曹华[1]2004年在《木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血清学指标及形态学的影响》文中提出目的：血管内皮细胞损伤是AS形成的始动环节，高脂血症是致AS的最主要危险因素，继发于血管内皮细胞损伤的内皮通透性、粘附性、血液凝固性改变及所释放的大量细胞因子及生长因子导致AS发生的一系列连锁反应。脂质浸润、血管内皮损伤、单核细胞及淋巴细胞浸润、免疫应答反应、平滑肌细胞及细胞外基质增殖、血栓形成等构成了AS发生、发展的病理过程。因此，从不同环节干预AS的发生，是AS防治的关键。本实验通过复制大鼠食饵性高脂血症及早期AS模型，用木贼煎剂给与干预，检测血清学指标及细胞表面粘附分子表达量，并观察主动脉形态学变化，旨在探讨木贼从不同环节抗AS的作用及其机制，为木贼的临床应用提供理论基础和实验依据。方法：选用健康雄性成年SD大鼠48只，随机分为四组：正常组、模型组、木贼低剂量预防组和木贼高剂量预防组，每组12只，用高脂饲料复制大鼠早期AS模型，自造模开始，给药组每日以木贼煎剂2ml/只灌胃，低剂量组合生药 5g/kg.d，高剂量组合生药12.5g/kg.d；正常组及模型组等量生理盐水灌胃。十周末断尾取血，酶法检测血脂水平；硝酸还原酶法测血清NO含量,化学比色法测血清NOS活性；放射免疫分析法检测血清IL-1、IL-8和TNF水平；流式细胞术检测单个核细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达；取主动脉分别<WP=4>以肉眼、光镜及电镜观察形态变化。结果：1.实验大鼠一般状况：正常组大鼠毛色光泽，活动自如，活泼，饮食正常。模型组饲喂高脂饲料，体重增长较快，皮下脂肪厚，但随实验进程，毛发色泽暗淡，活动减少，精神状态较差，进食量减少；给药组明显好于模型组。2.血脂的变化（见附表1）：模型组TC、TG、LDL较正常对照组明显升高（p<0.01），HDL降低（p<0.01）；木贼预防组总TC、TG、LDL较模型组显着降低（p<0.01），而HDL升高（p<0.01）。高、低剂量组之间无差别。3.血清NO及NOS变化（见附表2）：模型组NOS活性显着低于正常组（p<0.05），NO浓度显着增高（p<0.01）。木贼低剂量组的NOS活性较模型组增强，NO显着降低。而木贼高剂量组的NOS和NO与模型组相比差异均无显着性。4.血清IL-1、IL-8和TNF变化（见附表3）：模型组血清IL-1、IL-8和TNF均较正常组明显升高（p<0.01），木贼预防组血清IL-1、IL-8较模型组下降（p<0.01），高剂量组降低IL-1更为显着，而木贼低剂量组TNF较模型组升高（p<0.01），高剂量组无明显变化。5.单个核细胞表面ICAM-1及VCAM-1表达量的改变（见附表4及附图17-24）：模型组单个核细胞表面ICAM-1及VCAM-1表达均高于正常组（p<0.01），木贼预防组单个核细胞表面ICAM-1及VCAM-1表达低于模型组（p<0.01），高、低剂量组对ICAM-1的表达无显着差异，而低剂量木贼降低VCAM-1的效果更为显着（p<0.01）。6.主动脉形态学改变：（1）肉眼观察：正常组血管弹性好，内膜表面平滑，富有光泽；模型组动脉弹性减低，管壁增厚，<WP=5>血管内膜面光泽度稍差；木贼高、低剂量预防组动脉与正常组相比变化不明显。（2）光镜所见：正常组动脉内皮细胞连续完整而光滑，表面未见细胞粘附，内膜下间隙较小，中膜平滑肌细胞排列规整，无增生；模型组血管壁增厚，内膜不光滑，内皮细胞呈连续性缺失，底层胶原纤维暴露，大量单核细胞粘附于内皮表面或潜入内皮下，内皮下间隙增宽，内弹力板分离断裂，中膜浅层平滑肌细胞增生，排列紊乱，可见中膜平滑肌细胞向内膜迁移趋势；木贼预防组内膜较光滑，局部有少量单核细胞粘附，可见内皮细胞缺失，平滑肌细胞增生，但明显好于模型组；高、低剂量组之间未见明显差别。（3）扫描电镜所见：正常组内皮界限清楚，排列规整，连接紧密,细胞呈长梭形，核区饱满，膜表面结构清晰，可见典型微绒毛。模型组内皮形态明显异常，部分呈收缩状态，体积缩小，细胞间隙增大或出现深大裂隙,内皮细胞胞膜表面呈大小不等的虫蚀状、火山口状缺损，洞内嵌有红细胞、白细胞，并可见大片内皮细胞崩解，甚至脱落仅余残基，区内有血小板、血细胞和细胞碎屑纤维素等附着。两木贼预防组内皮细胞基本完整，排列较整齐，可见少量内皮细胞缺损，细胞膜部分破坏，呈小洞状，损伤明显轻于模型组。（4）透射电镜观察：正常组内皮完整，细胞间连接紧密，胞质互相覆盖，平滑肌细胞呈长梭形，胞浆内含大量肌丝，细胞器较少，细胞核完整。