吕新跃[1]1997年在《北京鸭载脂蛋白AI、树鼩载脂蛋白AI、CI三个cDNA的克隆、测序及组织分布》文中研究说明载脂蛋白AI(apoAI)是血浆高密度脂蛋白(HDL)中的主要蛋白质，约占HDL蛋白组份的70％。流行病学调查显示：血浆中HDL和apoAI水平与冠心病的发病呈明显负相关。apoAI参与胆固醇逆向转运，在脂蛋白代谢及抗动脉粥样硬化(AS)方面发挥极其重要的作用。 北京鸭和树鼩(tree shrew，Ts)是王克勤等人在80年代发现的两种不易感AS动物模型，在国际上独具特色。北京鸭和TS血浆均富含HDL及apoAI，卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性也明显高于人及其他哺乳类动物，胆固醇酯转移蛋白(CETP)的活性则明显降低。长期喂饲高脂饮食，也不易形成动脉粥样硬化斑块。与国外学者合作，已测定了北京鸭apoAI全部氨基酸序列，但其基因结构特别是决定血浆高水平apoAI的基因表达调控机制尚不清楚。获得两种不易感AS动物apoAI及其他apos的cDNA序列是进一步研究其载脂蛋白基因结构和表达调控机制的基础。 本论文旨在利用分子克隆技术，在国际上率先获得了北京鸭和TS两种不易感AS动物apoAI以及TS apoCI的cDNA序列，推译出它们的蛋白序列，并检测了上述apos在各组织的表达分布。 首先，应用超速离心、柱层析和电泳技术分离纯化了不易感AS动物北京鸭血清apoAI，并以纯化的鸭、TS apoAI为抗原，制备了兔抗鸭，兔抗Ts apoAI的多抗血清，其效价分别为1 X10~5、1 X10~(4-5)。Western blot显示这两种多
尹银亮[2]1995年在《北京鸭载脂蛋白apoA-I结构与功能的研究》文中进行了进一步梳理载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)是高密度脂蛋白(HDL)中最重要的载脂蛋白。在脂蛋白代谢及抗动脉粥样硬化中发挥着重要的作用。近年来，国内外的研究在apoA-Ⅰ的结构与功能定位等方而有了许多重要的进展。我实验室长期从事对不易感动脉粥样硬化动物北京鸭脂蛋白代谢及其重要载脂蛋白的结构与功能的研究。本项实验对北京鸭apoA-Ⅰ的分子结构和功能特点及其功能域定位进行了研究，以求从分子结构上对apoA-Ⅰ在脂蛋白代谢中的作用机理有进一步的认识。 我们对超速离心所分离的鸭血清脂蛋白进行了电镜观察、梯度凝胶电泳、LCAT活性测定及总胆固醇测定，发现鸭HDL颗粒多呈圆球状，大小均一，直径为9nm左右，梯度凝胶电泳结果与此相似。LCAT活性在脂蛋白间的分布为：VLDL0％、LDL9.9％、HDL34.65％及LDS54.45％。鸭血清中总胆固醇浓度为145.8mg／d1，其中HDL含中65％。鸭apoA-Ⅰ能与DMPC及Cho1重组形成三种大小的脂质休，脂质体较无脂apoA-Ⅰ具有较强的激活LCAT的能力。我们认为，鸭HDL中携带大量的总胆固醇且具有较高的LCAT活性，胆固醇在HDL中容易被酯化，新生的HDL易于转化成成熟的HDL，apoA-Ⅰ在其中起着重要作用。这一实验结果为王克勤提出的鸭血清中胆固醇主要由HDL携带运输而通过HDL受体途径代谢的假说提供了进一步的证据。 我们对鸭apoA-Ⅰ的AA与人及其它动物apoA-Ⅰ的AA组成、序列进行了比较和同源性分析，它们在AA组成大体相似，但鸭apoA-Ⅰ中疏水性AA及带正负电荷AA总数更多。鸭apoA-ⅠAA序列与人及其它哺乳动物的同源性在50％左右。种属越近，apoA-Ⅰ的AA序列同源性越高，鸭apoA-Ⅰ分子的疏水性明显较人强，鸭apoA-Ⅰ中，70％的序列可以形成α-H。鸭apoA-Ⅰ分子中存在着10个被pro分隔开的11／22AA重复序列，都能形成较规则的双性α-H(AH)。大多数AH的疏水面较人apoA-Ⅰ相应位置的AH疏水面大而疏水性强，正负电荷的分布也较人
