徐祥 徐谊 潘琪 黄耀元 左传田 潘泓（通讯作者）
（广西医科大学附属肿瘤医院胸瘤外科 广西南宁 530021）
【摘要】目的：探讨SATB1在人肺癌组织中表达情况及意义。方法：收取48例肺癌组织及癌旁正常组织，用qRT-PCR方法检测非小细胞肺癌组织与癌旁正常组织SATB1的表达情况，分析SATB1 mRNA表达与临床病理参数之间的关系。结果：SATB1 mRNA在癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05)，与分化程度、病理分期、淋巴转移呈负相关（P<0.05），而与病人年龄、性别、组织类型无明显相关（P>0.05）。结论：SATB1m RNA的表达水平可能与非小细胞肺癌发生发展及转移有关，有望成为判断非小细胞肺癌预后的一个指标。
【关键词】非小细胞肺癌；SATB1；qRT-PCR；预后
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2019）05-0023-03
Expression of SATB1 in NSCLC and the clinical influence
Xu Xiang, Xu Yi, Pan Qi, Huang Yaoyuan, Zuo Chuantian, Pan Hong(Correspondence author).
Department of thoracic surgery , Affiliated Tumor Hospital of Guangxi Medical University, Nanning China 530021
【Abstract】Objective To explore the expression and significance of SATB1 in human lung cancer tissues. Methods We collected 48 lung cancer tissues and adjacent normal tissues. The expressions of SATB1 mRNA were detected by using qRT-PCR in NSCLC samples and its adjacent tissues from the same cases, and analyze the relationship between SATB1 mRNA expression and clinicopathological parameters. Results The expression of SATB1 mRNA in cancer tissue was significantly lower than that in the adjacent tissue (P<0.05). It was negatively correlated with differentiation degree, pathological stage, and lymph node metastasis (P<0.05). There was no significant correlation between gender, age and histology (P>0.05). Conclusion SATB1 mRNA expression in NSCLC might be associated with the development and metastasis and it may be potentially an indicator to determine the prognosis of NSCLC.
【Key words】NSCLC;SATB1; qRT-PCR; Prognosis
引言
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，每年新确诊的肺癌病人及死亡病人居高不下，死亡率更是占恶性肿瘤的首位，相当一部分患者确诊时已是晚期，只能采取保守治疗，错过了最佳治疗时期，其五年生存率不足15%，严重威胁着人类生命和健康[1]。肺癌有小细胞肺癌和非小细胞肺癌两种亚型，其中，非小细胞肺癌占80%以上，其发生发展机制一直是研究的热点。近年来，随着测序手段及TCGA等大数据的推进，我们通过筛查TCGA及MET500转录组测序数据，发现核基质结合区结合蛋白质1（SATB1）在肺鳞癌或肺腺癌中表达有明显的差异。本研究基于TCGA数据库，以非小细胞肺癌患者为研究对象，采用qRT-PCR的方法，检测SATB1在非小细胞肺癌中的表达，分析SATB1 mRNA基因表达与临床病理参数之间的关系，进一步了解SATB1在NSCLC中的价值。
1.材料和方法
1.1 组织标本来源
本实验采用的标本来源于2013年1月至2014年12月在广西医科大学附属肿瘤医院患者，患者术前均未行放化疗，行手术切除病理证实为非小细胞肺癌，共48例，其中男性35例，女性13例，确诊的肺腺癌29例，肺鳞癌19例，每组标本包括癌组织及相应的癌旁正常肺组织（距肿瘤边缘5cm收取）。所有标本离体后立即置于液氮壶中，并及时保存于-80℃冰箱中，标本由广西医科大学附属肿瘤医学院实验研究部标本库提供。
1.2 荧光定量qRT-PCR的检测SATB1的表达
本实验采用的试剂均Takara公司产品，包括Trizol RNA抽提试剂，PrimeScriptTM逆转录试剂盒，SYBR Premix Ex TaTM荧光试剂，引物利用Primer Premier 5.0软件设计，由宝生物公司（大连）合成。以GAPDH为内参。设计引物序列：SATB1：F：5'-CTCCCAGGCGGTATTTGCAC-3'，R：5'-AAATTCTGCATAGCCCGAAGGTTTA-3'，片段长132 bp。内参GAPDH：F：5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'，R：5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA -3'，片段长度80bp。取得的癌组织及相应的癌旁（距肿瘤5cm边缘）正常肺组织，应用Trizol试剂盒，按RNAiso Plus说明书要求提取总RNA，用紫外分光光度计检测RNA的纯度和浓度，所提RNA吸光度A260/280比值范围在1.8～2.0，经琼脂糖电泳检测总RNA的完整性，可见明显的28S、18S两条区带，则表明总RNA纯度及完整性好。PCR反应条件为60度两步法，95℃预变性30s，PCR阶段95℃变性5s，60℃延伸30s，共40个循环；最后记录溶解曲线。每个样品三个副孔，统计分析各样本SATB1的表达。
