1.南京市雨花医院 江苏南京 210012；2.南京中医药大学药学院 江苏南京 210046
摘要：目的 建立穴贴定喘膏贴剂的体外释放度测定方法，同时考察其体外释放的动力学特征。方法 以40％PEG400/生理盐水为释放介质，释放24h，采用HPLC法进行测定。结果 木兰脂素在0.00212～0.04224mg·mL-1浓度范围内线性关系良好，A＝48326C-4.9624（r＝0.9999）；平均回收率99.2％。其体外释放以Higuchi和Ritger-Peppas拟合最佳。结论 本法快速准确，可作为穴贴定喘膏的质量控制方法。基质型贴剂穴贴定喘膏体外释放度符合Higuchi公式，为非Ficks扩散。
关键词：穴贴定喘膏；释放度；木兰脂素
穴贴定喘膏是江苏省名老中医许济群教授在清代张璐“白芥子涂法”基础上研制而成外用贴膏剂，主要组成为辛夷、细辛、白芥子等，具有透达经络，逐饮豁痰，利气平喘的功效，对哮喘实证有一定作用。本实验主要对基质型贴剂穴贴定喘膏体外释放度测定方法进行了研究，制定出了一个比较科学的释放度测定方法，同时考察了其体外释放的动力学特征。
1实验材料
1.1仪器
Agilent1100高效液相色谱仪（Agilent科技有限公司）；YXJ-2台式高速离心机（金坛市金城国胜仪器厂）；FA1104电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；D-800LS智能溶出仪（天津大学无线电厂）。
1.2试剂与样品
PEG400（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）；氯化钠（分析纯，南京化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司）；四氢呋喃（分析纯，上海试四赫维化工有限公司）；重蒸水（娃哈哈纯净水）；木兰脂素对照品：购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用（编号110882-201204）；穴贴定喘膏（批号20130914，20130920，20130924）。
2方法与结果
2.1 释放方法
取本品，按照《中国药典》2010年版二部释放度测定法（附录XD第三法）[1]的要求进行测定，分别量取经脱气处理的40％PEG400 /生理盐水释放介质900mL，置各溶出杯内，加温，待释放介质温度恒定到（32±0.5）℃；将穴贴定喘膏固定于两层碟片之间，释放面朝上，再将网碟置于烧杯下部，调节转速至100 r·min－1。
2.2 释放介质
称取1kg辛夷药材，粉碎得粗粉，水蒸气蒸馏，，收集挥发油，辛夷提取挥发油后的药渣加70％的乙醇回流提取3次，每次乙醇用量6倍量，每次提取时间2小时，回收乙醇并浓缩至相对密度1.38～1.40（60℃），得浸膏。分别称取浸膏1、2.、3、4、5、6g于10mL具塞试管中，加入40％PEG400/生理盐水5mL，于25℃空气振荡器中振摇24ｈ，离心（14000 r·min－1，15min）后，进样5μL，超出线性范围的样品用甲醇适当稀释后进样，记录峰面积。当峰面积不再增加时，按外标法以峰面积计算木兰脂素在该介质中的饱和溶解度，结果木兰脂素的饱和溶解度为5.78 mg·mL-1，符合漏槽条件，故本实验选取900mL40％PEG400/生理盐水为释放介质进行释放度研究。
2.3 释放度检查的方法学考察
2.3.1色谱条件：Lichrospher C8色谱柱（4.6mm×250mm，5µm）；流动相：乙腈－四氢呋喃水（1：64）=34∶66；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：278nm。
2.3.2对照品贮备液的制备：取60℃减压干燥至恒重的木兰脂素对照品10.56mg，加甲醇制成1.056mg·mL的溶液，得对照品贮备液C0＝1.056mg·mL-1。
2.3.3 空白辅料的干扰试验：称取1片量混合辅料，置100mL量瓶中，加40％PEG400 /生理盐水适量，置32℃水浴中振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置100mL量瓶中，加释放介质至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照上述色谱条件测定，结果表明，辅料对木兰脂素的测定无干扰，见图1。
Table 1 a Blank chromatogram；b standard chromatogram
2.3.4线性关系的考察：精密吸取对照品贮备液C01.0mL于25mL量瓶中，以释放介质稀释并定容至刻度，得对照品溶液C1＝0.04224mg·mL-1，吸取C10.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL于10mL量瓶中，以释放介质稀释并定容至刻度，得每1mL含木兰脂素0.00212、0.004224、0.008448、0.012672、0.016896、0.04224mg的标准品溶液，分别进样100µL，测定，记录峰面积积分值，以峰面积积分值（A）对进样质量浓度（C，mg·mL-1）进行线性回归，方程：A＝48326C-4.9624（r＝0.9999），线性范围为0.00212mg·mL-1～0.04224mg·mL-1。
