【摘 要】目的：银杏叶联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stems cells，BMSCs)对（I 型）糖尿病大鼠模型降糖疗效观察。方法：建立I 型糖尿病wistar 大鼠模型并随机分为糖尿病（DM）组、银杏叶（Ginkgo biloba L.extract EGB）组、EGB+BMSC组、BMSC 组，同时设置对照（Contral）组，其中EGB+BMSC 组经眼眶静脉输注骨髓间充质干细胞，并给予银杏叶提取物治疗，观察各组大鼠血糖、胰岛素、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、白介素6（IL-6）等指标变化。结果：EGB+BMSC 组的血糖、IL-6 水平显著低于EGB、BMSC 组（P<0.05），而胰岛素、SOD 及GSH-Px 水平较之升高（P<0.05）；结论：EGB 联合BMSC 治疗可显著降低糖尿病大鼠血糖水平，增加胰岛素分泌，减轻细胞炎症反应，为糖尿病治疗提供新的方法。
【关键词】骨髓间充质干细胞；银杏叶提取物；氧化应激
【中图分类号】R551.3【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2015）-09-021-02
既往研究［1］证明，糖尿病患者体内氧化应激水平较高，加重胰岛细胞的损伤；银杏叶提取物含抗氧化成分，可清除自由基，减弱氧化应激水平，减少内皮细胞的凋亡［2］。间充质干细胞是一种幼稚细胞，具有多向分化潜能，相关研究［3-4］通过其可塑性，将其诱导分化为胰岛细胞来降低血糖。但糖尿病患者机体内高氧化应激状态下的微环境，会加速移植干细胞的死亡［5］，为此，利用银杏叶抗氧化应激作用，联合骨髓间充质干细胞降糖成为一条可能的治疗途径。本实验将对二者联合降糖的疗效与单药治疗进行对比。
1.材料和方法
1.1 材料及方法 选取健康的wistar 成年雌性大鼠60 只，体重200~246g，购自吉林大学基础医学院动物实验中心。BMSCs 取自5 天的wistar 大鼠乳鼠股骨。STZ 购于大连美罗药厂。银杏叶提取物购自台湾济生化学制药厂股份有限公司。大鼠SOD 和GSH-Px 试剂盒购于南京建成生物公司。分别给予腹腔内注射STZ 配置液（STZ 粉末溶于枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，配置成0.1mol/L，pH 值为4.3），剂量为55mg/kg.d-1，当大鼠尾静脉血糖值连续2 次>16.7mmol/L 时成功建模I 型糖尿病。将其随机分为EGB 组、DM 组、BMSCs 组以及EGB+BMSCs组。另选取10 只大鼠只注射等剂量的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液作对照。EGB 组每日给予0.8 ml kg-1 的EGB；EGB+BMSCs组先给予等量的EGB 注射7 天，7 天后从眶下经脉输注1
10~6个BMSCs/只；BMSCs 组的大鼠则于第7 天直接从眶下静脉输注1
10~6 个BMSC/只；DM 组及对照组给予注射0.8ml kg-1/只的生理盐水。
1.2 标本采集及指标测定：于第20 天处死大鼠，并取其静脉血留做标本，采用黄嘌呤氧化酶法测定血清SOD 含量，二硫代双硝基苯甲酸直接显色法测定血清GSH-Px 含量，ELISA方法测定血清IL-6 含量。
1.6 统计分析：符合正态分布的计量资料以均数±标准差（ x ± s）表示，正态分布且方差齐的资料，采用单因素方差分析，组间比较采用SNK-q 检验，当P<0.05 为差异有统计学意义。
2.结果：
2.1 各组大鼠检测指标的测定比较
EGB+BMSC 组的血糖、IL-6 水平明显低于DM 组、EGB组、BMSC 组（P<0.05）；而胰岛素分泌水平、血清SOD、GSH-Px活性明显高于上述各组（P<0.05）；结果表明相比单独移植BMSC，联合EGB 可以帮助BMSC 减轻移植环境的氧化应激水平及炎症反应程度，进一步降低血糖水平、增加胰岛素分泌水平。见表1.
表1.各组大鼠检测指标比较（ x ± s，n=5）.png)
3.讨论：
美国内分泌医师协会在2004 年曾提出体内的氧化应激［6］是糖尿病及其并发症的共同发病机制。正常机体内存在氧化系统与抗氧化系统的动态平衡，而糖尿病的高血糖状态可通过葡萄糖的自身氧化、线粒体途径等使细胞内产生过多的O、过氧硝基自由基、活性氧簇（ROS），打破了这种平衡。由于缺乏内源性抗氧化代偿机制，使机体氧化还原稳态失衡。血糖刺激器官产生自由基有多条途径，包括线粒体氧化磷酸化途径、脂质过氧化物酶、NADPH 氧化酶和一氧化氮合酶(NOS)等［7-8］。一方面，过多的自由基导致细胞蛋白质、DNA 损伤，使细胞最终死亡［9］；ROS 是细胞内一种信号分子，过多的ROS 可介导多种信号转导途径、转录因子的激活［10］，并直接氧化DNA、脂质、蛋白质损伤细胞，体内氧化成分如脂质过氧化产物MDA 增加，而抗氧化成分降低，如SOD、GSH-Px，降低，加重糖尿病机体内细胞损害及并发症的发生；SOD 是抗氧化防御系统中重要的酶类，它可以去除超氧阴离子，避免细胞受到体内自由基损害，通过检测体内SOD 的水平，可反映机体清除氧自由基的能力；GSH-Px 作用与SOD相似，它不仅可清除H2O2，还可以清除MDA。另一方面，长期高血糖还会通过氧化还原依赖机制，刺激内皮细胞分泌炎性因子，引起病理损伤，进一步加重细胞损伤凋亡。
已有利用骨髓间充质干细胞诱导为胰岛细胞降糖的研究报导，但是由于糖尿病患者机体内环境高氧化应激水平，移植细胞的生存率较低［11］。我们在移植BMSC 之前，通过利用银杏叶抗氧化应激及减轻炎症反应的作用，提前给予银杏叶治疗，改善机体内高氧化应激的生存环境，结果显示其对于移植BMSCs 的存活是十分必要的。这与国外类似报导是一致的［12］。本研究结果表明，与DM、BMSC 组、EGB 组相比，EGB+BMSC 联合治疗可以进一步改善DM 体内氧化应激的程度，其中SOD、GSH-Px 水平升高，减弱细胞内炎症反应，IL-6、IL-10 水平降低；降低细胞凋亡水平，使Bax 表达降低，Bcl-2水平升高。
综上，EGB+BMSC 联合治疗糖尿病效果显著，能够改善糖尿病大鼠体内氧化应激水平，进一步降低血糖，减少细胞内炎症反应。
参考文献：
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附(基金项目：银杏叶增强骨髓间充质干细胞降血糖作用的研究；项目编号：20110464；通讯作者：王清 E-mail：wangqing5151@126.com；作者地址吉林大学中日联谊医院内分泌科 吉林长春 130033）
论文作者:刘学亮 温言 李艳华 王清
论文发表刊物:《系统医学》2015年第1卷第9期
论文发表时间:2016/2/18
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