石一宁[1]1998年在《增生性玻璃体视网膜病变中炎前细胞因子的研究》文中研究指明目的 PVR属于眼内组织创伤愈合的一种特殊表现，与体内其它组织的损伤修复过程一样，可以分为三个阶段：炎症期、细胞增生期和瘢痕期。但迄今对炎症期及其早期的启动因子仍无较清晰的认识。1986年Hui建立的炎性PVR模型为从创伤免疫学角度研究PVR的发病机制提供了条件，本研究从创伤修复和自身免疫反应的角度出发，选择巨噬细胞作为诱发PVR模型的细胞，以及在炎症中出现较早的四种炎前细胞因子，即肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素-1β(IL-1β)，白细胞介素-8(IL-8)，以及白细胞介素-6(IL-6)进行研究，从细胞培养上清液中含量的变化，注入活化炎性巨噬细胞所致玻璃体内的变化，对眼组织的影响，以及眼内细胞的细胞因子基因表达等四个方面观察其随PVR自然病程的动态变化、细胞因子之间相互关系，探讨炎前细胞因子在PVR形成过程中对宿主细胞的启动和调控作用，从而为在分子水平提出防治PVR的对策提供实验依据。 材料与方法 1．采集与纯化用3％硫乙醇酸盐溶液刺激的同种异体家免腹腔产生的活化巨噬细胞；与含5％胎牛血清DMEM培养液配制成3.8×10~7／ml～5×10~7／ml细胞悬液，种于细胞培养板；分别在接种细胞后8、20、48、72及96小时5个时间点进行检测。2．向兔玻璃体腔中后部注入巨噬细胞悬液，诱发PVR模型。实验分为两组，第一组分别于玻璃体内注入巨噬细胞前(0天)、注入后7、14、21及28天5个时间抽取玻璃体液；第二组在
贾洪真[2]2004年在《人视网膜色素上皮细胞机械损伤模型中IL-8和MCP-1的表达》文中研究指明PVR是孔源性视网膜脱离后的严重并发症及其手术失败的主要原因，本质上是一种病理性的眼内过渡修复过程，是一个以时相为特征的程序化过程，即经过了炎症期、增生期和瘢痕期。视网膜脱离后血视网膜屏障破坏，血浆成份和炎症细胞可以借此进入视网膜下腔及玻璃体腔，参与视网膜脱离后的炎症过程。IL-8和MCP-1是两种重要的炎性因子，有研究表明，这两种因子在PVR患者玻璃体内含量明显高于正常。RPE细胞在某些细胞因子作用下也可以分泌MCP-1、IL-8。而人视网膜增生膜中含有RPE细胞。 视网膜脱离是视网膜神经上皮层受到来自玻璃体的牵拉而与色素上皮的紧密联接遭到破坏时而发生的。色素上皮受到通过神经上皮层传导过来的机械拉力，对色素上皮细胞的某些功能产生了影响。 机械张力可以改变细胞的细胞骨架和胞外基质结构，进而影响到细胞的增殖、移行以及其他生物学的特性。机械张力可以通过胞外基质传导入细胞内部引起细胞的生物学特性改变。改变细胞外基 第四军医大学硕士学位论文质的外形也可以影响到细胞骨架的改变，继而影响到细胞的生物学特性。 RPE损伤应当是PVR的发生起点，而RPE对损伤所发生的反应机制尚不十分清楚。IL一8和MCP一1参与PVR的发病过程，在PVR患眼中含量高于正常。RPE细胞在某些条件下可以合成分泌IL一8和MCP一1，如可以在IL一lp和TNF一Q的强力诱导下分泌合成IL~8和MCP一1。肺泡上皮、肠上皮、支气管上皮细胞受牵拉脱落后可诱导产生工L一8。因此，为深入研究PVR的发病机制和RPE的增生调控，本课题研究视网膜增生膜中MCP一和IL一8的表达，检测RPE细胞受机械损伤后IL一8、MCP一1的合成和表达。 第一部分人视网膜增生膜中IL一8及MCP一1的表达:目的研究视网膜增生膜中MCP一和IL一8的表达。方法玻璃体手术取出的PVR增生膜24例，其中C级膜11例，D级膜13例，用免疫组织化学方法检测MCP一1和IL一8的表达。结果24例标本中都有MCPn和IL一8的表达，其中MCP一阳性表达8例，强阳性表达16例:IL一8阳性表达7例，强阳性表达17例。在PVRC级膜中，MCP一1阳性表达5例，强阳性表达6例;IL一8阳性表达4例，强阳性表达7例。在PVRD级膜中，MCP一1阳性表达3例，强阳性表达10例;IL一8阳性表达3例，强阳性表达10例。不加第一抗体的阴性对照标本均无着色。结论MCP一和IL一8两者均存在于PVR增生膜中，提示两者在PVR增生膜的形成和PVR发生发展过程中起重要作用。 第二部分人视网膜色素上皮细胞机械损伤模型中IL一8和MCP一1的表达:目的检测RPE细胞受机械损伤后IL一8、MCP一的合成和表达。