兔动脉粥样硬化斑块细胞成分与斑块易损性的关系论文_刘洋1许金鹏2刘福林2

刘洋1许金鹏2刘福林2

（1保定市第二医院心外科河北保定071000；

2河北大学附属医院心脏科河北保定071000）

【摘要】目的:测量实验性动脉粥样硬化斑块平滑肌细胞及巨噬细胞含量，为控制斑块易损性提供理论依据。方法:新西兰雄性白兔8只，制作动脉粥样硬化模型。处死取出腹主动脉，测量动脉粥样硬化斑块纤维帽厚度，并计算纤维帽的厚度与脂核横截面厚度的比值；测量斑块平滑肌及巨噬细胞负荷；进行相应指标之间的相关性分析。结果:斑块纤维帽厚度以及帽/核比值与平滑肌细胞含量呈正相关关系，而与巨噬细胞负荷均呈负相关关系。结论:动脉粥样硬化斑块内平滑肌细胞及巨噬细胞负荷会造成斑块形态学改变，从而影响斑块易损性，造成斑块不稳定。

【关键词】动脉粥样硬化斑块；巨噬细胞；平滑肌细胞；易损性

【中图分类号】R3211【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)10-0462-01

动脉粥样硬化斑块是导致冠心病和缺血性脑卒中的主要原因。粥样硬化斑块破裂，可以诱发血小板瀑布反应，聚集形成血栓，这是导致急性心脑血管事件的最主要原因。动脉粥样硬化斑块的组织结构与斑块是否易于破裂直接相关，对于易于发生破裂、诱发血栓形成的斑块，我们称之为“易损斑块”。斑块细胞成分的变化在斑块的易损性中究竟有何作用？本研究探讨斑块平滑肌细胞及巨噬细胞含量与斑块易损性的关系，为改善斑块易损性探索理论依据。

1资料与方法

11实验动物:雄性新西兰白兔8只，平均体重325kg，均为12月龄。饲以含2％胆固醇的高脂饲料，饲养两周后行球囊拉伤，制作动脉粥样硬化模型。

12动脉粥样硬化动物模型:给予高脂饲料后，使用4F Forgaty球囊拉伤实验动物的胸腹主动脉。术后继续给予含2％胆固醇的高脂饲料，共饲养15周后处死。

13离体动脉粥样硬化标本:处死及解剖实验动物，取出主动脉。暴露主动脉内动脉粥样硬化斑块，大致按照斑块病变的分布将主动脉分为若干份。

14斑块标本组织染色及斑块组织结构测量动脉标本缓冲福尔马林固定。石蜡包埋，连续切片。HE染色，采集图像（CIMAS多功能真彩色病理图像分析系统）。测量斑块纤维帽厚度，并测量每个纤维帽的厚度与脂核横截面厚度的比值。斑块取多点测量，计算平均值。

15标本细胞成分免疫组化:应用α-actin单克隆抗体标定平滑肌细胞。巨噬细胞免疫组化采用SABC法。使用RAM-11（DAKO公司）标定巨噬细胞。每例斑块标本取4张免疫组化切片，进行平滑肌细胞肌动蛋白和巨噬细胞免疫组化定量，使用CIMAS多功能真彩色病理图像分析系统进行图像采集。计算机测定阳性表达区域灰度值，灰度值越高，阳性表达量越低。计算目标面积/统计场面积(面密度)定量平滑肌细胞及巨噬细胞负荷。

16统计学分析:使用SPSS160软件进行统计学分析，测量结果以均数±标准差（χ±s）表示。维系细胞结构稳定，纤维帽厚度及帽/核比值均具有重要作用。故做两者与平滑肌细胞、巨噬细胞负荷之间的相关性分析。

2结果

21斑块组织结构测量:按照AHA动脉粥样硬化病灶分型，动脉粥样硬化分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型。分别为初始病变、脂质条纹病变、粥样瘤前期病变、粥样瘤、纤维粥样瘤、并发病变。其中，Ⅳ至Ⅵ型为不稳定病变。标本中共检出14例Ⅳ或Ⅴ型病变，测量其纤维帽厚度，及纤维帽厚度与脂核横截面厚度比值。测量数值如表1。

