刘玲玲
(商丘市第一人民医院分院检验科 河南商丘 476100)
[摘要] 目的：分析细菌培养与聚合酶链反应(PCR)检测在细菌性痢疾检验中的应用效果。方法：选择2012年2月-2014年1月来我院治疗腹泻的患者70例，70例患者分别采用细菌培养与聚合酶链反应检查，观察两种方法的检查效果。结果：聚合酶链反应的检出率明显高于细菌培养组，差异有统计学意义(P＜0.05)。聚合酶链反应平均循环数在培养阴性、非脓血便、年龄大于5岁方面检出率最高，而聚合酶链反应平均循环数在培养阳性、脓血便、年龄小于5岁方面最低。结论：在细菌性痢疾检验中采用聚合酶链反应检测准确性更高，临床医生对于腹泻患者细菌性痢疾检验可以采用聚合酶链反应检测，从而提高准确性。
[关键词]细菌培养；聚合酶链反应；细菌性痢疾；检出率
Application analysis of bacterial culture and polymerase chain reaction in the detection of bacterial dysentery
Liu Lingling
(Department of Laboratory of Shangqiu First People's Hospital of Henan branch of Shangqiu 476100)
Objective: to analyze the effect of bacterial culture and polymerase chain reaction (PCR) in the detection of bacterial dysentery. Methods: 70 patients with diarrhea in our hospital from February 2012 to January, 70 patients were treated with bacterial culture and polymerase chain reaction, and the effect of the two methods were observed. Results: the detection rate of the polymerase chain reaction was significantly higher than that of the bacterial culture group, the difference was statistically significant (P < 0.05). Polymerase chain reaction and the average number of cycles in culture negative, non stool with pus and blood, older than 5 years old on the highest detection rate, and average number for polymerase chain reaction cycle in culture positive, pus and blood, age less than 5 years old lowest. Conclusion: the accuracy of polymerase chain reaction was more accurate in the detection of bacterial dysentery. The clinical use of polymerase chain reaction was used for the detection of bacterial diarrhea in patients with diarrhea.
Keywords bacterial culture; polymerase chain reaction; bacterial dysentery; detection rate
细菌性痢疾又称为菌痢，是由志贺菌引起的肠道传染性疾病，临床一般表现为发热、腹泻、黏液脓血便等，主要通过食品、水源从患者口腔进入或者苍蝇等害虫间接传播后感染[1]。虽然近些年我国卫生条件提高使细菌性痢疾的发病率逐步降低，但其仍是目前社会非常重要的卫生安全问题[2]。准确判断细菌性痢疾是临床首要任务，目前临床一般采用细菌培养或聚合酶链反应检验，但是对于这两种方法的检测效果报告较少。为了比较这两种方法检测的准确性，提高细菌性痢疾的检出率，本研究对来我院治疗腹泻的患者分别采用细菌培养与聚合酶链反应检查，如下报道。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2012年2月-2014年1月来我院治疗腹泻的患者70例，70例患者分别采用细菌培养与聚合酶链反应检查，所有患者中男46例，女24例；患者年龄1-81岁，平均年龄(48.3±3.4)岁；病程1-5d，平均病程(3.1±0.2)d。