模型组内皮细胞破损及空泡形成，部分脱落残缺，内皮间连接处胞质分离，变直、变宽，出现较大间隙，并可见单核细胞粘附于内皮表面或伸出伪足潜入内皮间隙、内皮下，其胞浆内可见脂质空泡形成。内膜下间隙明显变窄或消失，可见平滑肌走形紊乱，形状不规则，多个胞突形成，有<WP=6>的呈典型的内膜下迁移，伸出伪足将破损的内皮细胞拱起，部分细胞体积肥大，核不规则，胞浆内肌丝减少，细胞器增多，多量脂质空泡及髓鞘样小体形成，细胞间质增宽，基质增多。木贼高、低剂量组可见内皮细胞较完整，覆盖于内膜表面，细胞连接较好，单核细胞粘附减少。内膜下间隙明显变的规则、清晰，较模型组增宽。平滑肌细胞突起明显减少，胞浆内空泡少见或无，核形状较规则。结论：本实验成功复制大鼠食饵性高脂血症及AS早期病变模型，研究了木贼煎
刘志敏[2]2007年在《两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期大鼠主动脉内皮细胞的影响》文中研究指明目的:前期实验表明木贼水煎剂可以调节脂代谢、抑制内皮细胞(endothelial cell, EC)凋亡,抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)早期事件的发生。本实验对木贼进行初步提取分离,对比观察提取物对大鼠主动脉EC凋亡的影响及其形态学变化,探讨木贼保护血管内皮的有效部位及其可能机制。方法:1木贼有效部位的提取、分离木贼水煎剂经正丁醇萃取、分离为两部分,其中正丁醇萃取液回收至干,蒸馏水定容至1.25g(生药)/ml;剩余液亦浓缩至相同浓度,均冰箱保存备用。2两种木贼提取物的药效动物实验健康雄性SD大鼠50只,随机分为五组:正常组、模型组、吉非罗齐组、木贼正丁醇提取物组、正丁醇提取剩余物组,每组10只。给药组每天饲喂高脂饲料且按10ml/kg标准灌胃给药,分别合吉非罗齐0.16g/(kg.d) ,生药木贼12.5g/(kg.d),正常组和模型组每天灌等量生理盐水,并随动物体重增加及时调整药量。3指标检测九周末眶后取血,酶法检测:胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油叁酯(triglyceride, TG)、高密度脂蛋白(high densitylipoprotein, HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein, VLDL);流式细胞术检测EC周期、凋亡率及相关基因caspase-3、突变型p53、bcl-2蛋白表达,计算细胞增殖指数(proliferative index, PI);分别以肉眼、光镜及电镜观察主动脉内膜形态变化。结果:1实验大鼠一般状况正常组大鼠饮食正常,活动自如。模型组体重增长较快;但随实验进程,进食减少、精神较差。吉非罗齐组、两木贼给药组大鼠饮食、活动、精神状态均明显好于模型组。2两种木贼提取物对血脂的影响模型组TC、LDL较正常对照组明显升高(P<0.01);吉非罗齐组TG、LDL、VLDL较模型组显着降低(P<0.01),HDL明显升高(P<0.01);两木贼给药组降低TG、VLDL作用与吉非罗齐相似(P<0.05),提取剩余物组HDL升高显着(P<0.01),与正丁醇提取物组相比具有统计学意义(P<0.01)。3两种木贼提取物对主动脉EC凋亡相关基因caspase-3、突变型p53、bcl-2蛋白表达的影响EC凋亡率及突变型p53、caspase-3表达模型组较正常对照组明显升高(P<0.05),吉非罗齐组较模型组显着降低(P<0.05);正丁醇提取物下调caspase-3表达作用明显(P<0.05)。Bcl-2蛋白表达在各组中均未见明显变化(P>0.05)。4两种木贼提取物对主动脉EC周期与凋亡的影响模型组停留在G_0/G_1期的EC较正常对照组明显升高(P<0.01),S和G_2/M期细胞百分比显着减少(P<0.01),PI降低显着(P<0.01),凋亡率显着升高(P<0.01);两种木贼提取物对细胞周期的影响与吉非罗齐相似,较模型组停留在G0/G1期细胞百分比显着降低(P<0.01),S和G2/M期细胞明显增多(P<0.05),PI显着升高(P<0.01),细胞凋亡率显着减少(P<0.01)。5主动脉形态学改变5.1肉眼观察正常组血管弹性好,内膜平滑,富有光泽;模型组动脉弹性减低,管壁稍增厚,光泽度稍差;吉非罗齐组、两木贼给药组与正常组相比变化不明显。5.2光镜观察正常组动脉EC连续、形态规则,表面未见细胞粘附,内皮下间隙较小。