卜庆尖 翟文娟 邓 新 任倩倩（青岛中一监测有限公司 山东 青岛 ２６６０００）
【中图分类号】Ｒ２０７．３【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０４１０－０１【摘要】建立了高效液相色谱法同时测定食品中８种合成着色剂（柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红）的方法。样品经乙醇．氨水．水溶液前处理，经ＺＯＲＢＡＸＳＢ．Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱分离，以甲醇和０．０２ｍｏｌ／Ｌ的乙酸铵为流动相，进行梯度洗脱，用紫外检测器设定波长程序，分别在４５０ｎｍ、４９０ｎｍ、６００ｎｍ波长处检测，８种物质的线性相关系数大于０．９９９，方法检出限为０．０２６～０．０９０μｇ／ｍＬ。８种合成着色剂的回收率范围在６３．４％ ～１０１．２％之间，ＲＳＤ（ｎ＝６）范围在１．１４～６．２６之间，满足食品中合成着色剂含量的检测需要。
【关键词】高效液相色谱法［合成着色剂［食品［检测
为了改善食品的色泽，人们常常在加工食品的过程中添加着色剂，以改善感官性质，增加食欲［１］。与天然色素相比，合成着色剂具有色泽鲜艳、着色力强、性质稳定和价格便宜等优点，但人工合成着色剂多为偶氮化合物，具有一定毒性，若使用不当会危害人体健康。许多国家和地区已对其使用范围、限量及相关的检测方法做了明确的规定［２．３］。目前，我国已批准使用的合成食用色素有２１种，常用的有苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、柠檬黄、靛蓝、日落黄及亮蓝等，这些合成着色剂被广泛应用于饮料、雪糕、糖果、糕点、果酱、调料、火腿、罐头等食品［４］。但是，在经济利益驱使下，我国食品中人工合成着色剂的超标、超范围使用现象屡禁不止。目前国家标准中给出的最佳方法是高效液相色谱法［５］，但其样品前处理技术是聚酰胺粉的吸附与解吸附方法，步骤繁琐，易造成损失［６］，样品经乙醇．氨水．水溶液提取后，蒸干耗时过长。并且使用紫外检测器于２５４ｎｍ波长下测定，无法顾及到不同组分的最大吸收波长［７］，且在紫外区域很多杂质都有吸收，干扰严重。本文采用快速液相色谱、ＶＷＤ多波长检测法，在可见光区域进行测定，不仅缩短了检测时间，提高了灵敏度，扩大了检测范围，而且大大简化了前处理方法。１实验方法１．１材料与试剂新红、柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、诱惑红、赤藓红标准溶液，浓度均为１０００ｕｇ／ｍＬ。混合标准中间溶液（１００ｕｇ／ｍＬ）：准确量取适量的每种着色剂标准溶液，用水稀释成１００ｕｇ／ｍＬ的着色剂混合标准中间溶液。
甲醇（色谱纯）［乙酸铵（分析纯）［乙醇、氨水（分析纯）［超纯水［提取液：乙醇．氨水．水溶液（体积比５：１：４）。
样品（蛋白饮料、草莓、火腿、面包、辣条）为市售产品。１．２仪器与设备Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司），带紫外检测器（ＶＷＤ）［高速离心机（上海卢湘仪ＴＧ１８５０．ＷＳ）［十万分之一分析天平（岛津ＡＵＷ１２ＯＤ）［超声波清洗器（保定圣峰ＨＰ２８００Ｈ）［一次性注射式滤器［针式过滤器（ＰＴＦＥ亲水）。１．３色谱条件色谱柱：ＺＯＲＢＡＸＳＢ．Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）［流动相：Ａ为甲醇，Ｂ为２０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵［流速：１．００ｍＬ／ｍｉｎ［进样量：３０．００μＬ［柱温：２５℃［梯度洗脱及检测波长条件见表１、表２。
表１梯度洗脱程序
１．４样品前处理选取６个有代表性的样品：蛋白饮料、草莓、火腿、面包、辣条。
蛋白饮料：称取２．００ｇ样品（精确至０．０１ｇ）于１０ｍＬ容量瓶中，加入提取液并定容至刻度。摇匀，超声提取１５ｍｉｎ，７０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ。取２．０ｍＬ上清液于１０ｍＬ刻度离心管中，氮吹至０．５ｍＬ左右，用纯水定容至１．０ｍＬ，经０．４５μｍ针式过滤器过滤后，供ＨＰＬＣ测定。
