董欣[1]2017年在《1、鼻咽癌放疗反应相关的医学生物学标志 2、OLC1基因在膀胱癌中异常表达及其医学生物学意义》文中研究说明第一章鼻咽癌放疗反应相关的医学分子生物学标志鼻咽镜下取活检获得组织病理学诊断是鼻咽癌诊断的金标准。放射治疗是目前原发鼻咽癌首选和最有效的治疗手段,但仍有约四分之一的患者对放射治疗不敏感。如若能够在治疗之前对患者对放疗的反应进行预测评估,则有助于针对不同患者制定个体化治疗方案,改善治疗效果。因此,发现、鉴定鼻咽癌放疗敏感性相关的医学生物学标志,成为这一领域重要的研究课题。本项研究首先归纳分析了 2014-2016年期间中国医学科学院肿瘤医院收治的100例鼻咽癌患者的临床资料,旨在探讨基于窄带成像(narrow band imaging,NBI)技术的鼻咽镜下肿瘤表面微血管显露情况与放疗后肿瘤消退情况的关系。随后采用基因芯片的方法对两组不同放疗反应的鼻咽癌(共20例)的肿瘤组织中差异表达microRNA进行筛选,并预测其靶基因且进行功能分析;进而采用新一代测序技术对10例鼻咽癌肿瘤和癌旁组织进行转录组测序分析,筛选差异表达基因并进行功能分析。结合两种方法分析不同放疗反应组间差异表达分子功能与血管生成的关系。另外,探讨了 EB病毒基因在鼻咽癌肿瘤组织中的表达,且分析其表达情况与鼻咽癌放疗反应的关系。在100例鼻咽癌病例中分析发现,NBI内镜下肿瘤表面微血管显露情况与放疗敏感性呈显着正相关(p=0.006,X2=19.268),即微血管显露评级越高,肿瘤放疗后消退越快。基于这一发现,采用免疫组织化学的方法检查了 89例鼻咽癌肿瘤组织中VEGF、EGFR和Ki67蛋白的表达,结果显示其表达情况与NBI内镜下肿瘤表面血管显露相关。采用芯片技术分析了放疗敏感和放疗不敏感的鼻咽癌各10例肿瘤和癌旁组织的microRNA表达谱,在肿瘤与癌旁组和放疗高敏感与放疗低敏感组分别筛选得到了 78个和41个差异表达microRNA。使用3个公共数据库miRBase,TargetScan和PicTar进行靶基因预测。对肿瘤和癌旁组,要求在全部3个数据库中预测到其靶基因;对于放疗高敏感和低敏感组,要求至少在两个数据库中预测到其靶基因。进而采用Panther软件分别分析其靶基因的生物学功能,结果显示Angiogenesis通路均处在肿瘤和癌旁组、放疗高敏感和低敏感组靶基因功能富集结果中。这说明不同放疗敏感性的鼻咽癌组织中差异表达的microRNA预测得到的靶基因功能富集主要与血管生成有关。采用新一代测序技术对10例鼻咽癌肿瘤和癌旁组织进行转录组测序,在鼻咽癌癌旁与肿瘤组之间差异表达的基因中,发现上调的基因有3432个,下调的基因有4453个;在肿瘤表面微血管显露与未显露组之间差异表达的基因中,发现上调的有379个,下调的基因有392个;在肿瘤放疗高敏感和放疗低敏感组之间差异表达的基因中,发现上调的有115个,下调的基因有132个。叁种不同组合比较共有105个共有的差异基因。信号通路富集分析显示,Jak-STAT通路和VEGF等信号通路与鼻咽癌的放疗反应相关。VEGF通路在肿瘤血管生成过程中扮演重要角色,这与临床观察的肿瘤微血管显露情况相一致。另外,转录组测序数据显示,EB病毒编码基因在鼻咽癌肿瘤组织中特异性的高表达,且EBER1/2在鼻咽癌病例中的表达情况可能与肿瘤放疗反应相关。上述研究资料提示:NBI鼻咽镜下观察到的肿瘤微血管显露情况可预示放疗后肿瘤消退情况;不同放疗反应的鼻咽癌差异表达microRNA谱和转录组差异表达基因其生物学功能与血管生成有关,EB病毒基因也在鼻咽癌放疗后肿瘤消退过程中发挥作用。NBI内镜下鼻咽癌肿瘤表面的微血管显露情况,以及肿瘤组织中宿主和EB病毒的异常表达基因(如VEGF通路和Jak-STAT通路,等),有可能作为鼻咽癌放疗反应相关的医学、分子生物学标志,在治疗前对放疗后肿瘤消退情况进行预测和评估。第二章OLC1基因在膀胱癌中异常表达及其医学生物学意义本实验室前期工作发现并鉴定的肺癌相关基因OLC1在多种恶性肿瘤中表达异常,但目前尚未见OLC1与膀胱癌的研究报道。本项研究首先分析了 OLC1在膀胱癌中的表达情况,随后分析了 OLC1基因异常表达的临床意义,继而进一步探讨了该基因在膀胱癌细胞中的生物学功能。在mRNA水平,RT-PCR分析结果显示,OLC1基因在膀胱癌患者的肿瘤组织中的表达显着高于正常膀胱黏膜组织(p<0.001),且在肌层浸润性膀胱癌(41/70)中表达高于非肌层浸润性癌(29/70)(p<0.05),在吸烟患者(24/70)中表达高于非吸烟患者(46/70)(p<0.01);在蛋白质水平,免疫组织化学分析显示OLC1在37.7%(43/114)膀胱癌组织中高表达,在55例肌层浸润性癌中,52.7%(29例)呈高表达;而在59例非肌层浸润性癌中,23.7%(14例)呈高表达。分析发现,在膀胱癌肿瘤组织中,OLC1的蛋白表达水平与肿瘤的病理学分期(p<0.001),以及患者的吸烟史(p=0.022)显着相关。对106例随访资料完整的膀胱癌患者病例信息进行分析,发现39例OLC1高表达的膀胱癌患者无瘤生存(disease free survival,DFS)中位数为49个月,67例OLC1低表达的患者DFS中位数为64个月,统计分析发现肿瘤组织中OLC1蛋白表达的高低与患者5年无瘤生存率无显着相关性(39.5%vs56.7%,p=0.156);39例OLC1高表达的膀胱癌患者总生存(overall survival,OS)中位数为110个月,67例OLC1低表达的患者OS中位数为95个月。