模型组血管壁增厚,内皮呈不连续性缺失,底层胶原纤维暴露,内皮下间隙明显增宽。吉非罗齐组内皮较连续,形态规则,明显好于模型组。正丁醇提取物组内膜连续、光滑,EC排列整齐,明显好于模型组。提取剩余物组内膜较光滑,部分EC缺失、单核细胞粘附,但好于模型组。两木贼给药组之间未见明显差别。5.3扫描电镜观察正常对照组大鼠主动脉EC长梭形,核区饱满,连接紧密,可见长短不等的典型微绒毛。模型组EC排列紊乱,表面微绒毛减少甚至消失,呈大小不等的虫蚀状、火山口状缺损,可见细胞碎片、纤维素等附着。吉非罗齐组EC形态完整,轮廓清晰,偶见小洞状破损。木贼正丁醇提取物组EC呈带状排列,核区饱满,可见典型微绒毛,散在的脂肪小颗粒黏附。正丁醇提取剩余物组EC连接较紧密,局部坏死、脱落,可见较大脂肪颗粒黏附。5.4透射电镜观察正常对照组大鼠EC胞浆内吞饮小泡丰富,线粒体、内质网形态正常。模型组EC坏死、脱落严重,残存细胞内吞饮小泡、脂质空泡数量明显增多,线粒体肿胀、融合,粗面内质网扩张、脱颗粒。吉非罗齐组EC吞饮小泡、脂质空泡数量减少,部分线粒体肿胀,粗面内质网轻度扩张。木贼正丁醇提取物组EC吞饮小泡、脂质空泡明显减少,部分线粒体轻度肿胀,粗面内质网扩张减轻、脱颗粒。正丁醇提取剩余物组EC吞饮小泡和脂质空泡较多,线粒体、粗面内质网肿胀,游离核糖体散在于细胞质中。结论:两种木贼提取物对AS早期大鼠降脂和保护内皮的效果与前期水煎剂实验结果一致,且两组间未见显着性差异,表明木贼确有调节脂代谢、从基因水平上抑制内皮凋亡、保护内皮抗AS早期损伤的作用。
安杰[3]2003年在《木贼对大鼠动脉粥样硬化早期内皮细胞的保护作用》文中认为目的：EC损伤是AS病变形成的始动环节，脂质代谢紊乱是导致AS发生的重要因素之一，降低血脂、保护内皮已在AS的治疗中倍受关注。多种中药可从不同环节干预AS始动因素、降低AS早期事件发生率、减轻AS病变程度，且效果明显。为研究木贼是否具有降血脂、保护血管EC及影响AS病变发生的作用，本实验建立了食饵性大鼠高脂血症及早期AS模型，预防性给予木贼煎剂，从不同层面观察大鼠主动脉EC的功能、代谢及形态变化，了解木贼对AS预防作用及可能的作用机理，为木贼临床抗AS应用提供理论依据。方法：（1） 动物随机分为4组：正常组、模型组、木贼高剂量预防组和木贼低剂量预防组，每组12只。（2） 复制大鼠食饵性高脂血症及早期AS模型。造模同时，给药组每日以木贼煎剂2ml/只灌胃，高剂量组合生药12.5g/kg.d，低剂量组合生药 5g/kg.d；正常组及模型组等量生理盐水灌胃。实验共10周。（3） 10周末断尾取血，酶法检测血脂水平；取主动脉分别以肉眼、光镜及电镜观察形态变化；硝酸还原酶法测血清NO含量,化学比色法测血清NOS活性；流式细胞术检测EC凋亡率及相关基因Bax、Bcl-2表达量。结果：（1）实验大鼠一般状况：正常组大鼠毛色光泽，<WP=4>活动自如，活泼，饮食正常。模型组饲喂高脂饲料，体重增长较快，皮下脂肪厚，但随实验进程，毛发色泽暗淡，活动减少，精神状态较差，进食量减少；给药组明显好于模型组。（2）动物血脂的改变（见附表1）：模型组TC、TG、LDL仍较正常对照组明显升高（p<0.01），HDL降低（p<0.01）；木贼预防组总TC、TG、LDL较模型组显着降低（p<0.01），而HDL升高（p<0.01）。高、低剂量组之间无差别。（3）血清NO及NOS变化（见附表2）：模型组NOS活性显着低于正常组（p<0.05），NO浓度显着增高（p<0.01）。木贼低剂量组的NOS活性较模型组增强（p<0.05 29.31±1.97 VS 27.43±2.00），NO显着降低（p<0.01 102.30±18.88 VS 200.92±116.49）。而木贼高剂量组的NOS和NO与模型组相比差异均无显着性。（4）主动脉形态学改变：4.1）肉眼观察：正常组血管弹性好，内膜表面平滑，富有光泽；模型组动脉弹性减低，管壁增厚，内膜面光泽度稍差；木贼预防组与正常组相比变化不明显。4.2）光镜观察（见附图1-8）：正常组动脉内膜光滑，EC排列整齐、无缺失，内膜下间隙较小；模型组血管壁增厚，内膜不光滑，EC呈连续性缺失，底层胶原纤维暴露，大量MC粘附于内皮表面或潜入内皮下，内皮下间隙增宽；木贼预防组内膜较光滑，局部有少量MC粘附，可见EC缺失，但明显好于模型组；高、低剂量组之间未见明显差别。4.3）扫描电镜所见（见附图9-12）：正常组EC界限清楚，排列规整，连接紧密；细胞呈长梭形，核区饱满，膜表面结构清晰，可见典型微绒毛。