金桩[1]2004年在《降血脂蒙药荜茇有效成份的研究》文中提出高血脂症是动脉粥样硬化(AS)的首要危险因素。AS所致的心血管疾病是当前危机人类健康和生命的主要疾病之一。高血脂症与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)、高血压、脑血管病、糖尿病、肾脏病和甲状腺机能减退症密切相关。 全世界已开发了40多种调脂药。但目前研究最多，疗效获得公认的有两中，即他汀类(statins)和贝特类(fibrate)。他汀类(statins)药物主治高胆固醇症，而贝特类(fibrate)药物主治高甘油叁酯症。研究证实，降血脂药的应用可减少心脏病死亡率24％，减少非致死性心脏病发作率19％。降脂药能延缓或减轻AS病变的发展，并促进其消退。 截止目前，尚无完全满意的能够纠正脂质代谢异常的药物。某种药物可能只纠正某类脂质代谢异常，通常需要长期服药，且都具有一定的副作用。而我们所研究的传统蒙药材荜茇经临床观察证明具有明显的降血脂作用，以往的临床应用没有发现毒副作用。 因此，我们本着从蒙药荜茇中分离降血脂活性最佳的化合物，经过不断的努力，已筛选出了一系列有可能具有显着降血脂作用的化合物。 我们首先用无水乙醇提取荜茇果实，浓缩，即荜茇乙醇提取物，命名为PP1。 以大小白鼠作受试动物，验证高脂饲料和PP1的降血脂作用。结果表明，高脂饲料能显着升高血清总胆固醇(高脂饲料对照组与空白对照组比较，大白鼠，P二9.987E一08，小白鼠，P=2.829E一09)，但对大白鼠血清甘油叁酷影响甚小，对小白鼠血清甘油叁醋有降低作用，PPI降低血清总胆固醇(与高脂饲料对照组比较，大白鼠，P=0 .021，小白鼠，P=0 .053)，都升高大白鼠和小白鼠血清甘油叁酉旨。 在硅胶(60一200目)柱上用正己烷:乙酸乙醋(1.5:1)来洗脱PPI，得到6个组份，按其洗脱顺序分别命名为F1、F2、F3、F4、FS、F6，然后用无水乙醇来洗脱得到F7。 以大白鼠作受试动物，通过药理实验，初步筛选有明显降血脂作用的组份，它们分别是F3和F4+5(因F4的含量少，且F4和F5很难分离，故F4和F5的混合物来作受试药物)。验证试验证明，F4十5的降血脂作用最显着，降低血清总胆固醇(与对照组比较，P=0 .002)，降低血清甘油叁醋(与对照组比较，P=0 .012)，明显好于辛伐他汀(Simvastatin)，辛伐他汀(SIInvastatin)降低血清总胆固醇 (与对照组比较，P==0 .242)，升高血清甘油叁醋。 在硅胶(100一200目)柱上，用正己烷:乙酸乙酷(1 .5:l)来洗脱F4巧，得到3个组份，每个组份在同样的条件下再过柱一次，即F4、F5(l)、FS(2)(从高效液相色谱图看出是粗F6的主要成份)，把F4和FS(2)在甲醇里重结晶，分别得到白色针状结晶和黄色结晶，FS(1)为黄色浑浊的液体。高效液相色谱仪来分析F4、FS(2)和FS(1)，表明F4和FS(2)为纯物质，且FS(2)和胡椒碱有同一个保留时间，而FS(l)是两个大峰和两个小峰，一个大峰跟胡椒碱有同一个保留时间。 以大白鼠作受试动物，研究F5(l)的降血脂作用，结果表明降低血清总胆固醇(与对照组比较，FS(l)，p=0.203，辛伐他汀，p=0.226)，降低血清载脂蛋白B(与对照组比较，FS(l)，P=0 .115，辛伐他汀，P为.355)，升高血清高密度脂蛋白胆固醇(与对照组比较，FS(x)，P=0.149，辛伐他汀，p=0.629)，降低血清脂蛋白(a)(与对照组比较，FS(1)，p=0.056，辛伐他汀，p=0.441)，而血清甘油叁酷、载脂蛋白A和低密度脂蛋白胆固醇项上与辛伐他汀一样几乎无作用。 