陈中[1]2000年在《酶钝化豆类种子胰蛋白酶抑制子的研究》文中研究表明豆类植物种子作为新世纪人类重要的蛋白质来源之一，由于存在着蛋白酶抑制子等营养抑制因子，一直影响着人类对它们的利用。本论文研究了枯草杆菌蛋白酶对豆类中花生和大豆的胰蛋白酶抑制子的水解，以及萌发绿豆和大豆中存在的催化水解大豆胰蛋白酶抑制子的酶类，这为人类更好地利用豆类植物蛋白质找到了一条新的途径。 本论文主要研究内容包括： 1．枯草杆菌蛋白酶水解抑制子的研究 采用改进的N_α-Benzoyl-DL-Arginine-P-Nitroanilide(BAPNA)法及SDS-PAGE电泳，分别研究了枯草杆菌蛋白酶对花生和大豆胰蛋白酶抑制子的水解作用，并通过单因素研究及利用MRCO(Modified Random-Centroid Optimization)软件优化了酶水解花生和大豆胰蛋白酶抑制子的最适反应条件。 研究结果表明：酶水解花生胰蛋白酶抑制子的最适反应条件为：反应温度40～60℃、pH值7.0～8.0、酶活力≥40 000IU／mL以及≥60min的反应时间；水解大豆胰蛋白酶抑制子的最适反应条件为：反应温度35～55℃、pH值7.5～8.5、酶活力≥40 000IU／mL以及≥40min的反应时间。 2．枯草杆菌蛋白酶水解抑制子的酶学特性及其固定化研究 分别研究了枯草杆菌蛋白酶对改性花生胰蛋白酶抑制子和脱脂大豆粉的水解作用，测定了枯草杆菌蛋白酶水解花生和大豆胰蛋白酶抑制子的动力学常数，并进行了酶的海藻酸钠固定化研究。 研究结果表明：改性过的花生胰蛋白酶抑制子对枯草杆菌蛋白酶更敏感，且酶对脱脂大豆粉及其所含胰蛋白酶抑制子有水解作用。 枯草杆菌蛋白酶水解花生和大豆胰蛋白酶抑制子的动力学常数K_m值和V_(max)值分别为：657.9BAEE／mL和606.1BAEE／mL及104.9BAEE／(min·mL)和106.6BAEE／(min·mL)。 固定化酶水解大豆胰蛋白酶抑制子的最适反应条件为：反应温度40～60℃、pH值7.0～9.0以及≥60min的反应时间。固定化酶水解大豆胰蛋白酶抑制子的动力学常数表观K_m~*值和V_(max)~*值分别为：825.7BAEE／mL和85.47BAEE／(min·mL)；该固定化酶半衰期约为：3.1d。
陈中[2]2001年在《酶钝化豆类种子 胰蛋白酶抑制子的研究(摘要)》文中提出豆类植物种子作为新世纪人类重要的蛋白质来源之一,由于存在着蛋白酶抑制子等营养抑制因子,一直影响着人类对它们的利用。本论文研究了枯草杆菌蛋白酶对豆类中花生和大豆的胰蛋白酶抑制子的水解,以及萌发绿豆和大豆中存在的催化水解大豆胰蛋白酶抑制子的酶类,这为人类更好地利用豆类植物蛋白质找到了一条新的途径。
陈中, 杨晓泉, 赵谋明[3]2001年在《萌发绿豆中水解大豆胰蛋白酶抑制子蛋白酶的纯化及固定化》文中研究指明酶钝化豆类种子胰蛋白酶抑制子的研究
王海鹏[4]2010年在《大豆抗营养因子BBI的提取分离、钝化及其对HepG_2细胞活性的研究》文中指出胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor TI)是广泛存在于动植物和微生物中的一类天然活性物质,人及动物过多摄取TI会导致胰腺肿大,产生不良生理反应。研究表明,TI作为新型药物在癌症、艾滋病等疾病的治疗方面具有较高应用价值。本研究从优化包曼-伯克型蛋白酶抑制剂(BBI)提取工艺入手,探索生物酶固定化法钝化BBI技术,并初步研究BBI对人肝肿瘤细胞株(HepG2)细胞形态及增殖的影响。主要研究内容如下:1、BBI的提取及性质研究。在单因素试验基础上应用Plackett-Burman(P-B)设计筛选影响提取量的因素,即:乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间、提取次数、颗粒大小、pH值,通过方差分析确定了乙醇浓度、液料比和提取温度为显著影响因素;最陡爬坡实验(Steepest Ascent)确定中心点后;经中心复合试验(Central Composite Design)优化BBI的最佳提取工艺参数:中粉、乙醇浓度51%、液料比7:1、提取温度69℃、提取时间60min、pH值8.0、提取2次,此条件下,BBI的提取量为8.47mg/g,验证实验结果与估计值相符。超滤初步纯化后,BBI回收量为6.1mg/g。并对所提取的BBI进行了活性研究。2、枯草杆菌蛋白酶钝化BBI技术优化及酶学性质研究。选择海藻酸钠作为固定载体包埋枯草杆菌蛋白酶,P-B实验从影响包埋效果因素(固定化时间、海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、戊二醛浓度、交联温度、枯草杆菌蛋白酶量、pH值)中筛选显著因素,通过方差分析确定固定时间、海藻酸钠浓度、氯化钙浓度为显著影响因素;经最陡爬坡实验确定中心点;中心复合试验优化包埋最佳提取工艺。结果表明,固定时间269min、海藻酸钠浓度3.55%、氯化钙浓度2.53%,酶活力4000BAEE、固定温度35℃、戊二醛浓度1.0%、pH 7为最优工艺参数,固定后的相对酶活力可达到88.48%。验证实验显示,平均相对活力为88.27±2.15%。游离酶和固定化酶酶学性质比较结果显示,固定化酶的耐温能力较游离酶提高了20℃,对酸碱环境的适应性增强,最大反应初速度略有下降,半衰期时间大约为4.2天。3、BBI对HepG2细胞形态及增殖的影响。观察不同浓度BBI作用后的HE染色细胞形态变化,结果显示:BBI浓度为3.0g/L时,作用72h后,细胞表现为浆内呈空泡状,染色质呈粗颗粒状,部分细胞膜破裂;以MTT法检测了不同浓度的BBI对HepG2作用,结果显示,作用时间延长,细胞抑制率均升高,到第4d,除0.2g/L外,其余浓度下的细胞抑制率均接近或大于50%,当浓度为3.0g/L,作用4天后,抑制率可达90%以上。
参考文献：
[1]. 酶钝化豆类种子胰蛋白酶抑制子的研究[D]. 陈中. 华南理工大学. 2000
[2]. 酶钝化豆类种子 胰蛋白酶抑制子的研究(摘要)[J]. 陈中. 中外食品工业信息. 2001
[3]. 萌发绿豆中水解大豆胰蛋白酶抑制子蛋白酶的纯化及固定化[J]. 陈中, 杨晓泉, 赵谋明. 生物工程学报. 2001
[4]. 大豆抗营养因子BBI的提取分离、钝化及其对HepG_2细胞活性的研究[D]. 王海鹏. 黑龙江八一农垦大学. 2010