张静, 刘彦仿, 杨守京[1]2000年在《抗肝癌单链抗体融合突变型TNF-α的构建、表达及其导向作用的初步实验研究》文中研究说明肝细胞肝癌是人原发性肝癌中最为常见、严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,尽管对于肝癌的临床研究在过去的20年内有了长足的进步,但由于肝癌发病隐匿,早期诊断十分困难,因此肝癌的诊断和治疗一直是亟待解决的重点课题之一.我室从1982年以来一直从事肝癌导向治疗的研究,曾成功地制备并高效表达了抗肝癌单链抗体m/hscFv_(25),经实验证明具有较好的导向作用.我们用高比活
张静[2]2000年在《抗肝癌单链抗体融合突变型TNF-α的构建、表达及其导向作用的初步实验研究》文中指出我室从1982年以来一直从事肝癌导向治疗的研究，曾成功地制备并高效表达了抗肝癌单链抗体m／hscFv_(25)，与人天然型TNF-α连接后，先后进行了原核、真核表达及导向治疗研究，取得了一定的治疗效果。但由于天然型TNF-α的毒副作用很大，在临床应用中常出现发热、寒战、恶心、呕吐等症状，严重者甚至出现全身消瘦，导致各脏器衰竭而死亡，大大限制了它在临床上的应用，因此我们尝试用高生物学活性、低毒性的突变型TNF-α(mTNF-α)将之替代，构建新型、高效、低毒的抗肝癌双功能抗体原核表达载体pGEX4T-1／scFv_(25)-mTNF-α，通过诱导表达、纯化后，对SMMC-7721肝癌细胞及荷肝癌裸鼠进行导向治疗研究，以期制备出具有临床应用潜能的抗肝癌双功能抗体，为今后肝癌的临床导向治疗研究打下基础。 一 m／h scFv_(25)-mTNF-α的构建、表达 采用PCR的方法在mTNF-α的两端加上所需要的酶切位点，将之连接在m／hscFv_(25)的3’端，构建原核表达载体pGEX4T-1 m／hscFv_(25)-mTNF-α，
孙志伟[3]1998年在《抗肝癌单链抗体融合TNFα的构建、表达及其导向作用的初步实验研究》文中进行了进一步梳理本课题在胡川闽博士构建的鼠抗人肝癌单克隆抗体HAb25的部分轻链缺失的单链抗体的基础上，以完整的轻链可变区基因替换原部分缺失的轻链可变区基因，重新构建了鼠抗人肝癌单链抗体(mscFv)，将其与检测标签E-tag偶连并在原核表达载体pET15b中获得高效融合表达，表达产物(mscFv-E-tag)经初步纯化后进行的活性检测结果显示，mscFv较好地保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特异性和亲和性。在此基础上，将mscFv及其经过人源化改造的抗人肝癌单链抗体(hscFv，由军事医学科学院袁清安博士构建)分别与人肿瘤坏死因子α(TNFα)基因偶连，分别构建了PGEX 4T-1 m／hscFv-TNFα抗肝癌双功能抗体的原核融合表达载体，并实现了高效表达，表达产物经纯化后进行的活性检测结果显示，m／hscFv-TNFα均保持了亲本抗体HAb25的抗原结合特性，并对靶细胞(SMMC-7721)具有明确的选择性杀伤作用，进一步的荷肝癌(SMMC-7721)裸鼠体内抑瘤实验结果表明，m／hscFv-TNFα均具有明确的导向杀伤作用。 一、抗肝癌单链抗体的重新构建、表达及其活性检测
参考文献：
[1]. 抗肝癌单链抗体融合突变型TNF-α的构建、表达及其导向作用的初步实验研究[C]. 张静, 刘彦仿, 杨守京. 西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集. 2000
[2]. 抗肝癌单链抗体融合突变型TNF-α的构建、表达及其导向作用的初步实验研究[D]. 张静. 第四军医大学. 2000
[3]. 抗肝癌单链抗体融合TNFα的构建、表达及其导向作用的初步实验研究[D]. 孙志伟. 第四军医大学. 1998