牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)多糖的提取纯化工艺及抗衰老活性成分研究

牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)多糖的提取纯化工艺及抗衰老活性成分研究

吴嘉瑞, 郭位先, 蔺梦娟, 张晓朦, 张丹[1]2015年在《基于数据挖掘的国医大师颜正华含牛膝处方用药规律分析》文中进行了进一步梳理目的:探讨国医大师颜正华教授处方用药规律。方法:在收集相关处方的基础上,基于中医传承辅助系统构建数据库,进而利用该系统的数据分析模块中嵌入的关联规则Apriori算法为主要数据挖掘方法,分析并获得含牛膝处方中单味药物频次、药物组合频次、关联规则与核心药物组合等。结果:含牛膝处方常用于治疗眩晕、痹证、腰痛等病证,高频次药物包括赤芍、桑寄生、白芍、丹参、益母草等,高频次药物组合包括"牛膝、赤芍","牛膝、桑寄生","赤芍、桑寄生"等,置信度≥0.9的关联规则包括"续断->牛膝","白芍,桑寄生->牛膝","白芍,赤芍,桑寄生->牛膝"等。结论:颜正华教授含牛膝处方所用药物多具活血通络、补肝肾、强筋骨等功效,组方法度清晰严谨。

黄巍, 熊伟, 唐灿, 毛旭华, 张晓丹[2]2015年在《血府逐瘀汤中桔梗和牛膝对芍药苷组织分布的影响》文中研究表明目的:比较桔梗和牛膝不同配伍对正常和血瘀小鼠体内芍药苷组织分布的影响,研究桔梗和牛膝的引经作用。方法:正常和血瘀小鼠分别灌胃血府逐瘀汤全方、单缺桔梗方、单缺牛膝方、缺桔梗和牛膝方,30 min后处死,收集全血,取出脑、心、肝、脾、肺、肾。采用HPLC测定芍药苷含量,流动相乙腈-水(16∶84),检测波长230 nm,栀子苷为内标物。结果:正常组小鼠分别灌胃血府逐瘀汤全方、单缺桔梗方、单缺牛膝方、缺桔梗和牛膝方后,脑、心、肝、脾中均未检测到芍药苷,肺中芍药苷质量分数分别为0.010 2,0.005 8,0.091 0,0.037 3μg·g-1,肾中芍药苷质量分数分别为0.122 2,0.052 0,0.144 0,0.065 0μg·g-1。血瘀小鼠灌胃血府逐瘀汤全方和单缺桔梗方后,脑中均未检测到芍药苷,心、肝、脾中均能检测到芍药苷,肺中芍药苷质量分数分别为0.076 4,0.042 0μg·g-1,肾中芍药苷质量分数分别为0.335,0.210μg·g-1;血瘀小鼠灌胃单缺牛膝方、缺桔梗和牛膝方后,脑、心、肝、脾中均几乎未检测到芍药苷,肺中芍药苷质量分数分别为0.274 7,0.019 7μg·g-1,肾中芍药苷质量分数分别为0.467 1,0.149 0μg·g-1。结论:基于缺桔梗和牛膝方比较,桔梗能增大肺、肾中芍药苷含量,对于血瘀小鼠,其增大肺中芍药苷含量的作用尤其显着;牛膝能减小正常小鼠肺、肾中芍药苷含量,能增大血瘀小鼠肺、肾中芍药苷含量,并使得芍药苷在心、肝、脾中分布。证实桔梗、牛膝载药至特定病所的的引经作用,且发现桔梗、牛膝的引经部位并不单一。

肖伟, 马笃军, 彭力平, 王立新, 余阗[3]2017年在《牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及糖胺聚糖的干预作用》文中提出目的观察牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及对糖胺聚糖(GAG)形成的影响。方法骨关节炎造模成功后提取、分离兔骨关节炎软骨细胞,用甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在,将软骨细胞接种于5组:空白对照组、牛膝醇提物低剂量组、牛膝醇提物中剂量组、牛膝醇提物高剂量组、经典软骨增殖组。倒置相差显微镜观察软骨细胞形态,用CCK-8法检测软骨细胞增殖率,免疫细胞学检测Ⅱ型胶原蛋白荧光表达,q RT-PCR检测软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA表达水平,邻联甲苯胺(DMB)染色法检测细胞内GAG含量。结果牛膝醇提物高、中、低剂量组与空白对照组比较Ⅱ型胶原蛋白荧光明显阳性表达;牛膝醇提物高、中剂量组与空白对照组比较软骨细胞标记基因Ⅱ型胶原m RNA明显增加(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组效果最佳(P<0.01),与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白对照组GAG含量与经典软骨增殖组及不同剂量牛膝醇提物组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中牛膝醇提物高剂量组GAG最多(P<0.01),牛膝醇提物高剂量组与经典软骨增殖组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛膝醇提物中药含药血清可促进体外软骨细胞的增殖和蛋白合成,具体作用机制有待进一步探讨。