方法在6孔培养板内培养的RPE细胞铺满融合后，每孔刮除相同面积的细胞，72小时后，收集培养上清液，采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液中MCP一1和IL一8的表达，同时用免疫组第四军医大学硕士学位论文织化学方法检测即E细胞内MCP.1和IL一8的表达。结果RPE细胞在基础状态下，免疫组化法检测细胞内MCP·1和IL一8的表达，几乎不着色。经过机械损伤刺激充分反应后，在损伤边缘的RPE细胞内IL~8和MCP一1蛋白质的表达呈阳性的胞浆浓淡不一的棕黄色着色。ELISA检测结果显示，体外培养.RPE在基础状态下表达少量的IL一8，在经过机械损伤反应后，IL一8、MCP一1表达量显著增加，两者有显著差异(t检验统计，P<0 .01)。结论体外培养RPE在经过机械损伤反应后，MCP吸和工L一8的分泌和表达显著增加。提示在视网膜脱离前及脱离过程中，RPE受到通过视网膜神经上皮层传导过来的机械牵拉力的作用后及损伤的修复过程中，可能会诱导MCP刁和工L一8的产生，从而有助于启动RPE的移行及早期的炎症反应，导致PVR的发生。
刘兵[3]1999年在《增生性玻璃体视网膜病变增殖细胞Fas、Fas配体表达与凋亡及炎前因子对培养的人视网膜色素上皮细胞Fas、Fas配体表达的调控》文中进行了进一步梳理目的 孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)为一系列的细胞活动，即去分化细胞的形成、迁移、粘附及增殖，沿脱离的视网膜形成表面膜并收缩，导致视网膜脱离手术失败。PVR是一过度的伤口愈合过程，存在细胞增殖和死亡的失衡。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial，RPE)细胞是主要的增殖细胞，炎前因子在增生性玻璃视网膜病变发病中有重要作用，本实验主要包括以下两部分：(1)检测PVR玻璃体切除液和增殖膜标本中细胞组成及来源，是否存在凋亡，Fas和FasL表达与凋亡的关系。(2)观察IL-1β和TNF-α对培养的人RPE细胞生长、增殖以及Fas、FasL、波形蛋白表达的影响，了解PVR中炎前因子的调控机制。 方法 (1)对11例PVR新鲜玻璃体切除液标本细胞离心涂片和12例增殖膜标本进行形态学观察，免疫组织化学检测中间丝蛋白，即CK、波形蛋白、GFAP和NF，同时检测Fas和FasL表达。TUNEL技术检测凋亡细胞。一例玻璃体切除液离心细胞经透射电镜观察。(2)通过MTT比色实验和~3H-TdR掺入实验检测IL-1β和／或TNF-α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。流式细胞仪检测暴露于IL-1β和／或TNF-α的RPE细胞Fas、FasL的表达，并用mRNA斑点杂交分析mRNA的改变。免疫组织化学
宋宗明[4]2001年在《IL-1Ra对培养RPE炎前因子表达和实验性PVR的影响》文中研究指明研究背景 增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreo retinopathy，PVR）可被看成一种特殊的创伤愈合过程。视网膜色素上皮细胞（retinal pigmentepithelium，RPE）分泌的细胞因子在细胞移行、增殖、分泌胶原和PVR膜形成等过程起重要的作用。临床研究发现IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症早期的几种细胞因子在PVR发生的各个时期均有不同程度的高表达，与PVR的发生明显相关。尽管现代玻璃体手术使视网膜脱离的复位率有很大提高，但术后视网膜表面和玻璃体腔中的细胞增殖常常导致手术失败。研究证实地塞米松和道诺霉素等药物可以降低PVR的发生率，可是其固有的缺点使它在临床应用上受到一定限制。因此，通过寻找安全、高效的药物以救治增生性玻璃体视网膜病变是眼科医生的任务。研究发现白介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）是IL-1的天然抑制剂，可与IL-1受体结合而不诱发细胞内信号传导，从而阻断IL-1的效应，增加体内IL-1Ra的含量可以抑制IL-1所介导的生物学效应。