模型组：EC形态明显异常，<WP=5>部分呈收缩状态，体积缩小，细胞间隙增大或出现深大裂隙；细胞膜表面呈大小不等的虫蚀状、火山口状缺损，洞内嵌有红细胞、白细胞，并可见大片EC崩解，甚至脱落仅余残基，区内有血小板、血细胞、细胞碎屑和纤维素等附着。木贼两预防组EC基本完整，排列较整齐，可见少量缺损，胞膜部分破坏，呈小洞状，损伤明显轻于模型组。4.4）透射电镜观察（见附图13-16）：正常组EC完整，细胞间连接紧密，胞质互相覆盖；模型组EC细胞连接处胞质分离，变直、变宽，细胞间出现较大间隙，并可见MC黏附于EC表面或伸出伪足潜入内皮间隙、内皮下，大部分EC残缺、脱落，表面有血小板黏附。木贼高、低剂量组可见EC较完整，覆盖于内膜表面，细胞连接较好，MC黏附少。（5）流式细胞术检测结果：5.1）EC凋亡率变化（见附表3、附图13-16）：模型组EC凋亡率显着高于正常组（p<0.01），木贼高、低剂量组凋亡率则显着低于模型组（p<0.01 6.12±1.39 VS 7.04±1.12 VS 10.5±1.63）。高、低剂量组之间无差别。5.2）凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的变化（见附表4、附图17-图24）：模型组基因Bax、Bcl-2表达及BaxBcl-2值均明显高于正常组（p<0.01）；木贼两组大鼠主动脉EC Bax表达明显低于模型组（p<0.01, 4.89±0.34 VS 4.78±0.27 VS 5.88±0.43），Bcl-2表达量变化虽无统计学意义，但Bax/Bcl-2值较模型组低（p<0.05, 0.95±0.009 VS 1.02±0.005 VS 1.18±0.017）。高、低剂量预防组之间无差别。结论：本实验成功复制SD大鼠食饵性高脂血症及早期AS病变模型，木贼预防性用药后，观察血管EC功能<WP=6>及形态变化。结果表明：（1）木贼可调节食饵性高脂血症大鼠的脂代谢紊乱，降低TC、TG、LDL，升高HDL； （2）木贼可改善EC功能，影响细胞激素分泌，激活NOS，增强NO活性；（3）木贼可下调促凋亡基因Bax表达下降，使Bax与抑制凋亡基因Bcl-2比值下降；（4）木贼可显着降低AS早期大鼠主动脉EC的凋亡率。（5）形态学观察发现（肉眼、光镜及电镜）木贼能保护血管EC，减轻AS早期EC受损的程度
张凤梅[4]2006年在《木贼提取物对大鼠AS早期损伤的影响》文中研究指明目的：中药木贼为木贼科植物木贼(Equisetum hiemale L．)干燥的地上部分，具有降压、镇痛、抗过氧化脂质形成及降低实验性大鼠血脂的作用。有关实验证实，中药木贼水煎剂有明显降低血脂，影响粘附分子表达，抑制单核细胞与内皮细胞的粘附，减轻内皮损伤，改善内皮功能，阻断AS启动的早期事件发生，抗AS作用。为进一步探讨木贼抗AS作用的有效部位，本实验首先对其进行提取和分离，并用所得的提取物进行动物实验，对比观察两组木贼提取物对不同指标的药效作用，旨在证实木贼提取物同样有抗AS的作用。 方法： 1 木贼有效部位的提取、分离 取木贼用蒸馏水1：100回流提取得木贼水煎剂，水煎剂用正丁醇萃取，正丁醇液回收至干，用蒸馏水定容至1.25g/ml(正丁醇提取物)，作为灌胃溶液；水煎剂萃取后剩余部分浓缩至浓度为1.25g/ml(正丁醇提取剩余物)，作为灌胃溶液。 2 提取物的药效动物实验 选用健康雄性成年SD大鼠60只，随机分为五组：正常对照组、模型组、阳性对照组、木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组，每组12只，用高脂饲料复制大鼠早期AS模型，自造模开始，提取物Ⅰ组每日以木贼的正丁醇提取物1ml/100g体重．d(合生药12.5g/kg．d)灌胃；提取物Ⅱ组每日以木贼水
甄艳军, 安杰, 侯建明, 朱方, 刘芳[5]2003年在《木贼对动脉粥样硬化早期大鼠内皮细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响》文中研究表明目的 观察木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血管内皮细胞凋亡及 bax、bcl- 2表达的影响。方法 高脂饲料复制 SD大鼠高脂血症和早期动脉粥样硬化模型 ,同时给以不同剂量木贼水煎剂灌胃 ,实验 1 0 w后 ,流式细胞术定量检测各组主动脉内皮细胞凋亡率及 bax、bcl- 2基因蛋白表达。结果 模型组内皮细胞凋亡率及两个基因表达明显高于正常组 (P<0 .0 1 ) ;木贼组内皮细胞凋亡率与 bax表达量显着低于模型组 (P<0 .0 1 ) ,bcl- 2比较虽无统计学意义 ,但用药后 bax/bcl- 2比值差异具有显着性。结论 木贼可从基因水平调控早期动脉粥样硬化主动脉内皮细胞凋亡 ,干预动脉粥样硬化始动环节及其发生。