邓君[4]2001年在《牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)多糖的提取纯化工艺及抗衰老活性成分研究》文中指出中药牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)是苋科植物牛膝(Achyranthesbidentata Bl.)的干燥根,它具有活血、通经、补肝肾、强筋骨之功用。在祖国医学中,牛膝被用于治疗多种疑难杂症,而且现代医学临床也证实牛膝对很多疾病有确切疗效。又因其原植物牛膝分布广泛,资源丰富,很有开发价值。 牛膝含有多种次生代谢产物,如齐墩果酸及其皂甙、蒽醌类化合物、黄酮类化合物、生物碱、蜕皮素等,它们都具有生理活性。牛膝还含有较高比例的可溶性多糖。牛膝多糖有显着的抗癌、抗放射、抗肝炎、抗衰老等功效,而且具有双向免疫调节作用。牛膝多糖又有分子量小,水溶性好,毒性低的优点,不但可以口服,还可以注射,是一种很有前景的治疗用多糖药物。但有关牛膝多糖种类、结构和药理作用的研究不多,关于其结构及药理作用关系的报道更是鲜见,对牛膝多糖的提取、分离、纯化方法也是各持己见。本文的主要研究目的是提取、分离、纯化牛膝多糖,进而研究其部分性质,以及比较怀牛膝(Achyranthes bidentata Bl. var. bidentata forma bidentata)和本地(北碚)产红牛膝(Achyranthes bidentata Bl. var. bidentata forma rubra)的多糖含量、多糖组分及各组分比例,然后以果蝇作动物模型研究分离所得的各种怀牛膝多糖的抗衰老作用。 一、牛膝质量的外观标准 牛膝视其粗细衡量质量,越粗者,多糖含量越高。φ>0.9cm的牛膝中可溶性多糖的平均含量比φ<0.3cm者高32.36%。 二、牛膝多糖提取条件的研究 用有机溶剂预处理牛膝可提高多糖的收率和纯度,尤以80%乙醇的除杂效果极显着,而且仅用80%乙醇预提取材料即可,不必再加极性更弱的有机溶剂脱脂。 用纤维素酶和菠萝蛋白酶预处理牛膝,然后用热水浸提,可显着提高多糖浸出率,复合酶系在pH6.5时作用最强,酶浓度对提高牛膝多糖浸出率也有极显着的正向影响。 影响牛膝多糖提取的因素有提取时间、温度、用水量、提取次数和pH值。提取时间以提取液中多糖浓度达到基本稳定为度,用连续取样法确定。不同温度下所需提取时间不等,室温渗漉需60—70小时,60℃浸泡耗时24小时,煮沸提取仅需沸腾1.5小时。提取温度、加水量和提取次数都影响牛膝多糖收率。温度越高,收率越高,且在常压和自然pH条件下,从室温到沸腾,提取温度的升高仅改变所得牛膝多糖中不同分子量范围的组分浸出的比例,而不会 改变各组分的分子量和荷电情况。加水量为材料的80倍且分叁次提取时,牛 膝多糖的收率在97%以上,再增加加水量和提取次数,收率的增幅也不大。40 倍水分叁次提取,多糖收率即达90%左右,而能耗大为降低,是一种较经济的 选择。提取温度还影响粗多糖纯度,二者呈正相关。用 linol·L-们CI于 4 oC 和用lind叫们。OH于儿流下提取,发现牛膝中酸溶性多糖和碱溶性多糖含量 都很低。 叁、分离及纯化方法的研究 在常压条件下,不同的浓缩温度所制得牛膝多糖在 Septladex G—100和 DEAE一SePharose fast一flow柱上的层书行为相同,即浓缩温度的爿高并不 影响牛膝多糖中各组分的比例以及各组分的分子量和荷电,情况。所以提取液的 浓缩可直接于常压下沸腾。提取液中的杂蛋白的去除,用TCA法比用Sevag法 和鞍酸法的效果好,在沉降蛋白质的同时可除去大量色素。多糖的脱盐用 SePhadex G—50比透析效果较好,透析的时耗长,多糖损失大,且易受微生 物污染,Sephadex G——50脱盐无这些弱点。单糖、低聚糖、贰类等杂质可于 醇析步骤除去。醇析时应调 PH至 10,方可沉淀完全。沉淀用 80%乙醇洗涤几 次,然后依次用90%、95%和无水乙醇脱水,60oC真空干燥,所得粗多糖疏松, 颜色浅。 先后用 Sephadex G一100 和 DEAE一epharose fast一flow 柱层析可将牛 膝多糖分成四个组分,分别命名为ABPS、ABPS 11、ABPS Ill、ABPS IV。 四、牛膝多糖的部分性质 用 SePhadex G—100柱层析测定各组分分子量,用薄层层析展开各组分 的酸水解液,测得ABPS分子量为50.359kD,凯氏定氮法证实其中含氮元素, 可能是蛋白多糖,多糖部分由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖酸 组成。ABPS分子量为 1.770kD,由葡萄糖和甘露糖组成。ABPS分于量 为4.352kD,由葡萄糖、果糖和葡萄糖酸组成。ABPS IV分子量为 2.323kD, 由葡萄糖、半乳糖、葡萄糖酸和半乳糖酸组成。ABPS 11、ABPS Ill和 AB陀 IV 都不含氮元素。