OLC1高表达患者的5年总生存率与OLC1低表达患者的5年总生存率有显着差异(79.5%vs 88.1%,p=0.040)。合并分析OLC1表达和吸烟因素,在吸烟患者中有22例OLC1高表达,34例OLC1低表达,五年总生存率分别为71.4%和85.7%(p=0.032);吸烟人群中OLC1高表达的患者其五年总生存率显着低于非吸烟切OLC1低表达的患者(p=0.010)。体外实验显示,稳定表达外源性OLC1基因能够增加膀胱癌细胞T24和5637的增殖能力,同时也能够增强其侵袭能力。上述研究资料提示,OLC1基因在膀胱癌中存在异常表达,且能够增加膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力,同时其异常表达可能与膀胱癌患者,尤其是在吸烟膀胱癌患者的预后相关。
韦祝新, 李萍, 王仁生, 甘浪舸, 甘媚[2]2011年在《Ki67、nm23基因在鼻咽癌中的表达及其意义》文中认为目的:研究Ki67、nm23基因在鼻咽癌的表达以及同鼻咽癌临床分期、远处转移等的关系。方法:对66例鼻咽癌标本应用免疫组化法研究Ki67、nm23基因的表达情况。在66例中,33例有远处转移(有远处转移组),33例无远处转移(无远处转移组),其中,46例有颈淋巴结转移,20例无颈淋巴结转移。结果:①从Ki67表达水平来看有远处转移组的鼻咽癌组织明显高于无远处转移组(z=-5.395,P<0.001),而nm23的表达明显低于无远处转移组(z=-3.866,P<0.001);②Ki67的表达与临床分期呈正相关(r=0.268,P<0.05);nm23的表达与临床分期呈负相关(r=-0.246,P<0.05);③Ki67和nm23的表达与T分期无明显关系(分别为r=0.171、-0.130,均P>0.05);④Ki67、nm23的表达在有无淋巴结转移组无明显差异(z=-1.498、-0.901,P>0.05);⑤Ki67与nm23的表达呈负相关(r=-0.327,P<0.05)。结论:Ki67、nm23表达的增高和降低很可能是鼻咽癌的远处转移的因素之一;Ki67与nm23表达的高低与鼻咽癌的临床分期有关,在预后评估中Ki67、nm23表达的高低很有可能是重要的参考指标。
韦祝新[3]2002年在《Ki67基因在鼻咽癌中的表达及意义》文中研究说明目的：探讨Ki67基因在鼻咽癌的表达及其Ki67的表达与鼻咽癌远处转移、临床分期等的关系。方法：应用免疫组化法对66例鼻咽癌标本的核增殖相关基因Ki67表达情况进行检测。其中33例有远处转移，33例无远处转移。Ⅰ期患者1例，Ⅱ期患者18例，Ⅲ期期患者31例，Ⅳ期患者16例。46例有颈淋巴结转移，20例无颈淋巴结转移。结果：①有远处转移组的鼻咽癌组织，Ki67表达水平明显高于无远处转移组（P<0.001）。②Ki67的表达与临床分期正相关（P<0.05，R＝0.268〉。③Ki67的表达与T分期无明显关系。④有淋巴结转移的病例其Ki67的表达高于无淋巴结转移组，但统计学上无明显意义（P>0.05）。<WP=7>结论：Ki67表达的增高可能与鼻咽癌远处转移有关；Ki67表达的高低可能与鼻咽癌的临床分期有关。Ki67表达的高低有望成为评估预后的一个相关的指标。
岳玉秋[4]2008年在《COX-2、EGFR、Ki67及p53在鼻咽癌中的表达及意义》文中进行了进一步梳理鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)为我国多发肿瘤之一,其发病率为耳鼻喉科恶性肿瘤之首。鼻咽癌多发生于鼻咽部咽隐窝,顶后壁,其次为侧壁,极少发生于前壁及底壁。由于鼻咽部解剖位置隐蔽,鼻咽癌早期症状不典型,可表现为涕中带血;单侧耳鸣、耳闭塞感及头痛。大量研究已经证明:鼻咽癌的癌变过程中存在大量差异表达基因,涉及基因包括信号与蛋白传递、癌基因与原癌基因、免疫相关基因、凋亡基因,以及DNA结合转录和转录因子等范围。目前认为鼻咽癌的发生与遗传因素、病毒感染及环境因素等有关。而这些因素最终都表现在对基因和蛋白质表达水平的影响上。近年来的研究表明,环氧合酶一2(cyclooxygenase一2,COX一2)和表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,EGFR)不仅参与了细胞的增殖及分化,而且在肿瘤的浸润转移及血管生成等过程中起重要作用,促进肿瘤的发生和发展。但是,在鼻咽癌中的研究报道较少,且结果不一致。Ki67是一种细胞增殖核抗原,是一种周期相关基因,其表达与多种肿瘤的发生、发展、浸润、分期、转移有关,有研究表明其指数高低可用于评估恶性肿瘤的预后和判断远隔脏器转移的危险性。p53基因是重要的抑瘤基因,是细胞增生的主要负调控子,它通过调控细胞周期和启动细胞凋亡维持细胞的正常功能。目的:研究鼻咽癌组织中COX一2、EGFR、Ki67及p53蛋白的表达,并分析它们之间的相关性,以期对鼻咽癌的诊断、治疗及判断预后有所帮助。材料与方法:收集大连医科大学附属二院2002年-2007年存档鼻咽癌蜡块44例,其中有颈淋巴结转移32例,无淋巴结转移12例;随机取同期鼻咽部慢性粘膜炎活检蜡块32例用于对照。标本制成普通组织切片HE染色,光镜下观察,再次确定病理诊断。用免疫组化方法检测组织中COX一2、EGFR、P53及Ki67蛋白表达情况,并分析它们之间的相关性。