吕新跃, 陈保生, 王克勤[3]1998年在《北京鸭载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达》文中认为目的:克隆不易感动脉粥样硬化动物北京鸭载脂蛋白AI的基因。方法:分离提取北京鸭肝组织mRNA,以此为模板,反转录构建了鸭肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗鸭载脂蛋白AI(apoAI)多抗血清为探针筛选该文库,获得10个阳性克隆,测序及序列分析。结果:包括18bp、240bp组成的5’和3’非翻译区,792bp组成的一个完整开放阅读框架,编码264个氨基酸的鸭apoAI前体,含18个氨基酸构成的信号肽、6个氨基酸的原肽片段和240肽的成熟蛋白。推译出的成熟肽与鸭apoAI氨基酸的直接测序结果完全一致。该新基因已被GenBank接受。Northern blot显示鸭apoAI mRNA不仅主要在肝和小肠组织表达;而且不同于人和哺乳类动物,亦可少量在脑、肾、肌肉组织分布。结论:结果为进一步研究不易感动脉粥样硬化动物北京鸭apoAI基因组结构、功能及其抗动脉硬化机制奠定了基础。
江勇[4]2018年在《苏氨酸对北京鸭脂质代谢的影响及其调控机制》文中认为本研究通过5个试验,从生长性能、屠宰性能、脂质沉积、肝脏脂肪酸组成以及基因表达等方面,系统、深入地研究饲粮苏氨酸对不同品系和不同阶段北京鸭脂质代谢的影响及其调控机制。试验一研究苏氨酸在不同饲粮蛋白质水平下对北京鸭脂质沉积的影响。试验设置3个蛋白质水平(16%、19%和 22%)和 5 个苏氨酸水平(0%、0.07%、0.14%、0.21%和 0.28%),共 15 个处理。试验期为1-21日龄。结果表明,饲粮中添加苏氨酸在3个蛋白质水平下都可以提高北京鸭生长性能和胸肌率;苏氨酸添加组北京鸭血浆中部分氨基酸浓度高于基础饲粮组;在低蛋白饲粮中(16%和19%)添加苏氨酸降低北京鸭肝脏总脂质、甘油三酯和胆固醇浓度,以及血浆LDLC浓度。在低蛋白饲粮中(16%和19%),腹脂率随饲粮苏氨酸水平增加先增加后降低。利用二次曲线-断线模型,以日增重为指标估计19%和22%蛋白质水平下,1-21日龄北京鸭苏氨酸需要量分别为0.66%和0.70%;以胸肌率为指标估计的1-21日龄北京鸭苏氨酸需要量分别为0.67%和0.73%;t检验表明,该模型估计的北京鸭苏氨酸需要量和最佳日增重(55.18 vs 55.80克/天/只)在19和22%两个饲粮蛋白水平下没有差异。试验二研究苏氨酸水平对北京鸭肝脏脂质沉积及其相关基因表达的影响。试验期为1-21日龄。结果表明,苏氨酸添加提高北京鸭日增重、平均采食量和腹脂率,降低耗料增重比、肝脏总脂质和甘油三酯。饲粮中添加苏氨酸不影响肝脏中胆固醇浓度、血浆氨基酸浓度和血浆生化指标。饲粮中不添加苏氨酸上调肝脏中脂质摄取相关基因的表达(FABP、APOA4和LPL)、脂肪酸合成相关基因(SREBP-1c和ME)、脂肪酸β-氧化相关基因(PPARα和ACOX)、酮体合成相关基因(ACSS1和HMGCS1)和氨基酸缺乏响应基因(GCN2、GCN1、IMPACT和eIF2α)以及脂质转运相关基因(APOB)的表达。以上结果提示,玉米-小麦-花生粕型饲粮(蛋白质为20.81%)苏氨酸缺乏会增加肝脏脂质含量和上调肝脏脂质代谢相关基因的表达。试验三研究苏氨酸缺乏增加北京鸭肝脏脂质沉积的机制。本试验采用单因子完全随机试验设计,将180只1日龄健康雄性北京鸭随机分为3个处理(苏氨酸缺乏组、对照组和配对组)。苏氨酸缺乏组和对照组北京鸭自由采食各自饲粮;配对组北京鸭采食对照组饲粮,但使其采食量与苏氨酸缺乏组保持一致。试验期为1-21日龄。试验结果表明,通过限饲配对组北京鸭采食量与苏氨酸缺乏组一致,但苏氨酸缺乏组北京鸭体重和日增重低于配对组;苏氨酸缺乏组北京鸭腹脂率低于对照组和配对组,但肝脏甘油三酯含量高于对照组和配对组;苏氨酸缺乏组部分改变了部分脂肪酸含量。肝脏转录组结果表明,苏氨酸缺乏通过增加21日龄脂肪型北京鸭肝脏脂质合成和降低脂质转运来增加肝脏甘油三酯含量。