丁奇峰[6]2006年在《姜黄素对血管内皮损伤和内皮细胞粘附及凋亡的影响》文中研究表明目的:动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)性疾病是严重危害人类健康的一大类疾病,在发达国家被称为“头号杀手”,是世界范围的主要死亡原因。内皮细胞(endothelial cell, EC)损伤、凋亡是AS病变形成的始动环节,脂质代谢紊乱是导致AS发生的独立的危险因素之一,降低血脂、保护血管内皮是AS性疾病防治的关键步骤。西药羟甲基戊二酰辅酶A(hydroxy- methyl-glutaryl coenzyme A, HMG-CoA)还原酶抑制剂如辛伐他汀、普伐他汀有调脂、抗氧化、上调低密度脂蛋白受体、抑制血管细胞粘附分子-1表达的作用,临床已广泛用于AS性疾病的治疗。但其价格昂贵,且副作用及长期应用的安全性有待进一步评估。近年来有大量研究表明,多种中药可从不同环节干预AS始动因素、降低AS早期事件发生率、减轻AS病变程度,且效果明显。姜黄素为常用传统中药—姜黄的主要成分,具有理气活血化瘀、祛痰降浊的功效,主要用于治疗气滞血瘀型的高脂血症。药理药效学研究表明,该药能明显降低甘油叁酯、胆固醇和低密度脂蛋白,提高高密度脂蛋白的含量,具有抗氧化作用,为了进一步探讨其作用机理,我们拟利用高脂饲料制作早期动脉粥样硬化大鼠模型,从整体、细胞、分子水平探讨姜黄素对血管内皮损伤和内皮细胞粘附及凋亡的干预作用。方法1实验动物清洁级健康雄性Sprague-Dauley系大鼠55只,体重200～250g,由河北医科大学动物实验中心提供(证书号:冀医动管字04259号)。2动物分组普通喂养动物1周,使其适应环境。一周后眶内采血检测血脂,均为正常者用于实验。根据体重排序,然后随机分为4组:即空白对照组(简称正常组)10只、模型对照组(简称模型组)15只、西药治疗组(简称辛伐他汀组)15只、姜黄素治疗组(简称姜黄素组)15只。3模型复制应用高脂饲料喂养SD大鼠复制早期动脉粥样硬化模型。以上分组除正常组外,其他3组自实验第一天起喂饲高脂饲料。饲料中含
何丽嵘[7]2012年在《木贼二氯甲烷提取物抗肿瘤活性成分研究》文中研究指明本实验所用木贼为木贼科木贼属植物木贼Equisetum hiemale L.的干燥地上部分。木贼具有散风热、退目翳、止血的功效。用于风热目赤、迎风流泪、目生云翳等症。本实验首先将木贼(E.hiemale)的干燥地上部分用乙醇提取叁次,得到乙醇提取浸膏,加水溶解后依次加入等体积的二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,得到二氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层的干燥浸膏。为了研究木贼的抗肿瘤活性物质基础,对各个萃取层进行了活性筛选实验,二氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层对Hela细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为:69.96 μg/mL,206.99 μg/mL,286.41 μg/mL,二氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层抑制HepG2细胞的IC50值分别为:35.09 μg/mL,289.01 μg/mL,383.72 μg/mL,二氯甲烷层对 Hela 细胞和 HepG2细胞的抑制作用最好,选择木贼二氯甲烷层进行分离,进而得到该层中的抗肿瘤活性物质。利用各种分离方法(包括正相硅胶柱层析,反相硅胶柱层析,葡聚糖凝胶柱,高效液相色谱仪等)从木贼二氯甲烷层中分离得到7个化合物,通过对其波谱分析鉴定了 7个化合物的结构依次为:亚油酸甲酯(Ⅰ),β-谷甾醇(Ⅱ),胡萝卜苷(Ⅲ),槲皮素(Ⅳ),山奈酚-3,7-双葡萄糖苷(Ⅴ),山奈酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅵ),细辛脂素(Ⅶ)。其中化合物Ⅰ与化合物Ⅶ为首次从该植物中分离得到。化合物Ⅰ-Ⅵ抑制Hela细胞的IC50值分别为:93.78 μM、134.49 μM、68.52μM、162.63 μM、159.68 μM 和 114.33 μM;化合物 Ⅰ-Ⅵ 抑制 HepG2 细胞的 IC50值分别为:119.74 μM、88.99 μM、97.74 μM、137.62 μM、165.94 μM 和 97.58 μM。化合物Ⅰ和Ⅲ对Hela细胞生长具有较好的抑制作用;化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ对HepG2细胞生长具有较好的抑制作用。