最后应用SPSS11.5统计软件,以t检验和秩和检验对实验结果进行统计学分析,同时运用Spearman判断其相关性,差异显着性标准为P<0.05。结果:1.COX–2在鼻咽癌组中的阳性表达平均分值为3.9886±2.31900;阳性表达率为93.2 %。在慢性粘膜炎组中阳性表达平均分值为5.6250±2.64880;阳性表达率为100%。鼻咽慢性粘膜炎组的COX-2表达高于鼻咽癌组(P<0.05)。2.EGFR在鼻咽癌组中的阳性表达平均分值为3.0682±2.47215;阳性表达率为79.5%。在慢性粘膜炎组中阳性表达平均分值为5.5156±2.16081;阳性表达率为100%。鼻咽慢性粘膜炎组的EGFR表达高于鼻咽癌组(P<0.05)。3.Ki67在鼻咽癌组中的阳性指数平均值为25.7841%±26.70345%;阳性表达率为72.7%;高表达率为34.1%。在慢性粘膜炎组中阳性指数平均值为5.7656%±6.24627%;阳性表达率为37.5%;高表达率为0%。两组之间差异显着(P<0.05),即鼻咽癌组的Ki67表达高于鼻咽慢性粘膜炎组。4.p53在鼻咽癌组中的阳性表达平均分值为3.4886±2.78386;阳性表达率为84.1%。在慢性粘膜炎组中阳性表达平均分值为1.5313±1.29476;阳性表达率为71.9%。两组之间差异显着(P<0.05),即鼻咽癌组的p53表达高于鼻咽慢性粘膜炎组。5.鼻咽癌组中COX-2、EGFR、Ki67及p53的表达在有无淋巴结转移组之间未见显着差异(P>0.05)。6.在鼻咽癌组织中COX-2与EGFR的表达呈正相关,相关系数为0.349(P<0.05)。结论:1.COX-2与EGFR在鼻咽癌和鼻咽慢性粘膜炎组织中的表达率均较高,提示它们与鼻咽部慢性炎症以及鼻咽癌的发生、发展相关,并且不宜作为鼻咽癌病理诊断的指标。2.鼻咽癌组织中COX-2和EGFR的表达呈正相关,提示COX-2与EGFR在鼻咽癌的发生、发展中可能相互影响,共同或协同起作用。3.Ki67在鼻咽癌组织中的阳性表达率明显高于鼻咽慢性粘膜炎组,提示Ki67可作为判定鼻咽癌的恶性程度和预后的指标之一,有可能作为确定癌前人群中高危个体的生物学标志物。4.p53在鼻咽癌组织中的阳性表达率明显高于鼻咽慢性粘膜炎组,提示p53蛋白与鼻咽癌的发生、发展密切相关;并且可作为鼻咽癌病理诊断的参考指标之一。5.鼻咽癌中COX-2、EGFR、Ki67及p53的表达尚不能作为判断有无淋巴结转移的有用指标。
韦祝新, 王绍丰[5]2002年在《Ki67基因在鼻咽癌中的表达及其意义》文中进行了进一步梳理目的 :探讨 Ki6 7基因在鼻咽癌的表达及其与鼻咽癌远处转移、临床分期等的关系。方法 :应用免疫组化法对 6 6例鼻咽癌标本 Ki6 7基因表达情况进行检测 ,其中 33例有远处转移 ,33例无远处转移。 4 6例有颈淋巴结转移 ,2 0例无颈淋巴结转移。结果 :1有远处转移组的鼻咽癌组织 ,Ki6 7表达水平明显高于无远处转移组 (P<0 .0 0 1) ;2 Ki6 7的表达与临床分期呈正相关 (r =0 .2 6 8,P <0 .0 5 ) ;3Ki6 7的表达与 T分期无明显关系 ;4有淋巴结转移的病例其 Ki6 7的表达高于无淋巴结转移组 ,但差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :Ki6 7表达的增高可能与鼻咽癌远处转移有关 ;Ki6 7表达的高低可能与鼻咽癌的临床分期有关 ,Ki6 7表达的高低有望成为评估预后的一个相关的指标
朱大高[6]2011年在《VEGF-C，Ki67，nm23-H1在鼻咽癌原发灶中的表达及其与预后关系的研究》文中研究表明背景与目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的预后与许多因素有关,颈部淋巴结有无转移对鼻咽癌的预后有很大的影响。VEGF-C,Ki67,nm23-H1的表达对鼻咽癌颈部淋巴结转移的作用国内外很少见报道。本研究拟通过检测VEGF-C,Ki67,nm23-H1在鼻咽癌中的表达并分析其与不同临床病理特征、预后的关系,探讨叁者在鼻咽癌颈部淋巴结转移发生过程中的作用及相关性。方法:选择2001年8月至2006年12月在安徽省立医院耳鼻咽喉科活检的鼻咽癌组织存档石蜡标本44例,男29例,女15例,男:女=1.93:1;年龄26-81岁,中位年龄55岁。采用免疫组化SP法检测标本中肿瘤组织VEGF-C,Ki67,nm23-H1蛋白的阳性表达率,并对全部病例进行随访。数据采用SPSS13.0软件进行统计分析,VEGF-C,Ki67,nm23-H1蛋白表达组间差异比较采用χ2检验;预后的单因素分析采用Kaplan-meier曲线,组间比较应用log-rank检验;预后的多因素分析采用Cox比例风险模型;相关分析采用spearman等级相关分析方法。P<0.05为差异有统计学意义。结果: VEGF-C、Ki67、nm23-H1在NPC组织中的阳性表达率分别为72.7%、77.3%、45.5%。VEGF-C、Ki67、nm23-H1的阳性表达率均与T分期、临床分期、KPS评分、是否贫血等均无关(P>0.05),而与年龄、N分期、首程治疗是否达到CR、生存时间是否大于5年有显着相关性(P<0.05)。VEGF-C与Ki67呈正相关性(r=0.97,P=0.000),与nm23-H1负相关(r=-0.66,P=0.016),Ki67与nm23-H1无相关性(P=0.074)。