试验四研究中苏氨酸水平对北京鸭脂质代谢的影响。本试验采用两因子完全随机试验设计。于15日龄根据平均体重分别从250只脂肪型和瘦肉型北京鸭中挑选192只健康北京鸭,分别分配为3个处理(苏氨酸添加量为0%、0.15%和0.30%)。试验期为15-35日龄。试验结果表明,脂肪型北京鸭采食量和耗料增重比高于瘦肉型北京鸭,其日增重和体重没有差异;饲粮中添加苏氨酸对脂肪型北京鸭生长性能没有影响,但会改善瘦肉型北京鸭生长性能;脂肪型北京鸭腹脂率和皮脂率高于瘦肉型北京鸭,而胸肌率低于瘦肉型北京鸭;饲粮中添加苏氨酸对脂肪型北京鸭胸肌率、腿肌率和皮脂率没有影响;饲粮中缺乏苏氨酸降低瘦肉型北京鸭胸肌率,提高其腿肌率,而饲粮苏氨酸缺乏或者过量降低瘦肉型北京鸭腹脂率和皮脂率。瘦肉型北京鸭肝脏总脂质、总胆固醇和甘油三酯含量高于脂肪型北京鸭;苏氨酸缺乏增加瘦肉型北京鸭肝脏总脂质、总胆固醇和甘油三酯含量,而对脂肪型北京鸭肝脏总脂质、总胆固醇和甘油三酯含量没有影响。转录组结果表明:苏氨酸缺乏上调瘦肉型北京鸭肝脏花生四烯酸、甘油磷脂和油酸相关代谢相关基因表达,降低了 CYP7A1和LIPC基因的表达;苏氨酸缺乏对瘦肉型北京鸭皮脂和腹脂脂肪代谢相关基因没有影响;苏氨酸缺乏对脂肪型北京鸭肝脏、皮脂和腹脂肝脏脂质代谢相关基因没有影响。试验五利用试验四的数据进一步分析和比较脂肪型和瘦肉型北京鸭脂质代谢的差异。分析结果表明,脂肪型北京鸭肝脏中脂肪酸合成相关基因、甘油三酯代谢相关基因的表达量高于瘦肉型北京鸭,FADS1基因的表达量低于瘦肉型北京鸭;脂肪型北京鸭腹脂中脂质分解相关基因的表达量低于瘦肉型北京鸭;脂肪型北京鸭皮脂中脂肪和甘油三酯代谢相关基因的表达量高于瘦肉型北京鸭。综上所述,1)玉米-小麦-花生粕型饲粮中苏氨酸缺乏增加北京鸭肝脏脂质沉积与其调控脂质代谢相关基因表达有关。2)玉米-小麦-花生饼饲粮添加苏氨酸对脂质代谢的影响在不同品系北京鸭中存在差异。3)脂肪型和瘦肉型北京鸭脂质代谢存在差异。
武须军[5]1990年在《北京鸭血清高密度脂蛋白受体研究》文中指出HDL在抵抗动脉粥样硬化中的作用已为流行病学、病理学和生物化学及分子生物学手段所证实。然而，HDL体内代谢的一些环节尚未搞清。HDL受体存在与否即是一个有争议的课题。近年来一些研究者在大鼠和家兔等动物中作了一些有关HDL受体的研究，但其结果有较大的差异。为进一步探讨HDL受体及其本质，本文在证实北京鸭肝脏存在HDL受体基础上，分离纯化了鸭肝脏HDL受体，并首次对HDL受体蛋白的一些性质作了研究。 本文首先对北京鸭肝细胞及细胞膜HDL受体作了系列研究。发现鸭肝细胞表面存在HDL的高亲和性、特异性及可饱和性的受体。125I—HOL与肝细胞HDL受体的结合不受EDTA影响，可被不同动物的菲标记HDL明显抑制。大鼠、人和鸡的LDL不抑制125I—HDL与HDL受体的结合，但鸭LDL有部分抑制作用，这可能是鸭LDL中含有少量apoAI之故。该受体可识别apoAI。而不识别apoB和apoE，说明该受体不同于LDL受体和apoE受体。链霉蛋白酶和磷脂酶A_2均部分影响HDL受体的结合活性，而先用磷脂酶A_2处理再用链霉蛋白酶处理后，其结合活性几乎完全丧失。根据这一结果，推测HDL受体在细胞膜表面与磷脂分子关系密切，后者可能对HDL受体起保护作用。肝细胞HDL受体含量丰富，对鸭HDL有很好的亲和性(Kd为9.6μg／ml～7.4μg／ml)，最大结合容量Bmax为8.9μg／mg细胞膜蛋白和5.8μg／mg细胞蛋白。鸭肝HDL受体途径是HDL胆固醇酯代谢