甄艳军, 侯建明, 朱方, 周晓红, 李国明[8]2004年在《木贼对大鼠高脂血症及主动脉内膜早期粥样硬化病变的影响》文中研究说明目的 观察木贼对食饵性高脂血症大鼠血清学指标及主动脉内膜早期粥样硬化病变的影响。方法 采用SD大鼠 ,随机分为对照组、模型组和木贼给药组。高脂饲料造模 ,同时给木贼煎剂灌胃 ,实验 1 0w后 ,检测血清脂质水平 ,光镜和电镜观察主动脉内膜形态变化。结果 给药两组血清总胆固醇和低密度脂蛋白明显降低 ,高密度脂蛋白明显升高 ,与模型组相比均有显着性差异 (P <0 0 1 )。形态学观察发现 ,模型组主动脉内膜出现典型粥样硬化病变 ,木贼煎剂给药后能明显减轻主动脉内膜受损程度。结论 木贼可通过降血脂保护主动脉内膜 ,干预动脉粥样硬化的早期病变发生
李志永[9]2008年在《木贼抗氧化损伤作用的有效部位提取及对人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用》文中进行了进一步梳理目的:提取、分离并测定木贼(Equisetum)中抗氧化损伤作用的有效部位。观察其对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤后细胞增殖与凋亡的影响,以进一步确认木贼保护血管内皮、抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)早期损伤的有效部位及机制。方法:第一部分1.木贼有效部位的提取和分离称取适量木贼饮片加12倍量的70%乙醇,电热套加热回流提取3次,每次2h,过滤得提取液。分批将提取液减压浓缩,经大孔树脂分别以蒸馏水、30%乙醇及70%乙醇洗脱分离。收集70%乙醇洗脱液作为有效部位测试样品。2.木贼有效部位含量的测定将槲皮素和阿魏酸标准品稀释成不同倍数浓度,用紫外分光光度计测定其吸光度,绘制标准曲线并得回归方程。用同样方法检测提取样品的吸光度,根据回归方程得出其中有效部位(总黄酮和总酚酸)含量。精量一定体积的提取样品,将其烘干达恒重,用所测有效部位含量与之相比,以计算所含有效部位纯度。3干预细胞药物溶液的配置将一定量浓缩液用用二甲基亚砜(DMSO)充分溶解后加入无血清培养基DMEM配成所需浓度(500μg/ml)药物溶液,灭菌、-20℃保存备用。第二部分1.低密度脂蛋白的分离、氧化和鉴定采用化学沉淀法提取低密度脂蛋白(LDL)。将LDL置于10μmol/L浓度CuSO4溶液中37℃氧化24h,经PH7.4 PBS透析24h,过滤除菌,得ox-LDL,4℃保存。琼脂糖凝胶电泳鉴定,紫外分光法监测氧化过程及氧化程度,考马斯亮蓝法测定浓度。2.人脐静脉内皮细胞的培养与分组人脐静脉内皮细胞株复苏后于含15%新生小牛血清的DMEM中培养,胰酶法消化传代。取对数生长期细胞,随机分成对照组、氧化损伤组、木贼提取物干预组。将细胞培养液换成无血清DMEM,培养6h后对照组与损伤组分别加入无血清DMEM,木贼提取物干预组加入等量木贼有效部位药物溶液(终浓度为50μg/ml)。继续培养1h后木贼提取物干预组与损伤组分别加入ox-LDL(终浓度为80μg/ml),对照组加入无血清DMEM。共培养12小时后收集细胞和培养液用于检测。3.指标检测分别于倒置显微镜及扫描电镜下观察各组细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期及Caspase-3蛋白表达量,半定量RT-PCR检测内皮细胞Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的表达。结果:第一部分1.木贼中总黄酮和总酚酸的含量:以槲皮素计单位质量木贼中总黄酮含量为1.69mg/g,以阿魏酸计单位质量木贼中总酚酸含量为1.23mg/g;单位质量木贼中总黄酮与总酚酸合计平均含量为2.92mg/g。2.木贼有效部位的纯度:为63.28%。第二部分1.形态学观察倒置显微镜下对照组细胞生长状态良好,贴壁牢固,细胞间连接紧密,呈单层铺路石样镶嵌排列;损伤组细胞形态改变明显,细胞收缩、变圆,胞体变小,连接疏松,较多细胞脱落;木贼提取物干预组细胞生长状态明显好于损伤组,数量较多,呈单层铺路石样镶嵌排列,似对照组。