以大白鼠作受试动物，研究胡椒碱和乳化剂tween一80的药理作用，结果表明胡椒碱降低血清总胆固醇(与对照组比较，P=0 .054)而辛伐他汀没有降低血清总胆固醇，降低血清甘油叁酷(与对照组比较，胡椒碱，P=0 .243，辛伐他汀，卜0.039)，tween一80稍微降低了血清总胆固醇(与对照组比较，P=0 .543)，稍微升高了血清甘油叁酷。 用高效液相色谱仪来分离FS(l)，收集最大的峰，保留时间为26.2 1 7min，命名为FS(11)。 以大白鼠作受试动物，研究FS(11)、F4及F5(2)的药理作用。结果表明F4 (与对照组比较，P=0.378)和FS(2)(与对照组比较，P=0.519)稍微降低了血清总胆固醇，而F5(H)升高了血清总胆固醇。F5(11)显着降低了血清甘油叁酷(与对照组比较，P=0.037)，而F4(与对照组比较，P=O.054)和FS(2)(与对照组比较，P=0 .062)一定程度地血清甘油叁酷。其它项上几乎无作用。 分别把FS(11)、r4和FS(2)命名为GBJ一1、GBJ一2和GBJ一3。从’3e哪R、IHNMR、2DN’MR(Hc0SY，HMQC，DEPT，HMBC)、元素分析、质谱图，红外光谱图、紫外光谱图推测出，GBJ一l为pipemonaline，eZ，H27NO3，GBJ一2为Piperlonguminine，C】6H19NO3，GBJ一3为胡椒碱(piperine)，C，7H19NO3。
领小[2]2008年在《胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究》文中认为胡椒碱是荜茇中提取的有效成分之一。胡椒碱衍生物是以胡椒碱作为原料，用化学方法合成的一系列胡椒碱衍生物。荜茇是胡椒科植物荜茇(Piper longumL．)的未成熟果穗，是常用于中、蒙、藏药。临床研究证明荜茇具有明显的降血脂作用。内蒙古大学蒙药研究所从荜茇中得到胡椒碱及与胡椒碱具有类似化学结构的胡椒碱衍生物，发现其中的胡椒碱和荜茇宁具有显着降血脂活性。另外，根据胡椒碱和荜茇宁的分子结构，以胡椒碱为原料合成了一系列胡椒碱衍生物。胡椒碱衍生物中胡椒酸乙酯(简称为GBA)的降血脂活性好，毒性非常小，具有开发成降血脂创新一类药的研究价值。以开发新药为目的研究胡椒碱衍生物时，寻找和确定一种能够快速、简便、精确、高效地检测胡椒碱衍生物的分析方法是十分必要。另外在研究胡椒碱衍生物的药物代谢和作用机理方面有必要研究生物体内血液中胡椒碱衍生物与血清白蛋白的结合情况等基础研究工作。首次详细研究了金属离子存在下，胡椒碱在胶束体系中的荧光特性，以及实验条件对荧光强度的影响，建立了灵敏度较高、稳定性较好的荧光分析新方法。实验结果表明：阳离子表面活性剂溴化十六烷基叁甲基铵对锰(Ⅱ)-胡椒碱的荧光具有增敏作用。胡椒碱的质量浓度在2．02～10．1μ·mL~(-1)范围内，与其荧光强度呈良好的线性关系，检出限为0．0602μ·mL~(-1)，相对标准偏差为1．10％。该方法应用于蒙药荜茇中胡椒碱的测定，结果满足分析要求。研究发现非离子表面活性剂OP-10对荜茇宁的荧光有明显的增敏作用，据此首次建立了测定荜茇宁的荧光分析新方法。实验结果表明：荜茇宁的质量浓度在2．0-16．