2.3.5 精密度试验：将浓度为0.008448mg·mL-1的标准品溶液，在278nm下测定6次，RSD为2.38%，表明精密度符合要求。
2.3.6回收率试验：
2.3.7穴贴定喘膏体外释放度研究：取一个批号的供试品（批号20120924），照2.1项下方法操作，于1h、1.5h、3h、8h、16.5h、18h、24h各取样1次，每次取2mL，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，并补加2mL空白40％PEG400 /生理盐水溶液。将供试品溶液进样100µL，照2.2项下的色谱条件分别测定木兰脂素的含量，计算每贴在不同时间的释放量和累积释放率（％）作为判断药物释放的指标（n=6），结果见表1，图2。
Accumulation release rate curve of Xuetie Dingchuan plaster
根据以上测定结果即释放曲线，确定释放度测定方法：采用《中国药典》2010年版二部释放度测定法（附录XD第三法），释放介质为40％PEG400 /生理盐水，转速100/min，本品在3小时、8小时、18小时的累积释放量应分别为标示量的10％～40％，30％～60％与50％以上。
以累积释放率（Q%）分别对时间t（h）按零级、一级、Higuchi以及Ritger-Peppas动力学方程进行回归，结果见表2。
3.讨论
3.1 经皮给药系统（transdermaldeliverysystem，TDS），是指药物以一定的速率通过皮肤经毛细血管吸收进入体循环产生药效的一类制剂[3]。它避免肠胃环境对药效的干扰和肝脏“首过效应”，延长了半衰期较短药物的治疗效果，具有能长期维持稳定的给药速率等特点[4]。体外释放是评价经皮给药制剂和质量控制的重要内容，其动力学特征对研究释放机理具有重要意义。作者利用本实验进行了中药复方体外释放度检查的研究与评价，探讨了释放介质的选择依据、建立了体外释放度检查方法学，并且对其释放特性进行了探讨，以期对中药复方透皮吸收制剂的研究与质量评价提供参考。
3.2穴贴定喘膏由辛夷、细辛、白芥子等研制而成，辛夷中除挥发油外，木脂素类成分是辛夷的另外一类主要活性成分，药效学研究表明，木兰脂素（magnolin）、松脂素二甲醚（pinoresinol dimethylether，PDE）等成分具有抗组胺，抗乙酞胆碱，拮抗PAF的作用。其中木兰脂素含量较高，具有一定专属性，木兰脂素为脂溶性成分，无色棱晶，mp 90~91℃（醋酸乙酯），本实验选取指标性成分木兰脂素研究中药复方穴贴定喘膏的体外释放过程。
3.4基质型贴片的体外释放过程可以描述为
式中Mt是t时刻的累计释药量（mg/cm2），M∞是贴片中药物的总含量（mg/cm2），当0.5<n<1时为非fick扩散[5]。已有研究表明，当基质中药物的质量分数远大于药物在基质中的溶解度时，n=1/2，即Higuchi公式[6]：
式中Q是释放度（%），A是单位体积贴片中药物的质量（mg/cm3），Daq是扩散系数（cm2/h），Cs是药物在基质中的溶解度（mg/cm3）。
Reference：
[1]《Chinese Pharmacopoeia》.2010.VOL II：Appendix XD
[2]JIANG Guo-qiang，CHEN Jun，WANG Yong，e tal.Study of in Vitro Drug Release of Matrix Transdermal Delivery System[J].Fine chemicais，2001，18（9）：520~522.
[3]梁秉文.经皮给药制剂[M].北京：中国医药科技出版社，1992.
[4]Ayman E Kattan，Charles S Asbill，Sam Haidar.Transdermal testing：practical aspects and methods[J].PSTT，2000，3（12）：426-430.
[5]Peppas N A.Analysis of fickian and non-fickian drug release from polymers[J].Pharm Acta Helv，1985，60：110-111.
[6]PING Qi-neng.Modern Pharmaceutics[M].Beiing：China Medical Science and Technology Press，1998.10：586.
作者简介：刘炜（1973～），女，江苏南通人，学士，主管中药师。
基金项目：2013年国家级大学生创新创业训练计划项目（编号：201310315032）
论文作者:刘炜,赵志阳,李圣惠
论文发表刊物:《健康世界》2014年22期供稿
论文发表时间:2016/4/7
标签：木兰论文; 体外论文; 介质论文; 生理盐水论文; 辛夷论文; 基质论文; 溶液论文; 《健康世界》2014年22期供稿论文;