二者之间的一定比例对维持局部内环境稳定起重要作用。目的 本研究以RPE为实验材料，利用ELISA、免疫组化和原位杂交等方法观察IL-1Ra、IL-6反义核酸、地塞米松和道诺霉素等从不同方向对炎前因子（proinflammatory factor）的阻断效应，观察抑制剂的作用及其机理。材料与方法 1．体外实验：①在培养RPE细胞中加入IL-1α和LPS等刺激物，ELISA 第四军医人学博十学位论文 法检测RPE细胞培养上清IL－lp、IL－6、IL－8和T川’－u 等细Iki囚于分泌：分 别使用兔疫组化和原位杂交法观察细胞内几d、1卜6、1卜8和刁”M‘－U 蛋臼 质和 ml｛NA的表达。②观察几－II｛a等抑制剂对炎性因于介导的！wI表达炎汕细 胞因子蛋白质和 mRNA的影响。 2．体内实验 将W巳注入兔眼（48只眼）玻璃体腔建立1‘VIZ模型，同时注 入几－IRa等抑制剂，通过直接检眼镜、B型超声和组织学检查观察！’V！｛的形成， 计算各组卜VR的发生率。 结果 1．体外培养RPE在基础状态下产生少量的I！。－6、IL－8和’1’M’－。，－IZ要 存在于细胞内。在 LPS和 IL－IQ的刺激下，培养上消中和绷胞内 L－6、仕－8 和‘I’NF－Q的含量于培养后的 Zh—4h明显增加，于6h一sh达，E叩￥。sh－比11以后 培养上清和细胞内炎前因子的表达趋于平稳。l［。－Ic与uS联合刺激刁“以＊显 增加 TNI’－Q的表达，在联合刺激后 sh培养上清中＊。－6、I！．－H和”l”NI’－。分别达 到 3500、3000和 4510pg．ml’．10”cells。 2．兔疫组化法检测基础状态下细胞内炎前因于蛋白质表达儿乎不着色。 经过几－la或者LPS刺激sh后 RPE细胞内 IL－6、IL－8和‘I’NI’－u蛋白质的表达 呈现为胞浆中浓淡不一的棕黄色着色，IL－IQ联合计S作用后 I｛PE染色较深。 但是IL－lp不着色。 3．在炎症介质介导下，RPE细胞几干、ILE和 TNF－u ml｛NA表达表现为 胞浆中蓝色着色，而未经刺激的细胞则只有很少的细胞呈现淡蓝色。 4．ELISA显示在几－in介导下，IL－IRa组、地塞米松组＄［I道诺霉素组培 养11f＃I－I。IL－6、IL－8和”l”N！‘－口的剂量比对照组低，IL－6 ）R义核酸组」：j肖中 11。－6 的剂量比对照组低，联合用药组上清中几－6、IL－8和TrNF－Q 比其他各组均低， 方差分析显示各组之间具有显著性差异。 5．原位杂交结果表明几－IRa组和道诺霉素组 IL－6、11。－8和‘l’NI‘－。ml（N 的表达少，IL－6反义核酸组仅仅只有几－6mRNA染色比对照组淡，’ti h［。ISA— 致。地塞米松组 IL－6、IL－8和 TNI‘－a mRNA染色与对照组没有明显差异。 6．体内实验显示第4周末对照组100％的眼发生视网膜脱离，IL－II｛a组 有5只眼（62．5％）发生视网膜脱离，组织学检查可见牵拉性视网膜脱禹，脱离的 4 第四军医大学博十学位论文 视网膜下可见渗出液，未见细胞成分。玻璃体腔内增殖膜的形成，增殖膜与视 网膜相连，PVR膜细胞浆内无色素颗粒；地塞米松组有4只眼（50％）发生视网膜 脱离，在脱离的程度上均比对照组轻：道诺霉素组和IL－6反义核酸组分别有5 只（62．5％）和 6只眼（75％）发生视网膜脱离，而联合用药组则只有 2只眼（25％） 发生牵拉性视网膜脱离。联合用药组比所有其它组的视网膜玻璃体病变轻，视 网膜脱离的面积也较小。 结论 1在几＊ a或者 LPS的刺激下，体外培养的 RPE可以表达一定的］I』－6、l；．－8
刘兵, 惠延年[5]2002年在《IL-1β和TNF_(-α)对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响》文中指出目的观察白介素１ β （ＩＬ－１ β）和α肿瘤坏死因子(ＴＮＦ－α）对培养的人视网膜色素上皮细胞(ＲＰＥ）生长的影响，了解在增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）中炎前因子的调控机制。方法通过ＭＴＴ比色实验和３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，检测ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响。结果ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α(0．02～２０ ｎｇ／ｍｌ)可促进培养的ＲＰＥ增殖，呈剂量和时间依赖性，ＤＮＡ合成也明显增加。结论炎前因子ＩＬ－１ β和／或ＴＮＦ－α可能促进ＰＶＲ中细胞的增殖。
