陈澜 李明刚 徐云燕
遵义医学院 贵州遵义 563000；遵义医药高等专科学校 贵州遵义 563000
【摘 要】目的 观察淫羊藿苷（Ica）对大鼠创伤性脑损伤（TBI）后脑水肿的影响。方法 SD雄性大鼠40只，随机分为空白对照组（Control），模型对照组（TBI），Ica低剂量组（TBI+Ica10），Ica高剂量组（TBI+Ica40），每组10只。造模前一周连续预防性灌胃给药（Ica10mg/kg/次、40mg/kg/次），每天两次，空白组对照和模型对照组灌胃给予等体积生理盐水。采用Feeney法建立大鼠TBI模型，造模24h后取材；HE染色法观察脑组织病理形态学变化；采用干湿重法观察脑含水量的改变。结果 Ica使TBI后大鼠脑含水量下降，并且减轻了损伤区组织的病理学损伤。结论 Ica可降低创伤性脑损伤后脑水肿的程度，对创伤性脑损伤具有保护作用。
【关键词】淫羊藿苷；创伤性脑损伤；脑水肿
【中图分类号】R256.51【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-05-158-01
创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是由于机械外力作用于神经元、轴索、胶质细胞以及血管等脑组织造成原发性脑损伤，主要包括脑震荡、脑挫裂伤、脑干损伤、丘脑下部损伤；创伤后数分钟或数小时在原发性脑损伤基础上引发继发性脑损伤，主要包括创伤后脑水肿与颅内血肿；创伤后脑水肿是TBI主要的继发性病理生理过程之一，可引起和加重颅内压增高，甚至引起脑移位和脑疝，是导致伤死和致残的主要原因之一。淫羊藿为我省的道地中药材，属小檗科淫羊藿植物，具有“补肾阳，强筋骨，祛风湿，益气力，强志”等功效。现代药理学研究表明，Ica具有抗肿瘤、改善心脑血管功能、增强免疫功能、抗骨质疏松、调节内分泌等作用；本研究应用淫羊藿苷对创伤性脑损伤大鼠进行治疗，观察伤灶区脑含水量的变化，了解其对脑水肿的影响。
1 材料
1.1 实验动物：清洁级（SPF级）Sprague-Dawley（SD）大鼠，雄性，体重250-300g，购自第三军医大学大坪医院实验动物中心。
1.2 仪器：Leica光学显微镜（德国Leica Microsystems Ltd），GZX-9140MBE电热恒温鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。
1.3 药品与试剂：淫羊藿苷（南京泽朗医药科技有限公司），其余试剂均为市售分析纯。
2 方法
2.1 实验分组：SD大鼠，雄性，40只，随机分为空白对照组（Control），模型对照组（TBI），Ica低剂量组（TBI+Ica10mg/kg/次），Ica高剂量组（TBI+Ica40mg/kg/次），每组10只。造模前一周连续预防性灌胃给药，每天两次，空白对照组和模型对照组灌胃给予等体积生理盐水；造模24h后取材。
2.2 动物模型制备：动物 TBI模型制备采用改进后的Feeney自由落体脑损伤装置，造成中度脑损伤，具体方法和步骤为：7％水合氯醛 0.5 mL/100g，经腹腔麻醉，将大鼠固定于立体定位仪上，剪毛后消毒铺巾，矢状切开头皮，显露右顶骨，于中线右侧旁开约2.5 mm，前囱后约2.5 mm处钻开颅骨，保护硬膜完整，扩大骨窗至直径约5 mm。用20 g砝码从30 cm高处撞击头，造成右侧大脑半球中度脑损伤。撞击后，大鼠出现短暂的四肢抽搐、呼吸暂停数秒钟，表明致伤成功，随后拆开致伤装置，清创、止血，缝合头皮，动物清醒后分笼喂养。