草莓、火腿等：称取２．００ｇ样品（精确至０．０１ｇ）放入５０ｍＬ离心管中，加入１０．０ｍＬ提取液，摇匀，超声提取１５ｍｉｎ，７０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。取４．０ｍＬ上清液于１０ｍＬ刻度离心管中，用氮气吹至１．５ｍＬ左右，用纯水定容至２．０ｍＬ，经０．４５μｍ针式过滤器过滤后，供ＨＰＬＣ测定。２结果与分析２．１流动相的选择
以甲醇和乙酸铵溶液为流动相，通过改变二者浓度配比和梯度洗脱条件，分析其对目标化合物的分离度、峰形、出峰时间的影响。最终采用如表１所示梯度洗脱程序，在该条件下，各种着色剂的分离度、峰形、出峰时间均比较理想。
具体情况见图１。
图１：８种合成着色剂出峰情况（浓度６ｐｐｍ） ２．２检测波长的选择检测波长通常选择最大吸收波长，同时尽可能使得干扰成分响应值较小。
国标中着色剂的检测波长为２５４ｎｍ，但在此波长下检测时，往往会受到很多其他物质的干扰，影响目标物的定性。从各种着色剂的最大吸收波长考虑，设定变动波长检测程序。柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的最大吸收波长依次为４２８ｎｍ、５２５ｎｍ、５２０ｎｍ、５１０ｎｍ、４８０ｎｍ、５１１ｎｍ、６２８ｎｍ、５２６ｎｍ［８］，其中日落黄、苋菜红、诱惑红、胭脂红、赤藓红、新红的最大吸收波长均在５００ｎｍ左右，考虑到波长频繁变动会造成基线稳定性变差，所以统一设定检测波长为４９０ｎｍ，此时各种着色剂吸收灵敏度满足检测需求。具体波长检测程序见表２。２．３样品前处理条件的选择合成着色剂属于水溶性化合物，可以用纯水提取样品中的合成着色剂。但是，如果用纯水提取熟肉制品等蛋白质、脂肪含量高的固体样品，向样品中加入着色剂标准溶液，离心后发现，沉淀物吸附大量的色素，提取液中着色剂含量很低，基本没有回收率。因此，提取固体样品的着色剂时，选用极性较强的乙醇、氨水和水的混合溶液，在乙醇．氨水．水体系溶液中，沉淀物基本无颜色。
样品经乙醇．氨水．水体系溶液提取后，未进行蒸干和聚酰胺粉提取的过程，直接用氮气吹至１．５ｍＬ左右，大大节省了前处理时间，但是样品处理后成分较复杂，在２５４ｎｍ波长下上机分析时，杂峰很多，极容易掩盖目标峰。所以，通过波长设定程序进行分析，排除了其他物质的干扰。
为减少有机试剂用量，缩短除醇时间，节约实验成本，通过改变乙醇．氨水．水体系溶液的各组分比例，寻找最佳提取条件。最终选择体积比５：１：４的乙醇．氨水．水溶液作为提取试剂，合成着色剂提取充分，且减少乙醇、氨水的用量。
通过验证证明，如果氮吹后的样品溶液中乙醇含量过高，会影响柠檬黄和新红的出峰效果，当氮吹至溶液体积小于２ｍＬ时，各种合成着色剂出峰正常，回收率较高。因此氮吹时，样品不必吹干，剩余体积小于２ｍＬ即可。如果样品过滤困难，可添加２ｍＬ正己烷，混匀后离心处理，但赤藓红回收率会有所降低。２．４标准曲线的绘制移取不同体积的标准中间液，用纯水定容，配成质量浓度为０、１、２、４、６、８、１０μｇ／ｍＬ的标准溶液，在设定的色谱条件下，以峰面积对质量浓度绘制成标准曲线。方法的检出限以ＲＳＮ＝２计算。各组分标准曲线的线性方程、相关系数及检出限见表３。从结果可以看出，线性相关系数均大于０．９９９，方法检出限介于０．０２６～０．０９０μｇ／ｍＬ之间。
表３各组分的保留时间、线性方程和检出限
２．５样品回收率实验取代表性样品作为试样进行加标回收实验，分别添加５．０ｍｇ／ｋｇ和２０．０ｍｇ／ｋｇ两个加标水平，按前处理方法处理样品，每个水平做６个平行。８种合成着色剂的回收率范围在６３．４％ ～１０１．２％之间，ＲＳＤ范围在１．１４～６．２６之间。实验的加标回收率及精密度见表４。
表４８种合成着色剂加标回收率及精密度（添加水平５．０ｍｇ／ｋ）
２．６验证试验对市售蛋白饮料、草莓、果冻、火腿、面包、调味面制品等多种产品的不同品牌样品进行检测，少量乳酸菌饮料和调味面制品中检出柠檬黄和日落黄，果冻中检出柠檬黄，火腿中检出诱惑红，草莓和面包中未检出这８种着色剂，结果见下图。
３结论合成着色剂经乙醇．氨水．水溶液提取后，氮吹除去乙醇和氨水，在最大吸收波长下检测，前处理步骤简单，干扰少，灵敏度高，节省了前处理时间，便用大批量样品的检测。
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论文作者:卜庆尖 翟文娟 邓 新 任倩倩
论文发表刊物:《健康必读》2015年第7期供稿
论文发表时间:2015/8/17
标签：波长论文; 着色剂论文; 样品论文; 氨水论文; 乙醇论文; 溶液论文; 回收率论文; 《健康必读》2015年第7期供稿论文;