VEGF-C和Ki67在颈淋巴结阳性组的表达率明显高于颈淋巴结阴性组(P<0.05),而nm23-H1则相反,且有统计学差异。全组病例死亡25例,生存19例,中位生存时间46.5个月(生存时间8—98个月),3年、5年生存率分别为65.9%、43.2%。单因素分析显示:性别、年龄、治疗前KPS评分、T分期、N分期、临床分期、首程治疗后是否完全缓解、VEGF-C、Ki67及nm23-H1等11个因素对鼻咽癌生存有影响(P<0.05),多因素回归分析表明,N分期、首程治疗后是否完全缓解、VEGF-C是鼻咽癌患者独立的预后因素(P<0.05)。结论:1、VEGF-C和Ki67在颈部淋巴结阳性的患者中的表达高于无淋巴结转移者,两者呈正相关,提示两者可能对颈部淋巴结转移起了正协同作用,并且显着影响了患者远期生存率,是预后的不良因素。Ki67和nm23-H1高表达患者的首程CR率明显高于低表达患者,VEGF-C在鼻咽癌组织中的表达则相反,显示NPC组织中Ki67、nm23-H1高表达、VEGF-C低表达的患者对放疗更加敏感。2、nm23-H1在颈部淋巴结阳性患者表达率小于无颈部淋巴结转移患者,且nm23-H1高表达的5年生存率明显高于低表达患者,是较好的预后因素。3、N分期、首程治疗后是否完全缓解、VEGF-C是鼻咽癌患者独立的预后因素。包括性别、年龄、治疗前KPS评分、T分期、临床分期、Ki67及nm23-H1,可作为预测鼻咽癌临床疗效和判断预后的参考指标。
黄维[7]2016年在《CD3、Ki-67和Bcl-2在宫颈癌中的表达及临床意义》文中提出目的:通过对CD3、Ki-67和Bcl-2在不同宫颈组织中的表达以及叁者与宫颈癌临床病理特征之间关系的研究,探讨叁者在宫颈癌发生发展中的作用及意义,为宫颈癌的诊断及分子靶向治疗提供理论依据。方法:1.收集2014年1月至2015年11月间兰州大学第一医院因手术切除并经病理确诊的不同宫颈组织标本118例(正常宫颈组织27例、CIN I组织12例、CIN II-III组织28例、宫颈癌组织51例)。2.入选标本患者术前均未接受放化疗及生物学治疗,无合并免疫系统相关疾病。3.采用免疫组化法检测正常宫颈组织、CIN I组织、CIN II-III组织及宫颈癌组织中CD3、Ki-67和Bcl-2的表达,应用SPSS17.0软件包对所得结果进行统计学分析。结果:1.CD3阳性表达率随宫颈病变加重而下降,在正常宫颈组织、CIN I组织、CIN II-III组织、宫颈癌组织中表达率为96.3%、75%、57.1%、37.2%,四组间比较,有显着性差异(P<0.05);其中正常宫颈组织分别与CIN I、CIN II-III、宫颈癌组织比较,有显着性差异(P<0.05);CIN I与宫颈癌组织比较,有显着性差异(P<0.05);但CIN II-III与CIN I、宫颈癌组织比较,无显着性差异(P>0.05)。CD3阳性表达率与FIGO分期、有无淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、组织学类型、病理分级无关(P>0.05)。2.Ki-67在正常宫颈组织、CIN I组织、CIN II-III组织和宫颈癌组织中的阳性表达率依次递增,分别为3.7%、16.7%、53.6%、86.3%,四组间比较,有显着性差异(P<0.05);分别进行两两比较,正常宫颈组织与CIN II-III、宫颈癌组织比较,CIN I与CIN II-III、宫颈癌组织比较,CIN II-III与宫颈癌组织比较,均有显着性差异(P<0.05);但正常宫颈组织与CIN I组织比较,无显着性差异(P>0.05)。Ki-67与病理分级有关(P<0.05),与患者年龄、FIGO分期、组织学类型及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。3.Bcl-2阳性表达率随宫颈病变程度的增加而升高,在正常宫颈组织、CIN I组织、CIN II-III组织和宫颈癌组织中表达率为0、16.7%、35.7%、74.5%,四组间比较,有显着性差异(P<0.05);其中,正常宫颈组织与CIN II-III、宫颈癌组织比较,CIN I与CIN II-III、宫颈癌组织比较,CIN II-III与宫颈癌组织比较,均有显着性差异(P<0.05);但正常宫颈组织与CIN I组织比较,无显着性差异(P>0.05)。Bcl-2阳性表达率与FIGO分期、病理分级和有无淋巴结转移相关(P<0.05),与患者年龄、组织学类型无关(P>0.05)。4.CD3和Ki-67在宫颈癌组织中的表达呈负相关(r=-0.400,P=0.004);CD3和Bcl-2在宫颈癌组织中的表达呈负相关(r=-0.387,P=0.005);Ki-67和Bcl-2在宫颈癌组织中的表达无相关性(r=0.028,P=0.844)。结论:1.CD3低表达和Ki-67、Bcl-2高表达与宫颈癌发生发展密切相关,CD3、Bcl-2在宫颈病变早期已有变化,两者可能是宫颈癌发生的早期事件。2.在宫颈癌中CD3的表达与临床分期及有无淋巴结转移有关,Ki-67的表达与病理分级有关,Bcl-2的表达与临床分期、病理分级、有无淋巴结转移均有关,提示叁者在宫颈癌进展转移中起重要的作用。3.在宫颈癌中CD3与Ki-67、Bcl-2的表达呈负相关,叁者可能共同促进宫颈癌的浸润转移,深入研究叁者间的作用机制,可能为宫颈癌靶向治疗提供新的思路。
