张晓庆 李佳楠 黑龙江省佳木斯市传染病医院 154007
【摘要】乙肝是由乙型肝炎病毒即HBV所引起的慢性传染病，多通过血液以及体液传播。乙肝属于高发性传染病，发展中国家的发病率较高。在中国，乙肝的感染率极高，通过调查显示，在中国的某些地区，乙肝的感染率竟然高达35%。因此，乙肝即时检测的重要性不言而喻。为了探讨乙肝即时检测的重要性，评价胶体金法表面抗原试纸条和胶体金法乙肝5项检测卡作为乙肝即时检验(POCT)的可行性，我院特选取多名患者进行对比检测，并将结果加以分析。本文详细记录了检测过程以及对结果的详细分析。
【关键词】即时检验；乙型肝炎病毒表面抗原；胶体金法
胶体金法检测乙肝标志物是一种方便快捷的方法，但如果用于乙肝的筛查，又担心其敏感性不足。因此，笔者试图通过对比检测的方式来寻找一种策略，既能使胶体金法快速的筛查乙肝，又不致于漏检阳性样本。现报告如下：
1．材料与方法
1. 1仪器与试剂
德国罗氏诊断有限公司生产的cobas 6000生化免疫分析系统e 601模块。
试剂:德国罗氏诊断有限公司生产的乙型肝炎病毒表而抗原测定试剂盒(电化学发光法)，英科新创(厦门)科技有限公司生产的乙型肝炎病毒表而抗原检测试剂盒(胶体金法)和乙肝5项检测卡(胶体金法)。
1. 2方法
电化学发光的操作遵照试剂盒说明书中有关e601的相关指导，并参照分析仪操作手册来设置免疫分析仪的操作方法。仪器根据Call和Ca12的测定值计算cut-off值，COI值=样本信号/cut-off。COI值<0. 9为阴性，COI值>=1.0为阳性，所有阳性结果均复检。在仪器运行正常，美国伯乐室内质控品在控的情况下，从住院、门诊和体检样本中随机抽取100例阴性样本和筛选出100例阳性样本。这100例阳性样本其中有50例200<COI值<10 000，有50例2<COI值<50。胶体金法的操作按照要求采集样本。加入60μl血清在试纸条箭头下的垫片上和检测卡的加样孔中，分别在10 min和20 min观察结果。
以HBsAg试纸条结果为策略1，以乙肝5项卡中的HBsAg、HBeAb、HBcAb这3项结果为策略2。
1. 3统计学分析
用SPSS16.U软件进行统计学处理。首先对策略1和策略2运行Logistic回归过程，产生预测概率的新变量pre-1和p re-2。然后，以新变量pre-1和pre-2为检验变量，以电化学发光结果为状态变量运行受试者工作特征(Receiver operating Characteristic, ROC)曲线，计算出策略1和策略2的ROC曲线下而积(Area Under Curve, AUC)[2]。
2．结果
200例样本同时用同一品牌的表而抗原试纸条和乙肝5项检测卡进行检测，结果:①胶体金HBsAg试纸条结果和胶体金5项卡中的HBsAg结果符合率为100%。②以电化学发光的结果作为标准，2种胶体金法对乙肝检测的特性异很好，达100%，但敏感性不足，仅为50%，尤其是对于COI值<50的弱阳性乙肝检出率为0%。③ROC分析结果见图1和表1，策略1的曲线下而积(AUC)为0. 705，策略2的曲线下而积(AUC)为0.885，说明策略2的诊断效能比策略1高。
3．讨论
HBsAg是最重要的HBV标志物。在我国，HBV的感染率超过10%。随着免疫技术的发展，即时检验(point of care testing, POCT)在检验医学中的新领域受到人们的关注和重视，己扩展到监测血凝状态、心肌损伤、酸碱平衡、感染性疾病和药物浓度监测等方面。尤其是在感染性疾病的应用，POCT的出现大大推进了基层医院、民营诊所、社区医疗的进步。近年来HBV疫苗高效价免疫球蛋白以及抗病毒药物的广泛应用，造成HBsAg变异呈低水平表达。如果低水平HBsAg患者没能得到准确检测，漏检将给临床诊断、输血及手术安全带来隐患。因此本文的阴性样本是随机抽取的，阳性样本则是筛选出来的，2<COI值<50的弱阳性样本有50例，概率远大于弱阳性样本在正常人群中的分布，导致本文计算的POCT敏感性比国内一些报道中的要低。而且当采用ECLIA系统检测HBsAg出现弱反应性结果时，为了省去繁琐的HBsAg中和确认试验和不确定因素，所以我们没有选择COI值介于1-2之间的样本，而是选择了COI值>2. 00的样本，因为用ECLIA系统检测的COI值>1.97时，可以排除假阳性的可能，无需再做确认试验。这样筛选样本就是为了保证选出的弱阳性样本中没有假阳性的存在。
有研究指出，弱阳性HBsAg样本中有80%的患者处于HBV“小三阳”状态。那么胶体金法乙肝5项检测卡检测到HBsAg弱阳性样本时，即使HBsAg阴性，HBeAb, HBcAb这2项中也有可能有1-2项阳性。本研究就把“小三阳”的这2项绑到一起成为策略2，观察它的诊断效能。由于近年来ROC曲线理论及AUC的建立和完善，使得诊断性评价更准确和可靠，它以真阳性率(灵敏度)为纵坐标，假阳性率(1一特异度)为横坐标来绘制曲线。可通过分别计算各个试验的ROC曲线下而积(AUC)进行比较，在AUC>0.5的情况下，哪一种试验的AUC越接近于1，即ROC曲线越靠近左上角，则哪一种试验的诊断效能越高。结果显示，策略1 ROC曲线下AUC为0. 705，策略2的AUC为0. 885，策略2的诊断效能比策略1有大幅度提高。所以我们认为胶体金法乙肝5项检测卡能承担乙肝POCT的检测，但要排除一种情况，即当HBsAg阴性，同时HBeAb, HBcAb这2项中有1-2项阳性，则乙肝的检测结果为待定，不能发出检验报告。要进一步做ELISA、电化学发光等检测。按照这个策略，参照低浓度的HBsAg在人群中分布率为0.53% , HBV 5项检测卡作为乙肝POCT的这一方案既能准确快速的发出99%以上的检验报告，而且也不会漏检低浓度的HBsAg阳性样本。
总结：
综上所诉，我们可以认为胶体金法乙肝5项检测卡能承担乙肝POCT的检测。从各方面分析，如果在检测时根据一定的策略，胶体金法乙肝5项检测卡不仅能够快速发出准确率高的检测报告，还能够对低浓度的HBsAg阳性样本作出检测。因此，用胶体金法乙肝5项检测卡检测乙肝值得推广。
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论文作者:张晓庆,李佳楠
论文发表刊物:《医师在线》2015年12月第23期供稿
论文发表时间:2016/4/22
标签：乙肝论文; 胶体论文; 样本论文; 阳性论文; 策略论文; 乙型肝炎论文; 电化学论文; 《医师在线》2015年12月第23期供稿论文;