张振凌, 胡婷婷, 田双双, 吴金婷[5]2017年在《不同盐制方法对牛膝中有效成分含量的影响》文中研究指明目的:比较盐粒拌炒和盐水炙牛膝2种不同方法对牛膝中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮含量的影响,为牛膝盐制工艺研究提供参考。方法:采用HPLC测定β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮的含量,流动相乙腈-水-甲酸(16∶84∶0.1),检测波长250 nm。以牛膝生品为参考,考察2种盐制方法对牛膝中指标成分含量的影响。结果:盐水炙样品中以每100 g牛膝加食盐1 g,在150~180℃下炒制15 min的含量最高,盐粒拌炒样品以每100 g牛膝加食盐2 g,150~180℃炒制4 min的含量最高。盐水炙样品中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮,25S-牛膝甾酮质量分数均以3号样品为最高,分别为0.083%,0.015 7%,0.010%;盐粒拌炒样品中叁者的最高质量分数分别为0.100%,0.019 1%,0.012 3%。结论:盐粒拌炒牛膝的样品中3种甾酮类成分的含量均大于生品和盐水炙牛膝的样品,2种不同盐制方法对牛膝中有效成分均有影响,为牛膝盐制工艺的确定提供参考。

汪蓉, 沈晨, 吴虹, 王伟, 孙亮亮[6]2016年在《牛膝不同提取部位抗炎镇痛及抗迟发型超敏反应的作用》文中研究表明目的观察牛膝不同提取部位的抗炎镇痛及抗迟发型超敏反应的作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、热板实验及醋酸诱导小鼠扭体实验,观察牛膝不同提取部位的抗炎镇痛作用;采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导的小鼠迟发型超敏反应来观察牛膝不同提取部位的抗迟发型超敏反应作用。结果牛膝的正丁醇提取部位能显着减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀(P<0.05),显着延长小鼠在热板上的舔足时间以及减少醋酸诱导的小鼠扭体次数(P<0.05),明显降低DNCB诱导的迟发型超敏反应小鼠的耳肿胀度、胸腺指数及脾指数(P<0.05);石油醚提取部位和乙酸乙酯提取部位对二甲苯诱导的炎症、热板和醋酸诱导的疼痛及DNCB诱导的迟发型超敏反应之部分指标有明显抑制作用(P<0.05)。结论牛膝的正丁醇提取部位具有显着的抗炎镇痛以及抗迟发型超敏反应作用。

王媛媛, 张雪芹, 袁菲菲, 余培凡, 吴飘扬[7]2018年在《川牛膝和怀牛膝多糖抗炎免疫调节活性研究》文中指出目的检测川牛膝多糖和怀牛膝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞(Ana-1细胞)中PGE_2、TNF-α、IL-12因子分泌的影响,探究两种多糖的抗炎、免疫调节活性。方法配制3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml系列浓度的两种多糖溶液,体外刺激Ana-1细胞,采用ELISA技术,450nm波长处检测并计算两种多糖抑制Ana-1细胞中PGE_2产生的IC_(50)及促进TNF-α、IL-12分泌的EC_(50)值。结果怀牛膝多糖抑制Ana-1细胞中PGE_2产生的IC_(50)值为(46.151±1.408)μg/ml,而川牛膝多糖抑制Ana-1细胞中PGE_2产生的能力较弱,并未计算出IC_(50)值;两种多糖促进Ana-1细胞中TNF-α因子分泌的EC_(50)值分别为(21.247±3.521)、(23.532±1.160)μg/ml;川牛膝和怀牛膝多糖促进Ana-1细胞中IL-12因子分泌的能力不明显,均未算出EC_(50)值。结论怀牛膝多糖在抑制Ana-1细胞中PGE_2产生的模型下具有一定的抗炎活性优势;两种多糖主要通过促进Ana-1细胞中TNF-α因子分泌的途径产生免疫活性,但在此模型下两种多糖的免疫调节活性无显着性差异。

