永顺县皮肤病防治所 化验室 湖南湘西 416700
【摘 要】目的：探讨针对麻风现症与经联合化疗治愈者应用荧光PCR法对鼻分泌物中含有的麻风杆菌进行检测的结果。方法：选择麻风现症患者10例，其中少菌型2例，多菌型8例。选择应用WHO推荐联合化疗方案治疗已达治愈标准的患者63例，其中少菌型46例，多菌型17例，对麻风现症10例治疗前、多菌型现症8例治疗6个月后、联合化疗治愈63例患者鼻分泌物分别采集，共81份，设为观察组；取相同研究对象皮肤组织液共81份，设为对照组。采用荧光PCR法对麻风杆菌检测。结果：经荧光PCR检测，观察组81份鼻分泌物标本中，麻风杆菌DNA阳性率为17.3%，对照组81份皮肤组织液标本中，麻风杆菌DAN阳性率为19.8%，对比无统计学差异（P>0.05）。检出复发案例，经对鼻分泌物标本和皮肤组织液标本麻风杆菌DNA检测，结果均为阴性。结论：针对鼻分泌物含有的麻风杆菌DNA，应用荧光PCR进行检测，效果较为理想，联合化疗方案，可使疾病得到有效控制，无复发现象。
【关键词】麻风现症；鼻分泌物；麻风杆菌；荧光PCR法
随着我国卫生事业的进步，在麻风病控制方面成效卓越，总体呈低流行趋势，但受各地区生活和医疗条件存在差大差异性影响，仍有新发病例检出，重视针对科学、有效的检测技术展开研究，可为临床诊疗提供有力参考依据，是降低复发率，改善远期预后的关键［1-2］。本次以麻风现症患者与经联合化疗治愈者为研究对象，采用荧光PCR法对鼻分泌物麻风杆菌检测，取得了理想成效，现回顾结果如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择麻风现症患者10例，其中少菌型2例，多菌型8例，少菌型指皮肤组织液抗酸染色结果呈阴性；多菌型为抗酸染色结果呈阳性。选择应用WHO推荐联合化疗方案治疗已达治愈标准的患者63例，其中少菌型46例，联合化疗方案为DDS+RFP6，用时6个月-1年；多菌型17例，联合化疗方案为DDS+RFP+B66，用时2年。对麻风现症10例治疗前、多菌型现症8例治疗6个月后、联合化疗治愈63例患者鼻分泌物分别采集，共81份，设为观察组；取相同研究对象皮肤组织液共81份，设为对照组。
1.2 方法
1.2.1 采集和处理标本
（1）鼻拭子标本：将实验用拭子至患者鼻腔深处有效插入，确保拭子与鼻腔粘膜呈紧贴状态，做2-3周的旋转操作后，将拭纸轻柔取出，于试管中有效放置，并冷藏备用。（2）皮肤组织液标本：取处于明显浸润状态的活动性皮损或耳垂、眶上、下颌等至少2个部位皮肤组织液。在采集时，先对皮肤做严格的常规消毒工作，配戴消毒手套后，捏紧并适度将局部目标皮肤提起，促使此区域呈变白状态，后作一切口，深为3mm、长为5mm，用刀刃对组织液有效刮取，于灭菌拭子粘附，在呈密闭状态的离心管中放置，冷藏备用。
1.2.2 提取麻风杆菌DNA
由美国BioXL公司对本次实验用荧光PCR检测试剂盒提供，依据说明书，取生理盐水1ml加入待检测标本，达混匀状态后，于10000r 条件下，离心5min，将上清液有效弃除，取核酸提取液B5μL加入，再达混匀状态后，于100°C温度下，处理10min，仍设置离心条件为10000r，5min后，取4μL上清液，开展后续的PCR反应试验。
1.2.3 PCR扩增试验
应用全自动基因扩增仪，取26μL试剂在每个反应管加入，加入处理后DNA样本和阴性质控品4μL设置条件为10000r，离心30s，循环共40个。
1.3 评定标准
将标准曲线调整至最合理的状态，待测标本具体数值由仪器自动计出，检测值≧103COPIES/mL为阳性；<103COPIES/mL为阴性。
1.4 统计学分析
涉及数据均在spss13.0软件中输入，计数资料采用（％）表示，行x2检验，P<0.05具统计学差异。
2 结果
2.2 组间荧光PCR阳性率对比
经荧光PCR检测，观察组81份鼻分泌物标本中，麻风杆菌DNA阳性率为17.3%，对照组81份皮肤组织液标本中，麻风杆菌DAN阳性率为19.8%，对比无统计学差异（P>0.05）。见表1。
注：＊P<0.05。
2.2 麻风现症检测结果 取18份麻风现症病例不同阶段的鼻分泌物标本，其中少菌型2份，多菌型16份，行PCR检测，结果示阳性率为77.8%；对照组18份皮肤组织液标本经检测阳性率为88.9%，组间阳性率无差异（P>0.05）。
2.3 治愈者检测结果 未检出复发案例，经对鼻分泌物标本和皮肤组织液标本麻风杆菌DNA检测，结果均为阴性。
3 讨论
与普通PCR存在较大区别，荧光定量PCR应用闭管展开检测工作，无需做PCR后处理，可防范假阳性和污染的情况；探针与DNA可产生特异杂交的现象，故使检测的特异性明显提升；可定量展开分析，且由光谱分析仪对检测结果自动显示，使客观性、灵敏性、准确性明显增强［3-4］。此种实时PCR的方式对病原体分子诊断具改善效果，优势在于可对临床标本含有的DNA定量检测。本次研究中，将其在麻风病检测中应用，尤其是在常规组织染色无法将病原菌检出的标本中应用，也可发挥理想成效［5-6］。结果示，在麻风菌检测阳性率上，皮肤组织液组和鼻分泌物组无差异，提示应用荧光PCR对鼻分泌物中含有的麻风杆菌进行检测，有一定的可行性，因无创或仅小微小创伤，患者极易接受，值得临床推广应用。
针对鼻分泌物含有的麻风杆菌DNA，应用荧光PCR进行检测，效果较为理想，联合化疗方案，可使疾病得到有效控制，无复发现象。
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论文作者:张运锋
论文发表刊物:《中国蒙医药》2018年第1期
论文发表时间:2018/4/4
标签：麻风论文; 杆菌论文; 组织液论文; 分泌物论文; 标本论文; 荧光论文; 皮肤论文; 《中国蒙医药》2018年第1期论文;