（南华大学附属第一医院 普通外科 湖南 衡阳 421001）
【摘要】 胰腺癌是一种恶性程度高、预后不良的消化道恶性肿瘤，起病隐匿，发展迅速，5年生存率<5%。关键原因是缺乏早期诊断的高敏感度及高特异度的分子标志物。血液中miRNA能够游离于细胞之外，稳定存在于循环血液中，其在组织或血清中的异常表达与多种人类疾病密切相关，并在多种疾病诊断和预后判断中显示了独特价值。血清miRNA作为新兴的肿瘤分子标志物对于胰腺癌的临床诊断、疗效检测及预后的评估具有较好的应用前景。
【关键词】 血清miRNA； 胰腺癌； 诊断； 疗效监测； 预后判断
【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）13-0018-02
1.血清miRNA的概述
1.1 血清miRNA的来源与稳定性
血浆、血清miRNA 的功能研究的前提应该是阐明其来源以及他们和肿瘤组织或细胞之间的关系。Ke Zen与Chen-Yu Zhang[1]目前认为血浆或血清miRNA有三种主要来源途径：(1)、如同激素和细胞因子一样，细胞以游离的形式将miRNA分泌到细胞外；(2)、miRNA以出胞的形式选择性的排出细胞外，形成微粒；(3)、miRNA以微泡的形式从细胞胞浆中脱落排出细胞。众所周知， 血浆或血清中存在大量的外切酶，已有实验显示裸露的mRNA或miRNA在加入血浆或血清中后会很快降解。Mitchell将血浆放在室温24 h或者经过8次反复冻融发现，miRNA-15b、miRNA-16和miRNA-24经qRT-PCR检测未发生明显变化，并将合成的秀丽隐杆线虫中在人类没有同源序列的ce-l miRNA-39、ce-l miRNA-54和ce-l miRNA-238导入人血浆，发生降解，从而认为内生性的血浆miRNA可以抵抗血浆中RNA酶的活性。Chen等发现血清中存在miRNA，并且可以经过多次冻融并置于酸性（pH=1）或碱性（pH=13）的溶液3h无明显变化。
1.2 血清miRNA表达水平的检测及可靠性
由于血浆或血清miRNA的信号过低,无法运用传统的杂交芯片检测。目前国内外检测血清或血浆miRNA的手段包括：miRNA芯片、高通量测序法、Northern blot 法和荧光实时定量逆转录PCR（QRT-PCR）法等。Gilad也用各种试验说明了QRT-PCR的检测方法甚至在较为复杂的RNA背景条件下也可以达到高特异性、高敏感性、高重复性的检测血清中的miRNA。因此miRNA血中表达检测的最好方法是QRT-PCR法，此法操作简便、快速、高效、敏感性高和特异性强。
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2.血清miRNA与胰腺癌的关系
2.1 血清miRNA的单独诊断
Rui Liu等人在胰腺癌患者与正常人及慢性胰腺炎患者的血清miRNA对比检测中发现miRNA-20a，miRNA-21，miRNA-24，miRNA-25，miRNA-99a，miRNA-185及miRNA191在胰腺癌患者血清中表达明显高于正常人与慢性胰腺炎患者，并指出这七个miRNA中，miRNA-21水平与胰腺癌患者的生存率有明显相关性，而这七个miRNA作为筛选指标的精确度达83.6%，并指出这七个miRNA可作为临床诊断和评估预后的潜在指标。因此，作者认为，血清miRNA-200a和miRNA- 200b有可能成为胰腺癌诊断的生物学标志物。
2.2 血清miRNA的联合诊断
Ang Li研究发现miRNA-200a与miRNA-200b可能会成为胰腺癌诊断指标。Jin Wang等人则检测血清miRNA-21，miRNA-210，miRNA-155，和miRNA-196a在胰腺癌病人中明显升高，miRNA-155是诊断早期胰腺癌的一个候选指标，而miRNA-196a则是与病情的发展呈平行关系，该四个指标联合诊断的敏感性为64%，特异性89%，指出这四个指标可能成为潜在的检测指标。因此认为血清miRNA可能会成为敏感而特异的胰腺癌肿瘤标志物。随着越来越多的与胰腺癌相关的特异性血清miRNA被发现及验证，有望作为胰腺癌的诊断标志物。
3.血清miRNAs与胰腺癌的疗效检测
在许多人类肿瘤病例中存在 miRNA表达异常的现象，miRNA 表达水平的改变可能在肿瘤形成中起着重要作用。最近的研究发现，血清中的某些miRNA的表达与胰腺癌患者的疗效有潜在的相关性。Peng Wang等人通过用芯片检测177例接受以吉西他滨为基础进行化疗的晚期或已转移的胰腺导管癌患者血清及65例手术切除的胰腺导管癌组织miRNA-21表达，并构建小鼠胰腺癌模型，观察细胞生存及凋亡能力分析及细胞中miRNA表达，及对吉西他滨的药物敏感性分析，结果显示miRNA-21表达的上调与胰腺癌不良预后有明显的正相关性，使胰腺癌患者5年生存率明显下降，并与对化疗药吉西他滨的药物抵抗作用呈正相关性，并指出miR-21能成为晚期胰腺癌化疗抵抗及评估预后的一个潜在指标。这些研究结果表明血清miRNA对胰腺癌的个体化治疗中有着广阔应用前景，可能成为胰腺癌患者治疗效果监测的有效指标。
4.血清miRNA与胰腺癌的预后判断
最近的研究发现多个血清miRNA可用于预测胰腺癌的预后，但其作用于何种靶基因、作用机制及临床可行性仍需进一步研究。Shadan Ali对胰腺癌患者血清中的91中miRNA表达进行检测，发现37种miRNA表达下调，54种miRNA表达上调，并指出miRNA-21对胰腺癌的低生存率有着密切的相关性，let-7家族与miRNA-146a在胰腺癌中表达下调，并与其生存率呈负相关性。R Morimura等人则发现miRNA-18a在胰腺癌患者血浆中呈高表达，并且在手术后与术前相比
患者血浆miRNA-18a浓度明显下降。通过找寻适于胰腺癌预后判断的生物标志物，有助于对部分术后患者进行干预，能有效预防肿瘤的转移与复发，同时也更能利于辅助化疗药物的选择，从而制定出有效的治疗方案，为中晚期胰腺癌患者的治疗提供科学的参考依据。
5.血清 microRNA 在胰腺癌
临床应用中的前景 综上所述，相对于传统的肿瘤的检测手段，血清miRNA是一种快速的、方便的、精确的、无创的检测标志物。通过与胰腺癌相关的血清miRNA的各种最新的技术手段的规范化和商业化使血清miRNA可能成为新的临床诊断、疗效检测、预后的生物标志物。
随着对血清miRNA作用机制研究的不断深入，对血清miRNA与胰腺癌之间生理生化关系的认识也更加明确，血清miRNA在胰腺癌发展中的具体作用也越来越清晰。为此，应加快与之相关作用靶点的研究，以研发出新的药品与治疗手段。因此，血清miRNA将会在未来的胰腺癌临床诊断﹑疗效检测﹑预后中拥有美好的应用前景。
【参考文献】
[1]Ke Zen, Chen-Yu Zhang.Circulating microRNAs:a novel class of biomarkers to diagnose and monitor human cancers;[J].Medicinal Research Reviews,2012, 32(2),326—348.
论文作者:廖黎（综述）,陈国栋,贺更生（审校）
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第13期供稿
论文发表时间:2015/7/24
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