冼伟均[8]2010年在《~（18）F-FDGPET-CT早期评估鼻咽癌放疗疗效及与Ki67表达相关性分析的动物和临床研究》文中研究说明目的: 1、研究~(18)F-FDG PET-CT显像早期评估裸鼠鼻咽癌移植瘤放疗疗效的作用,并探讨放疗后早期合适的显像时间; 2、研究Ki67表达在裸鼠鼻咽癌移植瘤放疗不同时期的变化; 3、研究鼻咽癌患者放疗不同时期~(18)F-FDG PET-CT显像的特点,并探讨鼻咽癌患者放疗后早期~(18)F-FDG PET-CT显像的可行性及价值; 4、研究双时相显像在鼻咽癌放疗过程中的显像特点; 5、探讨鼻咽癌放疗前Ki67表达与SUVmax及其在放疗过程中变化的关系。方法: 1、15只种植了鼻咽癌移植瘤的裸鼠随机分成对照组、6Gy放疗组、12Gy放疗组叁组,于放疗前、6Gy放疗后、12Gy放疗后第一天、第二天、第四天及第六天分别行~(18)F-FDG PET-CT显像,分别测定瘤体的最大横截面积及T/NT比值,并于最后一次显像结束后处死行病理检查;2、将不同组别裸鼠移植瘤用免疫组化方法检测瘤体中Ki67蛋白表达情况,分析它们在放疗不同阶段的变化以及与T/NT的关系。3、12例初治鼻咽癌患者于放疗前、放疗50Gy时及放疗后1周分别行~(18)F-FDG PET-CT显像,测定SUVmax,分别对不同肿瘤分期、不同肿瘤消退率的SUVmax进行比较,并将放疗结束后1周的SUVmax与放疗结束后平均5个月进行PET-CT显像的无复发患者SUVmax进行比较。4、12例初治鼻咽癌患者于放疗前、放疗50Gy及放疗结束后1周分别行早期~(18)F-FDG PET-CT显像及延迟显像,测定所有PET-CT显像的SUVmax并进行比较分析。5、取12例鼻咽癌患者放疗前活检蜡块,用免疫方法检测组织中Ki67蛋白表达情况,并分析其与放疗不同阶段SUVmax的相关性。结果: 1、①移植瘤最大横截面积于放疗后第6天缩小19.31%±5.19%,与放疗前比较有统计学差异(t=5.684,P<0.01);②开始放疗后裸鼠移植瘤T/NT比值不断降低,到放疗后第6天T/NT降低至0.70±0.12,较放疗前、放疗6Gy、放疗12Gy后第1天、第2天降低均有显着统计学意义(P<0.01);2、①鼻咽癌移植瘤Ki67抗原的表达随放疗剂量的增加明显降低,不同组别间Ki67的表达有明显差别(F=12.5,P<0.01):12Gy放疗组Ki67表达显着低于对照组(P<0.01)及6Gy放疗组(P<0.01);6Gy放疗组Ki67的表达较对照组减低同样存在统计学意义(P<0.01)。②放疗过程中移植瘤FDG摄取(T/NT)的变化与Ki67表达水平明显相关(相关系数r=0.732,P<0.01)。3、①鼻咽癌放疗前SUVmax与肿瘤最大横截面积之间存在着正相关(相关系数r=0.746,P<0.01);②肿瘤分期高(III+IV)的患者的SUVmax在放疗前、放疗50Gy时及放疗后1周均高于分期低的患者(I+II);③肿瘤消退率≥90%的患者在放疗50Gy时SUVmax为2.36±0.21,低于肿瘤消退率<90%的患者3.45±1.07,两者有统计学差异(t=2.235,P<0.05);④放疗结束后1周平均SUVmax为2.45±0.35,放疗阴性对照组平均SUVmax为2.49±0.57,两者没有统计学差异(t=0.179,P>0.05)。4、①放疗前早期显像平均SUVmax为9.63±4.51,延迟显像平均SUVmax为10.53±5.03,较早期显像升高8.63±7.83%,两者有显着统计学差异(t=3.938,P<0.01);②放疗50Gy时,早期显像较放疗前显着降低,平均SUVmax为3.00±0.98,延迟显像平均SUVmax未见明显变化,为3.06±1.31,两者间没有统计学差异(t=0.516,P>0.05);③放疗结束后1周,早期显像SUVmax为2.45±0.35,延迟显像为2.34±0.35,较前变化-4.43±6.14%,两者间有统计学差异(t=2.6,P<0.05)。5、①鼻咽癌放疗前SUVmax与Ki67表达之间没有关联性(P>0.05);②在放疗50Gy时,Ki67高表达的患者SUVmax水平明显低于低表达者,两者有统计学差异(t=2.235,P<0.05)。结论: 1、放疗后鼻咽癌移植瘤FDG摄取水平的变化早于形态学的变化,提示~(18)F-FDG PET-CT能够早期评估鼻咽癌的放疗效果。2、放疗后第6天鼻咽癌移植瘤的FDG摄取明显降低,显示炎性渗出对放疗后肿瘤组织FDG摄取代谢的影响降至较低的水平,可能是监测鼻咽癌放疗疗效最早期的合适时间点。3、在放疗过程中移植瘤的FDG摄取变化与Ki67表达水平的变化呈正相关,提示移植瘤细胞在放疗过程中增殖活性的降低是引起FDG摄取降低的主要因素之一。4、鼻咽癌的分期、瘤体大小是影响放疗前SUVmax的重要因素,而Ki67表达水平与放疗前SUVmax无关。5、鼻咽癌根治性放疗结束后1周行~(18)F-FDG PET-CT检查能够正确判断鼻咽癌放疗疗效。6、双时相显像有利于鼻咽癌放射治疗的早期疗效评价。7、放疗前Ki67表达水平高的患者在放疗过程中SUVmax降低较快,提示Ki67表达是放疗过程中SUVmax变化的重要影响因素。