0μg·mL~(-1)范围内，与其荧光强度呈良好的线性关系，检出限为0．065 1μg·mL~(-1)，方法的相对标准偏差为1．40％。该方法应用于蒙药荜茇中荜茇宁的测定，结果令人满意。采用荧光光谱及紫外光谱法研究了胡椒碱、荜茇宁和GBA与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。确定胡椒碱、荜茇宁和GBA分别都与BSA形成复合物，从而猝灭BSA的内源性荧光。猝灭的主要原因是静态猝灭和非辐射能量转移作用。计算得到胡椒碱、荜茇宁和GBA与BSA的结合常数K_A，分别为1．02×10~7L·mol~(-1)(25℃)和1．11×10~7L·mol~(-1)(37℃)；2．40×10~5 L·mol~(-1)(25℃)和1．01×10~6 L·mol~(-1)(37℃)；9．48×10~5 L·mol~(-1)(25℃)和1．36×10~6 L·mol~(-1)(37℃)。得到胡椒碱、荜茇宁和GBA与BSA结合位点数n，分别为1．45(25℃)和1．46(37℃)；1．10(25℃)和1．24(37℃)；1．18(25℃)和1．24(37℃)。根据Forster偶极-偶极非辐射能量转移理论得到胡椒碱、荜茇宁和GBA与BSA的结合距离r，分别为3．28 nm(25℃)和3．30nm(25℃)；3．12 nm(25℃)和3．15 nm(37℃)；2．68 nm(25℃)和2．81 nm(37℃)。通过热力学参数的计算，确定胡椒碱、荜茇宁和GBA与牛血清白蛋白的相互作用均是一个熵增加和吉布斯自由能降低的自发过程。根据热力学参数与作用力之间的关系，确定主要作用力为疏水作用力。通过同步荧光光谱研究了BSA构象的变化。并进一步讨论了常见金属离子对胡椒碱衍生物与BSA的相互作用的影响。采用荧光光谱及紫外光谱法研究了胡椒碱、荜茇宁和GBA及胰蛋白酶(trypsin)的相互作用。确定胡椒碱、荜茇宁和GBA与胰蛋白酶形成复合物从而猝灭胰蛋白酶的内源性荧光。猝灭原因主要为静态猝灭和非辐射能量转移。计算得到胡椒碱、荜茇宁和GBA与胰蛋白酶的结合常数K_A，分别为9．29×10~5L·mol~(-1)(25℃)和1．44×10~6 L·mol~(-1)(37℃)；1．19×10~6 L·mol~(-1)(25℃)和9．57×10~5L·mol~(-1)(37℃)；1．66×10~6 L·mol~(-1)(25℃)和5．05×10~5L·mol~(-1)(37℃)。根据Forster非辐射能量转移理论得到胡椒碱、荜茇宁和GBA与胰蛋白酶的结合距离r，分别为2．79nm(25℃)、3．02 nm(37℃)；3．08 nm(25℃)、2．93 nm(37℃)；3．04 nm(25℃)、2．99nm(37℃)。根据热力学参数与作用力之间的关系，确定了胡椒碱衍生物与胰蛋白酶的主要作用力，胡椒碱与胰蛋白酶的主要作用力为疏水作用力；荜茇宁与胰蛋白酶的主要相互作用力为静电相互力；GBA与胰蛋白酶的主要相互作用力为范德华力。并确定胡椒碱、荜茇宁与胰蛋白酶的相互作用是一个熵增加和吉布斯自由能降低的自发过程。
参考文献：
[1]. 降血脂蒙药荜茇有效成份的研究[D]. 金桩. 内蒙古大学. 2004
[2]. 胡椒碱衍生物的荧光分析与蛋白的相互作用研究[D]. 领小. 内蒙古大学. 2008
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