宜宾县人民医院 四川 宜宾 644600
【摘要】目的：对比传统的洗板方法和市场目前通行的洗板方法的优劣，观察两种方法哪种对酶联免疫的质量控制更加精确。方法：在酶联免疫质量控制中，出现了很多没有与反应中抗原抗体相结合的物质和在反应过程中与载体非特异性结合的物质。为了除去反应中的这些物质，在酶联反应的质量控制中通常采用洗涤的方法。结果：酶联免疫的质量控制需要经过加样、孵育、洗涤、显色、比色五个步骤，在实际临床应用中，若酶联反应的质量控制不好，可能会引起医疗事故，甚至会引发医疗纠纷。结论：在实验室洗涤操作过程中，需要保证各孔中的洗涤剂都被完全充分吸干，必要时需要人工扣板。最后一次洗涤一定要保证彻底清洁，否则会导致空白值，影响酶联免疫质量控制的精确性。
【关键词】酶联免疫；质量控制；洗涤方法
在日常的免疫检验中，酶联免疫吸附实验具有灵活性，精确性，简便性，是常用方法。如果我们想用此方法得到精确地检验结果，就必须严格把关酶联免疫的质量控制。酶联免疫的质量控制需要经过加样、孵育、洗涤、显色、比色五个步骤，在实际临床应用中，若酶联反应的质量控制不好，可能会引起医疗事故，甚至会引发医疗纠纷。
酶联免疫试验中多次加样的力度和姿势、维护和校准、是否混合均匀，孵育时候的温度高低、是否出现了污染、是否直接接触了强氧化性物质，洗涤的时候是否洗涤下来了非特异性干扰物、是否充分摇匀了洗涤液、液真是否堵塞、洗涤是否彻底，显色的时候是否避免了长时间的暴露、是否控制好了显色温度，比色的时候是否确定了板底的清洁和干燥、是否避免放置过长时间等等因素，均可以影响到酶联免疫质量控制的精确度。其中，洗涤是决定酶联免疫质量精确度的关键，本次实验研究针对酶联免疫质量控制中的洗涤方法来展开讨论。本次研究比较传统和现代市场通用的两种不同条件下的洗涤方法，以求得出更精确的检测结果。本次研究共分为实验一与实验二两个实验方法，其具体实验操作流程如下。
实验1：用浓缩碱裂解法取34份乙肝阴性血清样本，使用HBsAg试剂盒（厦门新创），分为单杯、双杯平行组作不同洗板方法的比对试验。灰区（或可疑）和弱阳性的结果均视作弱阳性。
本比对实验共有方法一、方法二、方法三、方法四4种方法，其中，方法一与方法二使用单杯，方法三与方法四使用双杯，其余所有操作流程在四个实验方法中均相同。首先向单杯双杯四个平行组中均加入20μl样本稀释液+100μl阴阳对照、待检样本于相应杯内，充分混合均匀后令其反应60分钟。而后，加入酶标液50μl，再次令其充分混合均匀，反应30分钟。接下来，方法一单杯洗板6次，待最后一次时拍干，方法二单杯洗板六次，每次洗板之后均拍干，方法三双杯洗板六次，待最后一次时拍干，方法四双杯洗板六次，每次洗板之后均拍干。所有洗板拍干结束后加显色液A、B各50μl,令其充分混合均匀后反应30分钟，再加终止液50μl，混合均匀后测量，得出实验结果，实验结束。其结果如下表实验1结果所示。
实验1结果：
随着标本数量的增加，酶联免疫反应的手工洗涤效果会变差，出现随机的弱阳性或灰区结果，即“花板”；适当增加洗涤或拍板的次数，能够很好的改进洗涤效果，得到准确的检测结果。
实验2：用浓缩碱裂解法取35份乙肝阴性血清样本，使用HBsAg试剂盒（厦门新创），取双杯平行分组作洗板机的不同洗板方法的比对试验。灰区（或可疑）和弱阳性的结果均视作弱阳性。
本次比对试验分为洗板机洗一和洗板机洗二两种分组，其余操作流程基本相似。首先，两种方法均加入20μl样本稀释液+100μl阴阳对照、待检样本于相应杯内，充分混合均匀后令其反应60分钟。而后，向两种分组里各加酶标液50μl，令其再次充分混合均匀，反应30分钟。反应结束后，洗板机洗一洗板六次，待最后一次洗板后拍干，洗板机洗二同样洗板六次，每次洗板结束之后均需要拍干。洗板机洗一和洗板机洗二拍干结束后，加显色液A、B各50μl，令其充分混合均匀后反应30分钟。最后加终止液50μl,混合均匀后测量，得出实验结果，实验结束。其结果如下表实验2结果所示。
实验2结果：
不同型号的洗板机，由于泵的负压不足，可能导致吸液残留，引起“花板”； 适当增加洗涤或拍板的次数，能够很好的改进洗涤效果，得到准确的检测结果。
2结论
2.1在本次实验研究中可以发现，酶联反应的质量控制洗涤时，单杯洗板六次，最后一次拍干，出现随机的弱阳性数和假阳性率，总例数较低。单杯洗板六次，每次洗板之后均拍干，无弱阳性数和假阳性率，总例数较低。双杯洗板六次，最后一次拍干，弱阳性数较高，假阳性率较高，同时也出现了较高的总例数。单杯洗板六次，每次洗板之后均拍干，没有弱阳性数，也没有假阳性率，同时出现了很高的总例数。
2.2洗板机洗一洗板六次，待最后一次洗板后拍干，出现了较低的弱阳性数和较低的假阳性率，同时，出现的总例数也比较高。洗板机洗二同样洗板六次，每次洗板结束之后均需要拍干，没有弱阳性数，没有假阳性率，同时，出现了很高的总例数。
2.3酶联免疫的显色结果，是酶促的化学反应；洗涤不充分，则酶液残留，将导致实验结果“花板”，增加假阳性率和复检工作强度。洗涤不充分，也会影响复检标准的制定，影响实验结果准确性。各试剂盒和各洗板机的洗涤效果也有差异，可适当增减洗板或拍板次数，以求最佳效果。
2.4各化学发光、荧光免疫检测仪全自动机型，虽然泵的负压足，洗涤效果较好，也可以开放洗涤次数的设置窗口，以便根据仪器工作状态或不同检验项目的实际洗涤效果，灵活调整洗涤次数，避免产生“花板”样结果。
2.5洗涤充分，更好的重复性和准确性，使酶免的质量控制得到保证，可促进实验室间的结果比对和相互认可。
参考文献：
[1]李会英.酶联免疫吸附实验影响因素的分析[J].检验医学与临床，2007，4（10）：985-986.
[2]程玉萍.标本收集对酶联免疫吸附实验检测结果的影响因素分析[J].山西医药杂志，2004，33（5）：412.
[3]罗俊.ELISA检测时洗板机洗板对检测结果的影响[J]江西医学检验杂志，2005，23（2）：180.
论文作者:刘昌全
论文发表刊物:《名医》（学术版）2016年3期
论文发表时间:2016/9/21
标签：方法论文; 免疫论文; 质量控制论文; 显色论文; 例数论文; 板机论文; 均匀论文; 《名医》（学术版）2016年3期论文;