赵孟阳[9]2016年在《miR-3188参与FOXO1调节mTOR-pPI3K/AKT-c-JUN正反馈通路抑制鼻咽癌细胞的增殖》文中研究指明研究背景与目的MicroRNAs (miRNAs或miRs)在人类各种疾病的发展,细胞分化,增殖,周期调控,细胞死亡中发挥重要的作用,也包括肿瘤的发生与发展。MiR-3188作为近年来新发现的miRNA,在肿瘤中的功能和机制目前还未有任何报导。鼻咽癌是发生于鼻咽粘膜的一种上皮来源的恶性肿瘤,通常集中发生在东南亚地区,鼻咽癌的发生可能与EB病毒感染、特定饮食习惯、基因易感性等因素有关。尽管在美国非常少见,却占儿童鼻咽肿瘤的叁分之一。在现在的研究中,miRNAs的异常表达广泛涉及到了鼻咽癌的病理进程。比如,EBV病毒编码的microRNA BART1通过调控PTEN介导的信号通路促进了鼻咽癌细胞的转移。此外,在前期的研究中,我们发现抑癌基因PDCD4通过调控miR-184进而抑制c-MYC和BCL2的表达来调节鼻咽癌细胞的增殖和凋亡。FOXO1转录因子属于翼状螺旋/叉头转录因子家族中的一员,AKT能够促进FOXO1磷酸化从而出核而失去活性。以前研究表明FOXO1主要通过调节细胞周期进展,分化,代谢以及凋亡而发挥肿瘤抑制因子的作用。进一步的,FOXO1的低表达已经在多种肿瘤里面展示,比如霍奇金淋巴瘤,乳腺癌,横纹肌肉瘤等等。虽然该基因在肿瘤研究已经有较多的报道,然而在鼻咽癌中,该基因功能和具体的分子机制几乎没有报道,目前仅有研究表明FOXO1参与了LMP1介导的鼻咽癌细胞周期进展以及化疗抵抗；高表达的磷酸化的AKT与磷酸化的FOXO1有相关性。在本次研究中,我们分析了miR-3188, mTOR和FOXO1在鼻咽癌中的关系并且发现miR-3188-mTOR-pPI3K/AKT-c-JUN变异环路,这个变异环路抑制了鼻咽癌细胞的增殖,为鼻咽癌发生发展的分子机制研究提供新思路。研究内容与方法1.miR-3188对鼻咽癌细胞生物学功能的影响及其分子机制(1)利用MTT实验、平板克隆形成实验、细胞周期、Edu与裸鼠皮下成瘤实验观察miR-3188对细胞生长、增殖能力的影响,确定miR-3188在鼻咽癌细胞中的功能；(2)为了明确miR-3188抑制鼻咽癌细胞增殖的机制,Western blot检测miR-3188对p-AKT, p-PI3K, c-JUN, CCND1, P21, P27蛋白表达的影响。2.miR-3188靶基因验证(1)利用生物信息学软件预测nTOR为miR-3188的一个直接靶标；(2)荧光定量PCR检测过表达或干扰miR-3188的细胞中mRNA水平mTOR表达的变化；(3) Western blot实验检测过表达或干扰miR-3188的细胞中蛋白水平mTOR和p-mTOR表达的变化；(4)免疫组化实验检测过表达miR-3188的裸鼠皮下成瘤组织中mTOR的表达；(5)利用双荧光素酶报告实验确定miR-3188直接靶向mTOR;(6)MTT实验,Edu实验和细胞周期实验检测mTOR对过表达miR-3188的鼻咽癌细胞增殖功能的影响；(7) Western blot检测干扰mTOR后下游基因nTOR, p-mTOR, PI3K, P-PI3K, AKT, P-AKT, CCND1和c-JUN的变化。3. C-JUN通过结合在miR-3188的启动子区抑制其表达(1)为了预测miR-3188的转录调节作用,利用生物信息学软件分析了miR-3188转录起始位点上游3000kb的长度,发现有3个c-JUN的结合位点；(2)荧光定量PCR检测干扰c-JUN的鼻咽癌中,miR-3188表达的改变；(3) EMSA实验证明miR-3188启动子上c-JUN的叁个结合位点是否有效；(4)CHIP实验进一步证明c-JUN与miR-3188的启动子结合；(5)双荧光素酶报告实验验证c-JUN能够调节miR-3188启动子区的活性进而抑制其转录。4. FOXO1在鼻咽癌中的功能和机制研究(1)利用MTT实验、平板克隆形成实验、细胞周期、Edu与裸鼠皮下成瘤实验观察FOXO1对细胞生长、增殖能力的影响,确定miR-3188在鼻咽癌细胞中的功能；(2)为了明确miR-3188抑制鼻咽癌细胞增殖的机制,Western blot检测FOXO1对p-AKT, p-PI3K, c-JUN, CCND1, P21, P27蛋白表达的影响；(3)用免疫荧光和免疫组化实验证明FOXO1能够调控c-JUN的表达水平；(4)CHIP实验验证过表达FOXO1使c-JUN与miR-3188的启动子区结合量减少。5. FOXO1调节miR-3188的表达(1)应用miRNAs表达谱芯片筛选过表达FOXO1后差异表达miRNAs,选取表达差异显着的miR-3188用荧光定量PCR进一步验证；(2)MTT实验,Edu实验检测在过表达FOXO1的鼻咽癌细胞中加入miR-3188inhibitor能否逆转过表达FOXO1的功能；(3) Western blot实验检测在过表达FOXO1的鼻咽癌细胞中加入miR-3188inhibitor能否逆转相关蛋白的表达水平；(4)加入PI3K抑制剂Ly294002验证FOXO1是否通过PI3K/AKT信号通路调节miR-3188的表达。6.miR-3188在鼻咽癌组织中的表达特性及相关性分析(1)荧光定量PCR检测miR-3188在鼻咽癌组织,鼻咽癌细胞和鼻咽黏膜组织中的表达情况；(2)利用原位杂交的方法检测miR-3188在鼻咽癌组织和鼻咽黏膜组织中的表达情况；(3)荧光定量PCR检测mTOR, C-JUN, FOXO1在鼻咽癌组织和鼻咽黏膜组织中的表达情况；(4)MiR-3188与mTOR, C-JUN, FOXO1的相关性分析。