1.3 数据处理统计学分析
统计软件用SPSS22.0统计软件进行数据分析，计量数据以（x-±s）表示，计数资料采用χ2检验，组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异显著，有统计学意义。2-ΔΔT处理qRT-PCR数据，其数值表示目的值相对于参照值的相对倍数，使用GraphPad prism软件进行作图。
2.结果
2.1 实时荧光定量PCR检测SATB1表达量
各样本扩增曲线都到达平台期，熔解曲线未检测到引物二聚体及其他非特异性荧光信号。分析29例肺腺癌组织与癌旁组织SATB1表达量，以及19例肺鳞癌组织与癌旁组织SATB1的表达量，检测结果经配对t检验显示肺腺癌和肺鳞癌的癌旁组织SATB1表达显著高于癌组织（P＜0.05）（图1），结果具有统计学意义。
图1 SATB1 mRNA在肺腺癌和肺鳞癌中的表达差异
2.2 TCGA及MET500转录组测序数据中SATB1的表达
我们查询TCGA数据库及MET500转录测序数据中SATB1的表达，发现SATB1在肺腺癌组织中低表达（图2），差异具有统计学意义（P=1.97e-12），且SATB1在肺鳞癌中低表达（图2），差异具有统计学意义（P=1.63e-12），与我们实验结果相符合，我们可以推测SATB1在非小细胞肺癌中扮演这抑癌基因的作用。
图2 TCGA数据库中SATB1在肺腺癌和肺鳞癌中的表达
2.3 SATB1m RNA的表达与临床病理参数相关性分析
分析SATB1表达量与临床病理参数之间的关系，采用△CT值进行分析，△CT越低表明基因的表达量越高，可以看出癌症分期越晚，有淋巴结转移的SATB1的表达量越低，分化程度越好的SATB1表达量越高，表明SATB1的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移相关（P＜0.05），而与性别、年龄、组织学类型无关（P＞0.05）（表1）。
表1 SATB1 mRNA的表达与临床病理参数的相关性
CharacteristicnSATB1mRNA （△CT）P-val
Age
≤60246.83±1.65
＞60247.63±1.810.564
Gender
Male357.23±1.93
Female137.25±1.250.745
TNM stage
Ⅰ+Ⅱ356.79±1.63
Ⅲ+Ⅳ138.43±1.600.015
Lymphaticmetastatic
-306.43±1.3
+188.57±1.640.000
differentiation
poor377.42±1.90
well116.61±0.970.036
3.讨论
SATB1基因位于3号染色体3p23区，是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白，全长763个氨基酸，其包含有两个CUT基序，能够形成类似PDZ结构二聚体，与核基质结合区（MAR）序列亲和力高而结合，从而影响DNA环的构建，参与了包括组蛋白乙酰化、染色体重塑、甲基化等过程[2]。多数研究显示SATB1在肿瘤组织中高表达。Han等[3]在乳腺癌的体外实验中发现SATB1能上调与细胞转移有关的基因，并且与多重耐药有关，同时能下调抑癌基因，导致出现侵袭性表型，从而促进肿瘤发生发展和转移；在恶性程度较高的乳腺癌样本能表达SATB1蛋白，对1318例乳腺癌病人的组织学样本进行分析，结果表明SATB1高表达病人总生存期缩短。有研究显示SATB1在胰腺癌中高表达，且SATB1可作为预测一线癌患者预后的独立因素[4]。然而也有结论相反的报道，Selinger CI等研究显示SATB1表达的缺失与肺鳞癌预后不良有关，推测SATB1基因通过组蛋白修饰而被表观遗传学沉默[5]。近期的一项关于SATB1与肺癌的一项研究表明，SATB1高表达的NSCLC患者总体生存期更好，并且SATB1在不同的NSCLC亚型中起着不同的作用，推断其表达可能对这些肿瘤患者预后具有重要意义[6]。
本次研究通过qRT-PCR技术，检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织中SATB1m RNA的表达，结果表明，SATB1m RNA在癌旁组织中的表达水平比癌组织明显升高，差异有显著性，SATB1在非小细胞肺癌中扮演者抑癌基因的作用，提示SATB1基因表达与NSCLC的发病可能有一定关联。SATB1 mRNA在非小细胞肺癌组织的表达水平与分化程度、病理分期、淋巴转移显著负相关，而与性别、年龄、组织类型无关，SATB1表达量越低，患者淋巴转移的可能性越大、分化程度越低、肿瘤分期越晚，恶性程度越高，表明SATB1基因表达与NSCLC的发展及侵袭可能有一定关联性。同时我们通过查找TCGA数据库和MET500转录组测序数据（UALCAN）发现SATB1在非小细胞肺癌中癌旁正常组织明显高于癌组织[7]，与我们实验结果相符合。
综上所述，我们认为SATB1在肺癌的发生发展中有潜在的作用，值得进一步探讨。
【参考文献】
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基金项目：国家自然科学基金项目（81402306）
论文作者:徐祥,徐谊,潘琪,黄耀元,左传田,潘泓（通讯作者）
论文发表刊物:《心理医生》2019年第5期
论文发表时间:2019/3/27
标签：肺癌论文; 组织论文; 细胞论文; 病理论文; 腺癌论文; 基因论文; 肿瘤论文; 《心理医生》2019年第5期论文;