吕新跃, 陈保生, 王克勤, 薛红[6]1997年在《不易感动脉粥样硬化动物北京鸭肝cDNA文库的快速构建》文中指出为了研究不易感动脉粥样硬化动物北京鸭多种载脂蛋白的基因分子结构，在国内外首次快速构建了鸭肝细胞CDNA文库。采用一步法提取鸭肝细胞总RNA；寡核胸苷酸为吸附介质，柱层析法进一步提取mRNA。以此为模板，利用改良的中CDNA合成方法，反转录合成鸭肝细胞CDNA的第一、二链。经CDNA双链末端修饰，连接含双酶切位点的连接子后重组于噬菌体载体，包装后获得高滴度的鸭肝细胞。CDNA文库，放射自显影显示合成的。CDNA产物大小在400～5000个核苷酸之间，该文库的克隆重组率98．5％以上，随机提取白色噬菌斑DNA，酶切鉴定均有CDNA插入片段。以制备的兔抗鸭aPoAI多抗为探针，从构建的cDNA文库中克隆出鸭aPoAIcDNA核苷酸序列，与常规方法比较，本法简便、快速，易于操作和掌握。本研究还对应用此方法构建CDNA文库的某些环节进行了讨论。
梅美珍, 吴满平[7]1993年在《血浆脂质转运蛋白》文中进行了进一步梳理七十年代中期发现血浆无脂蛋白部分具有一种特殊转运蛋白。它可促进脂蛋白间胆固醇酯(CE)和甘油三酯(TG)转运和变换,称脂质转运蛋白(LTP)或胆固醇转运蛋白(CETP)。现已证实血浆脂质转运蛋白并不是载脂蛋白D。从它的发现迄今才十多年,由于它与其它脂蛋白代谢有关酶一起参与脂蛋白代谢调控,并与动脉粥样硬化的发生密切相关,故引起人们对该领域研究的极大兴趣。
曾武威, 张坚, 陈保生, 吴钢, 张可满[8]2002年在《北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶的cDNA和蛋白质的结构分析》文中提出为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较 .北京鸭LCATcDNA (在GenBank中的注册号为AF32 4 887)全长 195 3bp ,其中开放阅读框架 135 6bp ,编码 4 5 1个氨基酸 ,包括一个由 2 3个氨基酸构成的疏水性信号肽和一个由 4 2 8个氨基酸组成的成熟蛋白 .该成熟蛋白比人LCAT在C端多 12个氨基酸 ,其与鸡、人、家兔的同源性依次为 98%、83%和 82 % .与其它种属LCAT蛋白序列的比较结果表明 ,北京鸭LCAT蛋白质序列虽然在长度上和结构上与其它种属有一定的差异 ,但序列中与酶催化活性相关的序列均非常保守
高润霖, 吴锡桂, 陈纪林, 陈保生, 冯宗忱[9]1999年在《我国冠心病研究主要成就》文中研究表明建国五十周年以来,特别是改革开放二十多年来,我国心血管病学研究取得重大进展,冠心病专业领域亦不例外。在这段时间内,我国心血管病流行病学从无到有,通过大规模人群抽样调查和疾病监测,探明了我国冠心病流行情况和趋势及发病危险因素,并初步取得了人群预防的经验。冠
参考文献：
[1]. 北京鸭载脂蛋白AI、树鼩载脂蛋白AI、CI三个cDNA的克隆、测序及组织分布[D]. 吕新跃. 中国协和医科大学. 1997
[2]. 北京鸭载脂蛋白apoA-I结构与功能的研究[D]. 尹银亮. 中国协和医科大学. 1995
[3]. 北京鸭载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达[J]. 吕新跃, 陈保生, 王克勤. 武警医学院学报. 1998
[4]. 苏氨酸对北京鸭脂质代谢的影响及其调控机制[D]. 江勇. 中国农业大学. 2018
[5]. 北京鸭血清高密度脂蛋白受体研究[D]. 武须军. 中国协和医科大学. 1990
[6]. 不易感动脉粥样硬化动物北京鸭肝cDNA文库的快速构建[J]. 吕新跃, 陈保生, 王克勤, 薛红. 中国动脉硬化杂志. 1997
[7]. 血浆脂质转运蛋白[J]. 梅美珍, 吴满平. 中国动脉硬化杂志. 1993
[8]. 北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶的cDNA和蛋白质的结构分析[J]. 曾武威, 张坚, 陈保生, 吴钢, 张可满. 中国生物化学与分子生物学报. 2002
[9]. 我国冠心病研究主要成就[J]. 高润霖, 吴锡桂, 陈纪林, 陈保生, 冯宗忱. 中华心血管病杂志. 1999
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