结果1.miR-3188抑制鼻咽癌细胞的增殖(1)荧光定量RCR结果显示miR-3188在永生化鼻咽上皮细胞NP69和SXSW-1489中表达高于鼻咽癌细胞；(2)体外功能试验MTT,平板克隆,细胞周期,Edu实验结果显示,在HONE1-EBV和SUNE1细胞株中过表达miR-3188显着抑制了细胞周期G1向S期转化；在5-8F和NP69细胞中抑制miR-3188显着促进了细胞周期G1向S期转化；(3)裸鼠皮下成瘤实验证明了过表达miR-3188的鼻咽癌细胞体内成瘤能力明显降低,ki-67和PCNA的表达量与对照组相比也明显降低,这表明了miR-3188在体内抑制肿瘤形成；(4)机制研究表明了在鼻咽癌细胞HONE1-EBV和SUNE1中miR-3188过表达降低了c-JUN和CCND1的表达但是增强了p27和p21的变达,miR-3188inhibitors能够恢复降低的水平。有趣的是,干扰5-8F细胞中的miR-3188表现出了相反的作用,miR-3188 inhibitor也能够逆转这个相反的作用。进一步我们发现p-PI3K,p-AKT在过表达miR-3188的HONE1-EBV和SUNE1细胞中低表达而在miR-3188表达抑制的的5-8F中高表达。综合以上结果表明了miR-3188可能通过失活PI3K/AKT信号通路以及下游的c-JUN来抑制鼻咽癌细胞生长和细胞周期G1向S期转换。2.miR-3188直接靶向mTOR并抑制其表达(1)利用生物信息学软件TargetScan和RNAhybrid algorithms预测到mTOR是miR-3188的一个靶基因：(2)PCR结果显示在过表达miR-3188的HONE1-EBV和SUNE1细胞中mTOR表达水平降低,而在干扰miR-3188的5-8F和NP69细胞中mTOR表达水平升高；(3)与体外结果相似,免疫组化在移植瘤中检测mTOR的表达水平,结果表明过表达达miR-3188的移植瘤中mTOR表达水平降低；成功构建了psiCHECK-2/mTOR wt 3'UTR质粒和psiCHECK-2/mTORmt3'UTR质粒,分别与miR-3188 mimics、miR-3188 inhibitor共转染293FT细胞,以psiCHECK-2空载质粒作为对照组,转染48h后检测荧光素酶活性。结果表明,psiCHECK-2/mTOR wt 3'UTR和miR-3188 mimics共转染可明显降低荧光素酶的活性,差异具有统计学意义(t--7.07,P=0.002),而与miR-3188 inhibitor共转染可显着增强荧光素酶活性,差异具有统计学意义(t=-4.90,P=0.008)。突变质粒psiCHECK-2/mTOR mt 3'UTR分别与miR-3188 mimics和inhibitor共转染后,荧光素酶活性没有明显变化(t=-2.41, P=0.074; t=-2.46,P=0.070)。以上结果表明,miR-374a能够特异性结合mTOR3'UTR。3. mTOR过表达能够逆转miR-3188的功能和机制(1)MTT和Edu实验证明了在过表达miR-3188的鼻咽癌细胞中瞬转mTOR质粒增强了细胞的增殖能力及促进了细胞周期G1向S期转化；(2)进一步的我们发现miR-3188过表达增强了c-JUN和CCND1的表达但是降低了p27和p21,这些结果表明了mTOR过表达能够逆转miR-3188的抑制功能；(3)接下来,我们发现,干扰mTOR表达后,mTOR, p-mTOR, p-PI3K, p-AKT, CCND1和c-JUN的表达水平明显降低,而p27和p21的表达水平显着升高,这些结果一致于miR-3188过表达的结果,说明miR-3188直接靶向mTOR进而抑制细胞增殖。4. C-JUN直接结合到miR-3188的启动子区抑制其转录(1)生物信息学软件预测了miR-3188启动子区C-JUN的3个结合位点分别在miR-3188启动子上游-492～-498,-1628～-1634,-2356～-2362。分别命名为结合位点A、B、C；(2)荧光定量PCR结果表明了干扰C-JUN后,miR-3188的表达水平显着增高,说明了C-JUN位于miR-3188的上游调节其表达；(3) EMSA结果显示DIG-ddUTP标记的C-JUN探针与SUNE1和HONE1-EBV的核蛋白共同孵育形成了一条迁移条带(泳道2和8),而加入未标记的寡核酸c-JUN与之探针竞争性结合则不显示条带(泳道6和12)。当突变型的A、B、C竞争性结合SUNE1和HONE1-EBV细胞中DIG-ddUTP-标记的A、B、C时条带不受影响(泳道3-5,泳道9-11)。EMSA实验结果表明了miR-3188启动子区的c-JUN的3个结合位点都是有作用的。(4)CHIP实验进一步证明了c-JUN能与miR-3188启动子区的叁个位点结合；(5)进一步的我们发现在HEK293T, SUNE1和HONE1-EBV细胞中过表达C-JUN能够降低miR-3188启动子的活性,在HEK293T, SUNE1和HONE1-EBV细胞中同时突变结合位点A和B,结合位点B和C,结合位点B和C之后,荧光素酶活性也明显降低；同时突变A,B,C叁个结合位点后不影响荧光素酶活性。这些结果表明了C-JUN能够结合miR-3188的启动子区抑制其表达。5. FOXO1抑制PI3K/AKT信号通路(1)为了验证FOXO1在鼻咽癌细胞中的功能,我们用慢病毒在鼻咽癌细胞中过表达了FOXOl。