肥胖基因多态性及胆管癌相关性分析论文_郝艳娜

(邢台医学高等专科学校药学教研室;河北邢台054000)

【摘要】目的:分析肥胖相关基因多态性及肥胖和胆管癌的相关性,为肥胖、胆管癌的风险分析提供依据。方法:2014年2月~2016年8月,以邢台医专附属二院外科接待的肥胖症患者、肿瘤科患者作为研究对象,入选单纯肥胖症患者146例,纳入单纯肥胖组,单纯胆管癌患者31例,纳入单纯胆管癌组,胆管癌合并肥胖患者43例,纳入合并组,同期接待的体检卡健康人群50例,纳入对照组。进行rs8050136、rs9939609基因分析。结果:单纯肥胖组、单纯胆管癌、合并组的rs8050136的CC、AC、AA比重与rs9939609表达TT、AT、AA比重差异无统计学意义(P>0.05)。合并组rs9939609 TT比重低于对照组,AT比重高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:

【关键词】基因多态性;肥胖;胆管癌

我国肥胖症患者已超过美国,成为肥胖症患者最多的国家,儿童肥胖症发生率持续上升[1]。胆管癌是一种常见的恶性肿瘤,我国发病率约为0.10~0.20%,占恶性肿瘤的1%、占消化道肿瘤的3%[2]。肥胖、胆管癌与脂质代谢紊乱关系密切,两者可互为因果。肥胖、胆管癌的发病机制较复杂,普遍认为与遗传、环境、生活方式等因素有关,本次研究试分析肥胖相关基因多态性及肥胖和胆管癌的相关性,为肥胖、胆管癌的风险分析提供依据。

1资料及方法

1.1 一般资料

以2014年2月~2016年8月,以邢台医专附属二院外科接待的肥胖症患者、肿瘤科患者作为研究对象。纳入标准:①临床资料完整;②年龄>18岁;③知情同意;④未进行放射学检查。入选单纯肥胖症患者146例,纳入单纯肥胖组,其中102例、女44例,年龄(43.3±15.2)岁。单纯胆管癌患者31例,纳入单纯胆管癌组,其中男20例、女11例,年龄(45.3±5.6)岁。胆管癌合并肥胖患者43例,纳入合并组,其中男30例、女13例,年龄(44.8±4.2)岁。肥胖诊断标准:身高体重指数(BMI)≥28kg/m2。胆管癌诊断:参照第7版AJCC/UICC分期,同时以手术活检作为诊断金标准。同期接待的体检卡健康人群50例,其中男34例、女16例,年龄19~62岁,平均(45.1±5.2)岁。纳入对照组。

1.2 方法

肥胖相关基因检查主要针对,首先提取DNA,以blackPREP FFPE DNA试剂盒,活检组织病理检查,取适组织,进行石蜡切片,大小2cm*10μm,73℃干燥下过夜,切碎样品放入到1.5mlEP管,加入1ml正辛烷,65℃水浴2h,15000rpm离心1min,倒掉上清液,加入1ml正辛烷过夜,15000rpm离心1min,去上清液脱蜡完成,加入400μlQPT溶解氧与25μl蛋白激酶,震荡混匀温浴6min,15000rpm离心1min,将上清液转移到新试管中,加入200μlSBS溶液,进行震荡摇匀,12000rpm离心2min,弃上清液,加入700μlMS洗涤液,12000rpm离心1min,弃上清液,重复操作,15000rpm转速下离心2min,加入100μl洗脱液,25℃下5min,8000rpm离心1min,重复离心1次,提取样品4℃冰箱保存。对于健康查体人群,则抽取肘部静脉血2ml,提取DNA。进行PCR扩增,rs8050136,位点序列CATGCCAGTTGCCCACTGTGGCAAT[A/C]AATATCTGAGCCTGTGGTTT

-TTGCC,rs9939609,位点序列GGTTCCTTGCGACTGCTGTGAATTT[A/T]GTGATGCACT

-TGGATAGTCTCTGTT进行凝胶电泳。提取凝胶中的目的DNA,进行PCR产物测序。反应体系:PCR纯化产物(10ng/μl)1μl,BigDye(2.5×)8μl,引物(3.2pmol/μl)1μl,灭菌去离子水10μ,共25个反应循环。

1.3 观察指标

单纯肥胖组、单纯胆管癌组、合并组、对照组,rs8050136、rs9939609基因型。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0软件进行统计学计算,计数资料采用例或率符号n、%表示,采用检验或Fisher精确性检验进行组间比较,以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

单纯肥胖组、单纯胆管癌、合并组的rs8050136的CC、AC、AA比重与rs9939609表达TT、AT、AA比重差异无统计学意义(P>0.05)。合并组rs9939609 TT比重低于对照组,AT比重高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 单纯肥胖组、单纯胆管癌组、合并组、对照组,rs8050136、rs9939609基因型分布[n(%)]

3 讨论

研究显示,单纯肥胖组、单纯胆管癌、合并组的rs8050136的CC、AC、AA比重与rs9939609表达TT、AT、AA比重差异无统计学意义(P>0.05),这可能与纳入患者例数不足有关,从其他学者的研究来看,rs8050136的CC、AC、AA比重与rs9939609表达TT、AT、AA与肥胖关系密切,AC、AT表达是肥胖的主要危险因素。研究中,合并症rs9939609 TT比重58.1%低于对照组82.0%,AT比重34.9%高于对照组18.0%(P<0.05),提示改基因是肥胖、胆管癌的重要危险因素,对于此类基因携带者,需加强肥胖、胆管癌的预防筛查管理。

【参考文献】

[1]苏媛媛,席薇,张欣.天津市2010年中小学生超重和肥胖流行现况及影响因素[J].中国学校卫生,2013(2):217-218.

[2]中华医学会外科学分会胆道外科学组.肝门部胆管癌诊断和治疗指南(2013版)[J].中华外科杂志,2013,51(10):865-871.

论文作者:郝艳娜

论文发表刊物:《医师在线》2017年3月下第6期

论文发表时间:2017/5/18

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