扫描电镜下对照组细胞外形饱满、胞质丰富,细胞间连接紧密;损伤组细胞表面有泡状突起及凹陷空洞形成多呈凋亡状态;木贼提取物干预组组细胞形态明显好转,外形饱满,胞质丰富。2.流式细胞仪检测内皮细胞周期的改变与对照组比较,损伤组停留在G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),S和G2/M期细胞减少;与损伤组相比,木贼提取物干预组G0/G1期细胞百分数则显着降低(P<0.01),S和G2/M期比例均升高。损伤组内皮细胞增值指数PI较对照组显着降低(P<0.01),木贼提取物干预组PI较损伤组则明显升高(P<0.01)。3.流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率的改变损伤组内皮细胞调亡率与对照组相比明显升高(P<0.01),而木贼提取物干预组调亡率则比损伤组明显降低(P<0.01)。4.木贼有效部位对内皮细胞Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达的影响Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA在损伤组的表达均明显高于对照组(P<0.01);而两者在木贼提取物干预组则比损伤组明显降低(P<0.01)。5.木贼有效部位对内皮细胞Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达的影响损伤组内皮细胞Bax mRNA的表达明显高于对照组(P<0.01);与损伤组相比,木贼提取物干预组Bax mRNA的表达明显降低(P<0.01)。Bcl-2 mRNA的表达与上述趋势相反。Bax/Bcl-2比值各组间差异更为明显,损伤组远高于对照组(P<0.01),木贼提取物干预组则显着降低(P<0.01)。结论:通过此工艺流程,得到了较高纯度的总黄酮和总酚酸,达到作为有效部位的标准。通过其干预细胞实验证实木贼提取物可通过多途径抑制ox-LDL对内皮细胞的损伤,从多环节发挥抗早期AS作用,推测提取物中黄酮类及酚酸类化合物即为有效部位的药理活性成分。
万盟[10]2011年在《冠心平对血管内皮功能障碍及其相关信号干预的研究》文中研究表明冠状动脉粥样硬化性心脏病指冠状动脉粥样硬化使血管腔阻塞,导致心肌缺血,缺氧而引起的心脏病,简称冠心病(CHD)。 CHD是一种严重危害人类健康的常见病,多发病。在欧美等发达国家,其死亡率占各类疾病死亡率的首位。据统计,我国CHD的平均患病率为6.49%,近年来CHD的发病率和病死率呈快速攀升趋势,极大的威胁人类健康,并给社会及家庭带来了沉重的经济负担。我国疾病监测系统资料显示,90年代以来CHD死亡率一直呈现上升趋势,1991年死亡率为25.3/10万,到1998年已经上升到42.7/10万,7年间上升了50%左右,目前全世界心肌梗塞的死亡率已仅次于癌症而位居第二。因此,如何有效地防治CHD已成为当今世界范围内的一项重要科研课题。本实验将在第一部分从整体的角度观察冠心平对动脉粥样硬化金黄地鼠血管功能的调节,在第二部分从体外细胞分子角度观察冠心平保护血管内皮细胞和抗细胞凋亡的作用。第一部分冠心平对动脉粥样硬化金黄地鼠的影响采用94%基础饲料、1%胆固醇、5%猪油配制的高脂饲料喂养金黄地鼠,通过定期的血液指标检测和病理指标检测,建立动脉粥样硬化金黄地鼠模型。再连续给予冠心平6周,6周后取血检测及肝脏、主动脉病理观察。第一节中选取一般指标分析模型建立情况,分别从体重,血脂,主动脉病理和肝组织病理方面考察冠心平作用,结果显示冠心平可降低高脂饲料喂养后金黄地鼠的体重,同时对于血脂中甘油叁酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平有调节作用。对高脂饲料造成的肝脏及主动脉损伤有明显改善作用。第二节以动脉粥样硬化金黄地鼠外周血中激素水平为研究对象,结果显示冠心平调节高脂饲料喂养后金黄地鼠的氧化应激水平,降低外周血清的MDA水平,同时升高SOD水平；冠心平对高脂饲料喂养后金黄地鼠的促凝与纤溶系统有调节作用,升高外周血中t-PA水平,降低PAI的水平；冠心平对高脂饲料喂养后金黄地鼠的血小板凝聚功能亦有调节作用,降低外周血中TXB2水平,升高6-Keto-PGF1α水平,减小了TXB2/6-Keto-PGF1α的比值；此外,冠心平还降低高脂饲料喂养后金黄地鼠外周血中TNF-α水平,升高了NO水平,发挥炎症因子调节作用。