苏州科技城医院检验科 215163
摘要：目的 研究速率法测定同型半胱氨酸的可行性，建立简便检测血浆同型半胱氨酸的方法。方法 在Hitachi 7060型全自动生化分析仪上，以速率法测定血浆同型半胱氨酸，依NCCLS EP5-7文件要求以线性范围和精密度作为评价指标，并分析其与HLPC测定结果的相关性。结果 本法的线性范围2.0-50µmol/L；批内平均变异系数分别为1.59%（P1）和1.92%（P2）；批间平均变异系数为2.51%。速率法与HLPC的相关性：Y=1.0207X-0.0302，回归系数（R2）=0.9893。结论 该法重复性好、线性范围较宽并与HPLC法有很好的相关性，操作简单，完全符合实验室常规检测的需要。
关键词：速率法；同型半胱氨酸；血浆
Abstract：Obejective：To investigate the feasibility of the rate assay and to establish a simple assay for determining homocysteine（Hcy）in serum.Methods. Methods：The plasm Hcy was detected by the rate assay on Hitachi 7060 automatic analyzer. Performance characteristics such as precision，linearity and correlativity of HPLC were evaluated according EP5-7 issued by the national committee on clinical laboratory standards（NCCLS）. Results：The linear range is 2μmol/L～50μmol/L. Inter- assay CVs were 1.59% and 1.92%，respectively，and intra- assay CVs was 2.51%. For the correlativity of HPLC，the rate assay method showed a good correlation with HPLC（Y=1.0207X-0.0302，R2=0.9893）.Conclusion：Performance of precision，linearity and correlativity of HPLC of the rate assay for determining Hcy in serum can fulfill the requirements of clinical laboratory.
Key word：rate assay homocysteine serum
同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy），为一种含硫氨基酸，是营养必需氨基酸-甲硫氨酸（Met）代谢的中间产物。血浆中存在氧化型和还原型两种形式，氧化型Hcy占绝大多数（99％），还原型即单体Hcy只占1％。Hcy血浆水平受性别、年龄、吸烟、血压、B族维生素缺乏、叶酸、某些药物、Hcy代谢调节酶基因多态性、内分泌激素如胰岛素和胰高血糖素以及肾脏功能等诸多因素影响[1-2]。
目前，实验室常用的Hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法及荧光偏振免疫法等。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点，现在公认其为测定血浆Hcy浓度的标准方法，但因色谱法（HPLC及GC-MS）需要的设备复杂且昂贵，难以适应常规临床化学实验室应用。而近年发展的速率法适用于多数全自动生化仪，自动化检验，成本低，操作简单，且可测定大量标本，因此受到临床广泛欢迎。
为评价该速率方法的可行性，我们依据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁发的EP5．A（临床化学设备操作精密度评价核准指南）、EP6．A（定量分析方法的线性评价核准指南）和EP7．A（临床化学干扰实验核准指南）为指导，采用深圳奥萨制药有限公司提供的试剂对该方法进行了线性范围、精密度和结果准确性方面的评价。
1 材料和方法
一、仪器和试剂
1.仪器 日立7060（Hitachi 7060）型全自动生化分析仪；高效液相色谱仪（HPLC Agilent 1200）。
2.试剂 Hcy检测试剂由深圳奥萨制药有限公司提供，批号为20140801（P1）、20140802（P2），规格为：62ml/盒，试剂盒自带标准品和质控品。
3.BIORAD公司的定值血清样本。
4.标准品为：4.4µmol/L、8.8µmol/L、16.25µmol/L和32.5µmol/L。
5.质控品：低值质控品为8.8-12.8µmol/L，高值质控品为21.5-27.5µmol/L。
二、实验对象
998例心脑肾及肝功能均正常的体检者，且实验组间的年龄、性别差异均无统计学意义。以上的被检测对象均来自连云港第二人民医院体检中心。
三、标本采集与处理
标本采用EDTA抗凝，采血后尽快离心分离血浆，如果不能立即离心，冷藏放置，在1 h内离心。分离血浆后可在室温稳定4 d，0～2℃稳定4 周，-80℃稳定数月或几年。
四、方法
1.测定原理
基于小分子捕获技术SMT的S-腺苷同型半眺氨酸水解酶。在TCEP作用下，氧化型Hcy被转化为游离型后，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷，腺苷立即被水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD，样本中的Hcy浓度与NADH转化率成正比。
2.测定方法与分析参数
两点速率法;反应时间lOmin;读数时间29-34点;主波长340nm;副波长405nm;样本用量13μL;试剂1用量240μL ;孵育5min;试剂2用量62μL;反应方向负反应;两点线性校准。
3.统计学方法
采用Excel 2003进行数据处理。
2 结果
2.1 精密度实验
根据NCCLS EP-5文件进行精密度检测，分别用20140801批和20140802批试剂盒检测同一份临床样本（15.91µmol/L），2h内连续测定20次，计算批内CV值。每天测定一次，连续测定20d，计算批间CV值。批内和批间精密度见表1。
3 讨论
与市面其他同类体外诊断试剂产品的技术参数要求比较[3-6]，该同型半胱氨酸检测试剂盒在线性范围、精密度和结果准确性均能达到满意效果，并且线性范围（2-50µmol/L）远高于ELISA法的Hcy检测试剂盒的线性范围（一般低于20µmol/L），更适应临床检测，更具有市场优越性，便于在临床上推广使用。
该试剂盒为2试剂配方，适用于全自动以及半自动生化仪，适应面广。
速率法是目前临床测定血浆Hcy最新的一种化学方法，与免疫、电泳、色谱等方法相比，更具有操作简单，可自动化，且临床检查功能指标更好等优点，随着对同型半胱氨酸的临床研究的深入，其定量测定意义越来越受到重视和普及。
参考文献：
[1]陆元善．同型半胱氨酸代谢和临床应用[J]．上海医学检验杂志，2001，16（4）：196．
[2]梁国威，赵媛，单华，等．脑血管病患者总同型半胱氨酸水平与血肌酐相关性及肾脏代偿调节的性别差异分析[J]．中华检验医学杂志，2006，29（3）：207-210．
[3] Roberts RF，Roberts WL. Performance characteristics of a recombinant enzymatic cycling assay for quantification of total homocysteine in serum or plasma[J]．ClinChimActa，2004，344（1/2）：95．
[4]安崇文，李海霞等.六种同型半胱氨酸循环酶法检测系统的分析性能评价[J].中华检验医学杂志，2014，37（3）：173-178．
[5]张晓坤，黎文成，杨晓仪.酶转换法检测血清同型半胱氨酸在常规生化检验的评价[J].中国医药指南，2011，（09）：5-6.
[6]张术华，程必蕴.不同方法测定同型半胱氨酸结果比较分析[J].检验医学与临床，2012，9（10）：1191-1192.
论文作者:蔡培培,温江涛
论文发表刊物:《健康世界》2016年第6期
论文发表时间:2016/6/16
标签：半胱氨酸论文; 血浆论文; 精密度论文; 速率论文; 线性论文; 方法论文; 试剂论文; 《健康世界》2016年第6期论文;