（西南医科大学附属口腔医院 四川 泸州 646000）
【摘要】目的：对比不同时间间隔下大鼠口腔鳞癌模型的成模差异，为建立优质的大鼠口腔鳞癌模型提供支持。方法：屏障环境下使用0.004%的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO）水溶液喂养大鼠，通过自行饮用观察两组大鼠在不同时间下分批处死后，口腔黏膜病理分级情况。结果：165只有效实验大鼠，正常黏膜36只、单纯上皮增生21只、上皮轻度异常增生22只、上皮中度异常增生25只、上皮重度异常增生27只、口腔鳞癌25只。采用等级资料两样本的秩和检验（Z=1.66,0.01<P<0.05），两组资料差异具有统计学意义。结论：两种不同间隔时间建立模型，在前期成模中第一组方法优于第二种，在后期成模中第二组方法优于第一组。
【关键词】口腔肿瘤；动物模型；4NQO；口腔鳞状细胞癌
【中图分类号】R739.85 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）32-0124-03
口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC，简称口腔鳞癌)是位居第18的危害人类健康的恶性肿瘤[1]。希望通过体外模型或动物模型来研究分析口腔鳞癌的发生发展过程，为其治疗提供思路和依据。
口腔鳞癌的发生、转变和致病过程是复杂多变的。Hawkins等[2]发现，4-硝基喹啉-1-氧化物（4-Nitroquinoline-l-oxide，4NQO）饮水法诱导大鼠口腔黏膜癌变的过程与人口腔黏膜癌变过程相似，该大鼠模型的建立有利于研究人口腔鳞癌的发生发展。通过时间变量的影响，以期得到在屏障环境下，4NQO诱癌模型的较优选择。
1.材料与方法
1.1 实验材料
165只6周龄雄性SD大鼠(成都达硕生物有限公司提供)，体重约200～220g；屏障环境，室温20～25℃，湿度40%～60%，灯光模拟自然循环。纯净无菌饮水和SPF级动物专用灭菌固体饲料喂养(成都达硕生物有限公司提供)，系统实验物品均经消毒灭菌后传送进入；4NQO(Sigma公司,美国)。
1.2 实验方法
1.2.1 SD大鼠165只，随机分11组,每组15只。实验组1为A、B、C、D、E组，实验组2为A1、B1、C1、D1、E1组，F组为空白对照组。实验大鼠分别于第10周(A)、12周（A1）、14周(B)、15周（B1）、18周(C、C1)、21周（D1）、22周(D)、24周(E1)、26周（E、F）分9批处死。对照组F于26周同期处死。
1.2.2制质量分数0.025%的4NQO水溶液，4℃冰箱避光保存。饲育时稀释为质量分数0.004%置遮光瓶内。对照组饮灭菌水置普通塑料瓶内。全组每周换水3次，瓶内残余水做无害化废弃处理。
1.3 观察指标
1.3.1观察大鼠的行为和精神状态，每周称重1次；2周观察口腔黏膜情况，并记录。
1.3.2处死取舌、双颊、腭、食道的黏膜和颈淋巴结、肝及脾的组织标本，观察标本的组织病理学变化。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色切片，光学显微镜下观察病理改变。病理分级为正常黏膜，上皮单纯性增生，轻度、中度、重度上皮异常增生，口腔鳞癌。上皮异常增生的诊断参考世界卫生组织2005年标准[3]。
1.4 统计学方法
实验所获病理分级数据用等级资料两样本的秩和检验，统计学检验水准为α=0.05,P<0.05有统计学意义。
2.结果
2.1 实验共获得有效动物模型156只，斗殴死亡2只，麻醉意外死亡1只，衰竭死亡6只。
2.2 SD大鼠进入屏障环境2周后饮食饮水趋于正常。
2.3 观察发现对照组口内均较清洁，舌色粉，柔软富弹性，无肉眼可见改变。实验组从9周开始，舌逐渐出现粗糙不平，缺乏光泽，白色样变，舌体萎缩、弹性降低。18周后口腔清洁较差,黏膜水肿，偶伴充血糜烂面、偶见新生物和溃疡面。22周后发现部分大鼠颊部新生物，伴舌根溃疡。各组全程均未出现大鼠口腔黏膜组织坏死。
2.4 大鼠模型病理分级结果如表1所示。
表1 实验各组病理分级表
3.讨论
在常用的口腔鳞癌诱导剂4NQO和二甲基苯并蒽(10-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA)间，因DMBA诱导的模型易出现组织炎症反应和坏死[4]，因此4NQO诱癌模型自出现[5]就被认可，该大鼠模型对口腔鳞癌的研究有重要意义。本研究在屏障系统下用4NQO饮水法成功建立大鼠模型，将口腔鳞癌的连续过程展现，突显了4NQO的诱癌作用。
实验中同一时间范围内，相同因素下饲养的大鼠可能有相似或相同的病理改变，但因个体差异使病变程度不一。随时间推移，向癌转变的概率增高，发展迅速。本研究说明在4NQO诱癌过程中，10周后开始出现各个阶段病理改变，在24周后逐渐转化为鳞癌。实验组1取材较早，间隔4周，获得上皮单纯性增生和轻度上皮异常增生的有效标本较多，后期各阶段的标本稍不足。而实验组2的取材时间推迟，间隔3周，前期各阶段有效标本稍不足，中度、重度上皮异常增生和鳞癌标本较均衡。经秩和检验发现，总的来说实验组1的取材时间优于实验组2。在10周左右开始取材，综合两实验组的间隔时间，所得标本可能各阶段较均衡，但该方法有待实验进一步验证。
在舌癌早期会出现颈淋巴结转移，浸润深度和转移率与肿瘤的直径、分级、生长方式、分化程度是否有相关性尚有待研究[6]。口腔作为消化道起始，模型中未发现食管黏膜上皮异常增生，仅2例食管黏膜上皮癌，1例淋巴转移。考虑其可能原因是4NQO致癌有一定的靶向性；也可能是造模时间相对较短，口内原发灶未转移，但并不排除可能存在的隐匿性颈淋巴结转移及微转移。阻断转移是癌前状态到鳞癌的关键点，也是目前亟待解决的问题[7]。
总的来说，4NQO饮水法建立大鼠口腔鳞癌模型的方法较简便、靶器官较明确、病变典型，过程相对稳定，癌变时间相对可控可循，整个过程与人口腔鳞癌的过程相似，该模型是研究口腔鳞癌的理想模型[8]，优化该模型对研究口腔癌前病变、鳞癌的发生发展和鳞癌的治疗预防都有深远意义[9]。
【参考文献】
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论文作者:张晓艳,谭红,周骢,聂敏海
论文发表刊物:《医药前沿》2018年32期
论文发表时间:2018/12/10
标签：口腔论文; 模型论文; 大鼠论文; 黏膜论文; 实验组论文; 病理论文; 标本论文; 《医药前沿》2018年32期论文;