林菁, 包欣, 谢田华, 姚勇[6]2019年在《增生性糖尿病视网膜病变患者房水及玻璃体中IL-8、CXCR1、CXCR2表达及意义》文中进行了进一步梳理目的 探讨增生性糖尿病视网膜病变(PDR)房水及玻璃体中白细胞介素-8(IL-8)、CXCR1、CXCR2蛋白表达及意义。方法 选择本院糖尿病视网膜病变(DR)并行白内障手术及玻璃体切除术的患者94例为病例组,分为非PDR组(非增生组) 50例,PDR组(增生组) 44例,同期选择本院门诊正常体检者68例为对照组。测定糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹血糖(FPG)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)以及房水(房)、玻璃体(玻)中的IL-8、CXCR1、CXCR2水平。结果 病例组IL-8 (房)、IL-8 (玻)、CXCR1 (房)、CXCR1 (玻)、CXCR2 (房)、CXCR2 (玻)、Hb A1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05);增生组IL-8 (房)、IL-8 (玻)、CXCR1 (房)、CXCR1(玻)、CXCR2(房)、CXCR2(玻)、Hb A1c、hs-CRP、FPG水平高于非增生组,差异有统计学意义(P <0. 05);IL-8(房)、CXCR1(玻)、CXCR2(玻)三者的ROC曲线下面积(AUC)相近,皆小于Hb A1c,IL-8 (房)、CXCR1 (玻)、CXCR2(玻)诊断PDR的灵敏度、特异度相近(P> 0. 05),皆小于Hb A1c(P <0. 05)。结论 PDR患者房水及玻璃体中的高水平IL-8、CXCR1、CXCR2可能与PDR病变的进展密切相关; IL-8(房)、CXCR1(玻)、CXCR2(玻)诊断PDR具有较高的灵敏度、特异度,值得在临床上推广应用;高水平的IL-8(房)、CXCR1(玻)、CXCR2(玻)、Hb A1c均为DR为增生性的危险因素。
郑清梅, 王亚端, 谭双羽, 陈晓乐, 张南文[7]2019年在《抗体药物在糖尿病治疗应用的研究进展》文中进行了进一步梳理糖尿病是一种慢性高血糖的代谢性疾病。其发病率高、危害大,极大加重家庭的负担。现阶段,主要以胰岛素或者口服降糖药治疗为主,但血糖控制效果不佳,易引起低血糖等常见副作用和各种并发症。抗体药物具有高选择性和高治疗指数,是目前药物研究的热门方向。本文从T细胞、B淋巴细胞、胰高血糖素受体、血管内皮生长因子不同靶点论述了抗体药物在糖尿病治疗应用的研究进展,以期能为糖尿病的治疗提供参考依据。
参考文献：
[1]. 增生性玻璃体视网膜病变中炎前细胞因子的研究[D]. 石一宁. 第四军医大学. 1998
[2]. 人视网膜色素上皮细胞机械损伤模型中IL-8和MCP-1的表达[D]. 贾洪真. 第四军医大学. 2004
[3]. 增生性玻璃体视网膜病变增殖细胞Fas、Fas配体表达与凋亡及炎前因子对培养的人视网膜色素上皮细胞Fas、Fas配体表达的调控[D]. 刘兵. 第四军医大学. 1999
[4]. IL-1Ra对培养RPE炎前因子表达和实验性PVR的影响[D]. 宋宗明. 第四军医大学. 2001
[5]. IL-1β和TNF_(-α)对培养的人视网膜色素上皮细胞的影响[J]. 刘兵, 惠延年. 眼科研究. 2002
[6]. 增生性糖尿病视网膜病变患者房水及玻璃体中IL-8、CXCR1、CXCR2表达及意义[J]. 林菁, 包欣, 谢田华, 姚勇. 临床眼科杂志. 2019
[7]. 抗体药物在糖尿病治疗应用的研究进展[J]. 郑清梅, 王亚端, 谭双羽, 陈晓乐, 张南文. 中国临床药理学杂志. 2019