MTT,平板克隆,细胞周期,Edu实验结果显示,在HONE1-EBV和SUNE1细胞株中过表达FOXO1显着抑制了细胞周期G1向S期转化；而在过表达FOXO1的细胞中加入促进了细胞周期G1向S期转化；(2)裸鼠皮下成瘤实验证明了过表达FOXO1的鼻咽癌细胞体内成瘤能力明显降低,ki-67和PCNA的表达量与对照组相比也明显降低,这表明了FOXO1在体内抑制肿瘤形成；(3)机制研究结果显示,过表达FOXO1显着抑制了p-PDK, p-AKT, mTOR和p-mTOR的表达。进一步的,外源性的FOXO1下调了c-JUN和CCND1的表达但是上调了p21和p27的表达。有趣的是,相反的结果出现在siRNA介导的抑制过表达FOXO1的细胞中。更进一步的,P13K抑制剂Ly294002显着的逆转了p-PDK, p-AKT, mTOR, p-mTOR, c-JUN, CCND1, p21和p27的表达水平；(4)免疫荧光实验证明了在过表达FOXO1的鼻咽癌细胞中C-JUN的表达水平下调,而免疫组化实验也证明了过表达FOXO1的移植瘤中C-JUN的表达水平降低。进一步的,CHIP实验证明了与对照细胞相比,在过表达FOXO1的鼻咽癌细胞中C-JUN与miR-3188启动子区的结合能力明显降低。这些结果都表明了FOXO1通过调节PI3K/AKT/c-JUN信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖以及细胞周期的进展。6. FOXO1抑制PI3K/AKT/c-JUN信号通路诱导miR-3188的表达(1)荧光定量RCR证明了FOXO1正向调节miR-3188；(2)MTT和Edu实验表明了用miR-3188特异抑制剂抑制miR-3188的表达后能够逆转过表达FOXO1抑制细胞增殖的功能；(3) Western blot结果显示miR-3188抑制剂增加了p-PI3K, p-AKT, c-JUN和CCND1的表达但是减少p27和p21的表达在FOXO1过表达的鼻咽癌细胞中；(4)PI3K特异性抑制剂能够逆转同时加入siFOXO1和FOXO1细胞中miR-3188的水平；这表明了FOXO1能够通过PI3K/AKT正向调控miR-3188的表达以上这些结果证明了FOXO1抑制PI3K/AKT/c-JUN信号通路诱导miR-3188的表达。7.miR-3188与临床病理参数的关系(1)与正常鼻咽咽黏膜组织相比,miR-3188在鼻咽癌细胞和鼻咽癌组织中低表达(分别为P=0.00037,P=0.00033)；(2)进一步的,原位杂交结果证实了miR-3188在鼻咽癌组织中低表达；(3) 临床病理资料显示,在142例鼻咽癌组织中,miR-3188与病人的年龄,性别,临床分期,淋巴结转移(N分期)和远处转移(M分期)没有相关性,但与肿瘤的大小(T分期)呈负相关(P=0.011)；(4)生存分析结果显示,高表达miR-3188更有利于患者的预后。8.miR-3188与mTOR, FOXO1和c-JUN的相互关系(1)荧光定量PCR结果表明与正常鼻咽黏膜组织相比,mTOR和c-JUN在鼻咽癌中表达上调(分别是P=0.0282,P<0.0001),FOXO1在鼻咽癌组织中表达下调(P<0.0001)；(2)在鼻咽癌组织中,miR-3188与mTOR表达呈负相关(P=0.0288),与C-JUN表达呈负相关(P=0.0006),而与FOXO1表达呈正相关(P=0.0326)。结论1.miR-3188通过PI3K/AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖；2.miR-3188直接靶向mTOR;3. mTOR过表达逆转了miR-3188介导的细胞生长抑制；4. C-JUN直接结合到miR-3188的启动子区；5. FOXO1通过PI3K/AKT/C-JUN信号通路诱导miR-3188的表达并抑制鼻咽癌细胞的增殖；6.miR-3188表达下调在鼻咽癌中是一个不利的预后因素,miR-3188的表达与FOXO1正相关,与mTOR和c-JUN的表达呈负相关。
谢凤梅, 欧阳绍基[10]2018年在《Ki67、MMP-1、MMP-2在鼻咽癌中的表达及意义》文中研究说明目的研究Ki67、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2在鼻咽癌中的表达及意义。方法收集2016年6月至2017年6月在该院确诊为鼻咽癌的活检组织标本79例作为鼻咽癌组,同期选择40例鼻咽慢性炎组织标本为鼻咽慢性炎组,采用免疫组织化学法检测两组切片组织中Ki67、MMP-1、MMP-2表达。结果鼻咽癌组织中Ki67、MMP-1及MMP-2阳性表达率均明显高于鼻咽慢性炎组(P<0.05),且鼻咽癌颈部淋巴转移组阳性表达率均明显高于非转移组(P<0.05)。经Spearman相关分析,Ki67表达与MMP-1、MMP-2表达均为正相关(r1=0.205,P<0.05;r2=0.140,P<0.05),MMP-1表达与MMP-2呈正相关(r=0.129,P<0.05)。结论在鼻咽癌组织中Ki67、MMP-1、MMP-2均为高表达,且叁者表达均呈正相关,在鼻咽癌的发生发展以及淋巴结转移中起协同作用,可对鼻咽癌早期诊断及预后提供有利的参考价值。
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