2.3 脑含水量的测定：取各组大鼠各6只，TBI后24 h后麻醉断颈取脑，分离右侧（损伤侧）大脑半球，用精密天平称取湿重，于100 ℃烤箱中烘烤24 h。称取干重，按公式计算脑含水量。脑含水量/%=（湿重-干重）/湿 重 ×100％
2.4 苏木素-伊红（HE）染色：切片（厚度4 μm），水温60℃粘片，于37 ℃烘片过夜；常规脱蜡水化，二甲苯浸洗2次，每次15 min。梯度酒精（100%、95%、90%、80%、70%）各浸洗1次（5 min/次），自来水冲洗10 min。苏木素染色（约5 min），自来水冲洗10 min；盐酸乙醇分化（约20 s），自来水冲洗返蓝10 min；
伊红染色（约2 min），自来水冲洗10 min；脱水：逆酒精梯度脱水，二甲苯再次透明，最后进行封片、观察。形态学观察：Leica 光学显微镜下观察病理学的变化，并拍照记录。
3 结果
实验数据采用SPSS17.0软件进行统计分析，所有数据以均数±标准差（±s）表示，组间差异比较采用单因素方差分析及t检验进行，以P<0.05认为有统计学意义。
3.1 淫羊藿苷对TBI后大鼠脑含水量的影响
与空白组相比，TBI组中大鼠的脑含水量明显升高；与TBI组相比，Ica各剂量组大鼠脑含水量均有下降，其中Ica低剂量组差异显著；提示Ica可降低TBI所致大鼠的脑含水量。
3.2 淫羊藿苷对TBI后大鼠皮层损伤区病理组织学的影响
HE染色观察大鼠大脑皮层细胞形态（图2）：空白组细胞结构完整，清晰，细胞间质无水肿；模型组创伤区组织结构紊乱且疏松，周边脑组织水肿明显并可见弥漫性、散在出血点，有红细胞积聚，周围可见大量炎症细胞浸润。与模型组相比，Ica各剂量组皮层创伤区的病理损伤明显减轻，细胞排列较为规则，组织水肿现象减轻且炎症细胞浸润数量减少；提示Ica可以减轻TBI后大鼠病理学损伤。
4 讨论
创伤性脑损伤（Traumatic brain injury，TBI）是临床上致死致残的重要原因之一。近期的研究表明，原发性脑损伤是外力作用于脑部后造成的直接损伤，发生于损伤当时，并立刻产生其临床效应，多数是难治的、不可逆的，有时可能是致死的；与之相反，在原发性脑损伤基础上引发的继发性脑损伤多数是可以防治的。因此，临床上TBI治疗主要针对继发性脑损伤的防治，其主要包括创伤后脑水肿与颅内血肿。脑水肿是继发性脑损伤的主要表现形式之一，而创伤后脑含水量的变化是脑水肿严重程度的直接体现；研究结果显示，与模型组相比，Ica组可降低创伤后大鼠的脑含水量，结果表明Ica可降低创伤后大鼠的脑含水量，改善了脑水肿的情况。大脑皮层是TBI后损伤最直接和严重的区域，病理学结果显示，空白组细胞结构完整，清晰，细胞间质无水肿；模型组创伤区组织结构紊乱且疏松，周边脑组织水肿明显，周围可见大量炎症细胞浸润。与模型组相比，Ica各剂量组皮层创伤区的病理损伤明显减轻，细胞排列较为规则，组织水肿现象减轻且炎症细胞浸润数量减少；提示Ica可以减轻TBI后大鼠病理学损伤。
综上结果提示，Ica可通过降低脑含水量和减轻TBI后大鼠病理学损伤，而缓解TBI后继发性脑损伤。
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论文作者:陈澜,李明刚,徐云燕
论文发表刊物:《系统医学》2016年第5期
论文发表时间:2016/5/26
标签：含水量论文; 大鼠论文; 脑损伤论文; 水肿论文; 损伤论文; 创伤论文; 细胞论文; 《系统医学》2016年第5期论文;