孙传鑫, 郭晶, 王秋红, 杨炳友, 匡海学[8]2015年在《牛膝性味演变的本草考证》文中研究说明目的:阐明牛膝性味的科学内涵,为正确指导其临床实践和科学研究提供理论依据。采用文献考证的研究方法,将历代本草着作按时间顺序排列,梳理牛膝性味的发展演变脉络,从而发现其性味变化的规律。经考证发现,牛膝常用品种有2种,即苋科牛膝属的怀牛膝和杯苋属的川牛膝;牛膝的"性"多记载为性平,少许文献记载为性温;牛膝的味由"苦"向"酸"逐渐发展为"苦、酸"和"苦、酸、甘"同时存在,川牛膝的味由苦、酸向苦、甘转变,并解释牛膝存在的各个"性"与"味"标定的依据。为怀牛膝、川牛膝的性味研究,怀牛膝、川牛膝药材的研制开发及其临床应用提供参考。牛膝性味的变化反映了中药性味理论是由萌芽到完善的发展过程,性味的初始标定原则由根据药物的真实滋味结合五行及藏象理论而定转为主要根据药物的功效而定。

王媛媛, 张梦凡, 查丽丽, 郭雨[9]2016年在《川牛膝和怀牛膝多糖提取工艺研究》文中研究说明以苯酚—硫酸法检测多糖含量,采用单因素考察、正交试验探究水煮提取法中料液比、提取时间、提取次数对川牛膝和怀牛膝多糖得率的影响并进行比较。结果表明,川牛膝多糖的最佳提取工艺为料液比1∶13(g/m L),提取时间2 h,提取次数3次;怀牛膝多糖的最佳提取工艺为料液比1∶13(g/m L),提取时间4 h,提取次数3次。两种多糖的最佳提取工艺条件不同,为后期的活性比较及入药选择研究奠定基础,为其工业化生产提供技术支持。

张留记, 刘晓苗, 屠万倩, 李向阳[10]2018年在《HPLC法同时测定怀牛膝中5个成分的含量》文中研究表明目的:建立高效液相色谱法同时测定怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长250 nm(β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮)和203 nm(人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa)。结果:5个分析物分离良好,β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa进样量分别在0.218~2.725μg(r=0.999 8)、0.080~0.995μg(r=0.999 9)、0.155~1.935μg(r=0.999 9)、0.352~4.400μg(r=0.999 8)和0.338~4.225μg(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为98.3%、101.5%、98.4%、99.3%和101.4%,相应的RSD分别为0.89%、0.93%、1.4%、0.69%和1.3%;16批不同产地的怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量范围分别为0.032%~0.074%、0.008%~0.017%、0.008%~0.017%、0.044%~0.107%和0.047%~0.103%。结论:本方法可作为评价怀牛膝质量的方法。

参考文献:

[1]. 基于数据挖掘的国医大师颜正华含牛膝处方用药规律分析[J]. 吴嘉瑞, 郭位先, 蔺梦娟, 张晓朦, 张丹. 中国实验方剂学杂志. 2015

[2]. 血府逐瘀汤中桔梗和牛膝对芍药苷组织分布的影响[J]. 黄巍, 熊伟, 唐灿, 毛旭华, 张晓丹. 中国实验方剂学杂志. 2015

[3]. 牛膝醇提物对兔骨关节炎软骨细胞体外增殖及糖胺聚糖的干预作用[J]. 肖伟, 马笃军, 彭力平, 王立新, 余阗. 中国医药导报. 2017

[4]. 牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)多糖的提取纯化工艺及抗衰老活性成分研究[D]. 邓君. 西南师范大学. 2001

[5]. 不同盐制方法对牛膝中有效成分含量的影响[J]. 张振凌, 胡婷婷, 田双双, 吴金婷. 中国实验方剂学杂志. 2017

[6]. 牛膝不同提取部位抗炎镇痛及抗迟发型超敏反应的作用[J]. 汪蓉, 沈晨, 吴虹, 王伟, 孙亮亮. 安徽中医药大学学报. 2016

[7]. 川牛膝和怀牛膝多糖抗炎免疫调节活性研究[J]. 王媛媛, 张雪芹, 袁菲菲, 余培凡, 吴飘扬. 济宁医学院学报. 2018

[8]. 牛膝性味演变的本草考证[J]. 孙传鑫, 郭晶, 王秋红, 杨炳友, 匡海学. 中国实验方剂学杂志. 2015

[9]. 川牛膝和怀牛膝多糖提取工艺研究[J]. 王媛媛, 张梦凡, 查丽丽, 郭雨. 长春师范大学学报. 2016

[10]. HPLC法同时测定怀牛膝中5个成分的含量[J]. 张留记, 刘晓苗, 屠万倩, 李向阳. 药物分析杂志. 2018

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牛膝(Radix Achyranthis Bidentatae)多糖的提取纯化工艺及抗衰老活性成分研究
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