1.2 纳入标准 符合粪便镜检白细胞高倍视野15个以上，可见少量细胞；腹泻每日3次或以上者，腹泻为稀便或水样便；体温超过37.5℃者。排除标准：排除化疗引起的腹泻；排除非细菌引起的痢疾[3]。
1.3 检测方法 70例患者分别采用细菌培养和聚合酶链反应检测。
1.3.1聚合酶链反应检测方法 (1)引物选择扩增志贺ipaH基因片段，给予脱盐纯化。(2)模板制备：从培养24h的SS琼脂平板菌落中提取DNA，将单菌接受于LB或脑心平板，在37℃下培养18-24h。刮取1-2种接种环菌苔加入三蒸水中，进行混匀，用100℃煮沸后，进行离心，取上清液。然后加入PBS缓冲液洗涤沉淀，继续离心。收集菌体，将其加入TE缓冲液和蛋白酶，放于37℃下消化1h。(3)检测产物的循环数≤38表示阳性。
1.3.2 细菌培养方法 对新鲜粪进行检查，将标本接种于SS及麦康凯培养其中，培养24h后将可疑菌落挑出进行生化鉴定，鉴定为志贺菌判定为阳性。
1.4 统计学分析 采用SPSS 14.0统计软件进行统计分析，计量资料(X±S)表示，t检验，计数资料n(%)表示，X2检验，P＜0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 PCR对患者不同临床特征检查的结果分析 聚合酶链反应平均循环数在培养阴性、非脓血便、年龄大于5岁方面检出率最高，而在培养阳性、脓血便、年龄小于5岁方面最小，详见表1、表2。
3 讨论
随着生物学的发展，细菌流行病研究的深入，聚合酶链反应检测技术在细菌性痢疾的检测运用越来越频繁，相比于传统细菌培养耗时耗力、操作困难阳性检出率低、漏检率高等缺点，聚合酶链反应检测便捷迅速、准确性高，受到临床医生的青睐[4]。志贺杆菌感染越严重患者的排泄物中的细菌量越多，而聚合酶链反应检测的循环数与被检测标本的目标物的含量有关[5]。有研究显示[6]，聚合酶链反应检测志贺菌ipaH及ial基因诊断细菌性痢疾时，只有ipaH及ial基因同时检测为阳性才是细菌性痢疾患者，就算ipaH结果检测为阳性，也不一定会发病，可能是志贺菌携带者。所以聚合酶链反应检测的阳性率更高。而细菌培养容易受到多种因素干扰，如样本的采集、分离培养基的选择、菌落挑选、血清凝聚实验等，所以细菌培养的细菌检出率会相对较低。
在本研究中可以发现，聚合酶链反应对不同年龄段患者细菌性痢疾检出率明显高于细菌培养，比如，0-5岁中，聚合酶链反应检出率为25.71%，而细菌培养检出率为5.71%；5-10岁中，聚合酶链反应检出率为8.57%，而细菌培养检出率为0.00%等，并且聚合酶链反应总检出率为78.57%，明显高于细菌培养总检出率7.14%，说明采用聚合酶链反应检出率更高，便于临床医生尽早对疾病确诊，从而制定治疗方案。通过本研究还发现，聚合酶链反应在平均循环数培养阴性、非脓血便、年龄大于5岁方面检出率为50.00%明显高于聚合酶链反应在平均循环数培养阳性、脓血便、年龄小于5岁检出率1.43%，进一步证明了聚合酶链反应在细菌痢疾检验中的价值。
综上所述，在细菌性痢疾检验中采用聚合酶链反应检测准确性更高，临床医生对于腹泻患者细菌性痢疾检验可以采用聚合酶链反应检测，提高准确性。
参考文献
[1]许丽霞，黄剑芳，刘集鸿.细菌培养与聚合酶链反应（PCR）检测在细菌性痢疾检测中的应用分析[J].检验医学与临床，2014，11(12):1676-1677，1679.
[2]曾桂芬，龙北国，姜容，等.LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较[J].热带医学杂志，2012，12(05):547-549，592.
[3]孙宗科，张伟，鲁波，等.水中活的非可培养状态痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究[J].环境与健康杂志，2012，29(07):590-592.
[4]王松梅，郝志勇，马景臣.等.PCR检测与细菌培养方法在细菌性痢疾监测中的应用比较[J].复旦大学学报，2012，33(6):766-769.
[5]何长龙，吴力克，兰林，等.4种感染性腹泻病原菌免疫磁珠-多重PCR快速检测体系的建立[J].第三军医大学学报，2012，34(15):1505-1508.
[6]王兴茂，张玉萱，何凡，等.小儿腹泻标本细菌培养和人轮状病毒联合检测的结果分析[J].中国实验诊断学，2011，15(02):354-355.
论文作者:刘玲玲
论文发表刊物:《中国医学人文》2015年第12期供稿
论文发表时间:2016/3/29
标签：痢疾论文; 细菌论文; 检出论文; 细菌性论文; 患者论文; 脓血论文; 阳性论文; 《中国医学人文》2015年第12期供稿论文;