人巨细胞病毒感染的流行病学研究进展[J].山东医药，2017,57(12):110-112.
[3]刘聪，戴薇，肖德俊，等.巨细胞病毒感染诊断方法的研究进展[J].实验与检验医学，2014，32(6）:703-766.
[4]全军计划生育优生优育专业委员会.妊娠期ToRCH筛查指南[J].解放军医药杂志，2014，1(26):102-116.
基金项目：广西壮族自治区卫生和计划生育局自筹经费科研课题，合同号Z20170526.
论文作者:方恋恋,李雪丽,蒋丽华（通讯作者）
论文发表刊物:《心理医生》2019年第5期
论文发表时间:2019/3/27
标签：样本论文; 精密度论文; 抗体论文; 灵敏度论文; 线性论文; 巨细胞论文; 浓度论文; 《心理医生》2019年第5期论文;