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表1斑块组织结构测量（χ±s）

标本纤维帽厚度（μm）纤维帽厚度/脂核

横截面厚度130488±214200824±00025237745±302201551±00085341583±381401212±00075439427±425201548±00079520246±204301205±00043637785±294301115±00035719943±278200471±00032818255±314200586±00029929452±168800775±000421025965±423000731±000311133695±268701085±000231244624±372501809±000351346587±522601656±000231431254±436400791±0002822细胞成分免疫组化:平滑肌细胞及巨噬细胞分布区域不同，前者主要分布在斑块表面，而后者分布主要在脂核内，在斑块表面分布很少。斑块平滑肌细胞与巨噬细胞负荷见表2。

表2斑块凋亡指数（χ±s）

标本平滑肌细胞面密度巨噬细胞面密度10156901952202384004333017360100240259800973501536009886026720119670125802603801425027559018450238110015900235811019880173012030010044813028150052914021280158523统计学分析:相关性分析显示，斑块纤维帽厚度与平滑肌细胞负荷呈正相关（r=086，P＜0001）；帽/核比值与平滑肌细胞负荷亦呈正相关（r=083，P＜0001）。斑块巨噬细胞负荷与纤维帽厚度呈负相关，其与帽/核比值亦呈负相关，帽/核比值与巨噬细胞负荷的相关性（r=-094，P＜0001）强于纤维帽厚度与之的相关性（r=-078，P=0001）。

3讨论

Framingham研究显示，50%的急性心肌梗死患者在梗死发生前，没有任何可供提起警示的临床症状。这种突发的心脑血管事件，与动脉粥样硬化斑块破裂，诱发血栓形成关系密切。对于这种易于破裂导致急性血管事件的斑块，2003年，Morteza Naghavi等50余名专家［1］发表的一份国际共识性文件建议将其统一命名为易损斑块(vulnerable plaque)，指易于形成血栓或迅速发展造成临床症状的病变。易损斑块常有以下病理学特征：（1）纤维帽相对较薄。（2）斑块内容物相对较多。（3）斑块纤维帽和内部有大量单核/巨噬细胞浸润。

纤维帽是斑块的物理屏障，它的组成和厚度，决定了斑块是否易于发生破裂。在诸多因素中，斑块纤维帽的易损性相当重要，如果纤维帽变薄，斑块将易于破裂诱发血栓形成［2］。多数学者认为，纤维帽厚度小于65μm为其“变薄”的界限。另一个影响斑块易损性的因素，是斑块脂质核心的相对大小。脂质核心与纤维帽不同，具有可流动性，不承受应力，这使周向应力转移到纤维帽上，由此可以理解，若脂核越大纤维帽越薄则斑块越容易破裂。因此，脂核与纤维帽的比例对斑块破裂起着十分重要的作用，这一比例越大，斑块越易破裂［3］。平滑肌细胞可以产生胶原，加固纤维帽，而巨噬细胞形成泡沫细胞后会增加脂质核心的大小，从而影响斑块的组织结构。

本研究显示，易损斑块纤维帽厚度以及帽/核比值均与平滑肌细胞负荷呈正相关，而与巨噬细胞负荷呈负相关。这说明，平滑肌细胞的增加改变了纤维帽的厚度，影响了帽/核比值，从而使斑块更加稳定，而巨噬细胞含量增加，导致泡沫细胞含量增大，最终使脂核相对变大，造成斑块更加易损。

综上所述，不同细胞成分的改变会造成斑块形态结构的变化，并最终影响斑块易损性，造成斑块易于破裂形成血栓。所以，增加平滑肌细胞含量、降低巨噬细胞含量将有助于控制易损斑块的进展，从而控制临床急性血栓事件的发生。

参考文献

［1］Naghavi M,Libby P,Falk E,et al.From vulnerable plaque to vulnerable patient.A Call for new definitions and risk assessment strategies:Part I［J］.Circulation,2003;108:16641672

［2］Virmani R,Kolodgie FD,Burke AP,Farb A,Schwartz SM.Lessons from sudden coronary death:a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol.2000;20:12621275

［3］Li TT,Xie Y,Guo Y,et al.Effect of probucol on vascular remodeling due to atherosclerosis in rabbits:an intravascular ultrasound study.Chin Med J (Engl).2011 Jun;124(12):1840

论文作者:刘洋1许金鹏2刘福林2

论文发表刊物:《河南中医》2013年10月第2期供稿

论文发表时间:2014-3-19

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