第叁节采用免疫组织化学方法,考察冠心平对动脉粥样硬化金黄地鼠主动脉中ICAM-1、 TNF-α、 NF-κB及IL-10的影响,同时考察对于主动脉凋亡程度的影响。结果显示,冠心平可降低高脂饲料喂养后金黄地鼠主动脉组织中ICAM-1、 TNF-α、 NF-κB的表达水平,对IL-10的表达影响不明显。同时抗金黄地鼠主动脉组织的凋亡,具有保护主动脉结构的作用。第二部分冠心平干预血管内皮细胞损伤的机理研究本章中采用体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,运用血清药理学方法制备兔含药血清,以含药血清与血管内皮细胞共培养,再以H202诱导细胞损伤,采用一系列生化、分子生物技术考察冠心平对于构成血管内膜重要组成部分的血管内皮细胞在氧化损伤下的影响。第一节筛选H202合适的损伤浓度。体外培养HUVEC细胞,将H202用不含血清的RPMi1640配制成不同的浓度梯度,与HUVEC共培养24h,以MTT法检测不同浓度下H202对HUVEC的损伤程度,以考察出合适的造模浓度。结果显示,不同浓度的H202与HUVEC共培养后,发现H202浓度在50-100umol/L时,对HUVEC损伤较为合适。第二节考察在冠心平含药血清干预下,血管内皮细胞在H202诱导损伤后,细胞培养液上清中氧化应激水平与影响内皮细胞功能因子的变化情况,结果显示含药血清与HUVEC共培养后,再加入H2O2共培养24h,冠心平含药血清可以调节氧化应激反应,降低细胞培养液上清中MDA水平,并且升高SOD水平,同时,还可以降低培养液上清中ET水平,升高NOS水平。第叁节利用酶联免疫反应考察在冠心平含药血清干预下,血管内皮细胞在H202诱导损伤后,细胞培养液上清中炎性因子水平的变化情况,结果显示冠心平含药血清与HUVEC共培养后,再加入H2O2共培养24h,冠心平含药血清可以调节炎症因子的分泌,降低细胞培养液上清中IL-1、IL-6和TNF-α水平,减少炎症因子水平。第四节体外培养HUVEC细胞,采用血清药理学制备含药血清,与细胞共培养,将H202的不含血清的RPMI1640培养液配制为100umol/L浓度,与HUVEC共培养12h,以流式细胞仪法和Hoechst33258荧光染色法检测冠心平含药血清对H202诱导HUVEC凋亡的影响。结果显示含药血清与HUVEC共培养后,再加入H2O2共培养12h,流式细胞仪法结果冠心平含药血清可以减少细胞的凋亡率；Hoechst33258荧光染色法结果显示冠心平药物干预后,细胞凋亡过程中细胞核染色质出现的固缩状态明显改善。第五节考察冠心平对H2O2诱导的HUVEC损伤模型凋亡过程重要蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的影响,采用免疫组化的方法,原位染色。结果显示含药血清与HUVEC共培养后,再加入H2O2共培养12h,免疫组织化学法结果冠心平含药血清可以减少细胞的凋亡过程中Bax和Caspase-3蛋白的表达,升高Bcl-2的表达。显示了冠心平具有H2O2诱导的HUVEC的抗凋亡作用,可能是通过其调节凋亡进程中重要的凋亡蛋白Bax、 Bcl-2及Caspase-3途径实现的。
参考文献：
[1]. 木贼对大鼠动脉粥样硬化早期血清学指标及形态学的影响[D]. 曹华. 河北医科大学. 2004
[2]. 两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期大鼠主动脉内皮细胞的影响[D]. 刘志敏. 河北医科大学. 2007
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[4]. 木贼提取物对大鼠AS早期损伤的影响[D]. 张凤梅. 河北医科大学. 2006
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[6]. 姜黄素对血管内皮损伤和内皮细胞粘附及凋亡的影响[D]. 丁奇峰. 河北医科大学. 2006
[7]. 木贼二氯甲烷提取物抗肿瘤活性成分研究[D]. 何丽嵘. 延边大学. 2012
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[9]. 木贼抗氧化损伤作用的有效部位提取及对人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用[D]. 李志永. 河北医科大学. 2008
[10]. 冠心平对血管内皮功能障碍及其相关信号干预的研究[D]. 万盟. 南京中医药大学. 2011