湖南省宜章县中医院 湖南宜章 424200
摘要：目的：对人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响进行分析。方法：对2日龄的Wistar大鼠的乳鼠心肌细胞进行原代培养，且利用AngⅡ进行诱导后建立相应的心机细胞肥大模型，将其随机分为三组，PDS低剂量组，PDS高剂量组、肥大模型组，另外设立一个正常的对照组，通过Leica QWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行测定，采用BCA法对心肌细胞中蛋白质的总含量进行测定，采用荧光分光光度计对细胞中游离钙离子的浓度进行测定。结果：PDS可以使肥大心肌细胞的表面积显著减少，使心肌细胞中总蛋白质的含量、钙离子的浓度降低。结论：PDS对Angll诱导心肌细胞肥大有相应的抑制作用，其有可能与隔绝钙调神经磷酸酶的信号传导通路相关。
关键词：人参二醇组皂苷；血管紧张素1I；心肌细胞肥大
人参二醇组皂苷（PDS）主要是从五加科植物中的人参茎叶提取纯化而得，其包括人参Rbl，Rd，Rb2，Rc等一些皂苷单体。PDS具有抗心机梗死、抗休克、降低血糖、使血脂代谢紊乱得以改善的作用，在本研究中显示，PDS可以使缩血管物质的含量降低，增强抗氧化的能力，说明PSD在大鼠心梗之后还可以对心室重构起到相应的保护作用。本文主要就人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响进行分析，现作报道如下：
1.资料与方法
1.1动物
选用实验动物中心的2日龄Wistar大鼠乳鼠，其主要是用来培养体外的心肌细胞。
1.2乳鼠心肌细胞分组、原代培养、处理
对乳鼠的心肌细胞进行原代培养时，应选取2 日龄Wistar大鼠乳鼠的心脏，采用PBS对其腔室中的血液进行冲洗，并将结缔组织、心房剪掉，并把心室全部剪碎，剪为1mm3左右的组织块，采用0.125%的胰酶在温度为37℃的水中进行多次消化，且每次约保持5min。以10%的小牛血清来终止消化，并对其进行5 min的离心，待细胞沉淀之后利用DMEM进行培养，重悬之后接种在培养瓶中，在CO₂孵箱中进行90min的培养，并利用差速贴壁将非心肌细胞全部去除。对细胞的浓度进行调整，将0.1mmol/L5ˊ-溴脱氧尿苷加入其中，并接种到相应的培养板上，在CO₂孵箱中进行培养，培养48h之后对培养液进行更换，72 h后将其倒置在显微镜下进行观察。另外，在心机细胞中加入浓度相同的PDS、体积相等的心肌细胞培养液，且加入剂量为10-7mol/L的AngⅡ让其作用48h。分组和处理：肥大模型组：10-7mol/L的AngⅡ，对照组：等体积的培养液，PDS高剂量组：10-7mol/L的AngⅡ和800μg/mlPDS，PDS低剂量组：PDS400μg/ml、10-7mol/L的AngⅡ。
1.3测定心肌细胞的表面积
将1ml的1×105个/ml心肌细胞悬液接种在24孔的培养板中，且通过上述的分组处理之后，利用胰酶对心肌细胞进行消化并使其脱壁，且反复进行轻柔、将细胞吹散，然后静置、照相。通过Leica QWin病理图像分析系统对心肌细胞的表面积进行详细的测定，每一个组中检测五个视野，取平均值来进行对比分析。
1.4测定心肌细胞中的总蛋白含量
将2.5ml的3×105个/ml心肌细胞悬液接种在6孔的培养板中，通过上述的分组处理之后，将上层的培养液弃除，对PBS进行预冷、冲洗、轻柔，再把Western及IP细胞裂解液依次加到每个孔中，采用移液器对其进行吹打，让裂解液充分接触到细胞，进行裂解之后，进行5min的离心，并将上清收集好，即为细胞中的总蛋白。然后通过标准曲线将各组细胞中的蛋白浓度求出来，并将单个细胞的总蛋白量计算出来。
1.5测定心肌细胞中细胞游离钙离子的浓度
在6孔的培养板中接种2.5ml的3×105个/ml心肌细胞悬液，同样经过上述的分组处理之后，利用胰酶使心肌细胞得到消化，并让其脱壁，细胞的浓度必须超过106个/ml，且取1ml放到EP管内。在每一个实验组的管内加入Fura-2/AM的储备液5μl，待其最终的浓度为5μmol/L时，进行摇床、震动（37℃，60 rain），让Fura-2/AM充分和细胞进行反应。进行1200 r/rain的离心5 min，在利用D-Hank平衡盐溶液对细胞进行清洗两次，让细胞悬浮，然后加入玻璃比色杯内，再通过荧光分光光度计对其进行详细的测定。首先对340nm、380nm激发光中产生的荧光强度进行测定，将0.1%的Tnton X-100加入其中，再对其产生的荧光强度进行详细的测定，之后加入5mmol/L的EGTA，同样再次进行测定；根据相关公式即可计算出相应的结果[1]。
1.6统计学方法
本次研究中的数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析和处理，其中，计数资料的比较可利用χ2检验，各项指标采用标准差（±s）表示，当P＜0.05时，说明比较有差异具有统计学意义。
2.结果
2.1PDS给心肌细胞的表面积带来的影响
肥大模型组的心肌细胞的表面积为（6.05±0.72）μm2与对照组的表面积（4.67±0.18）μm2相比有所增加，且前者心肌细胞伪足粗大，比较存在差异具有统计学方面的意义（P＜0.05）。说明AngⅡ会致使心肌细胞的体积增大；PDS低剂量组的表面积（5.03±0.47）μm2、高剂量组（5.66±0.53）μm2和肥大模型组对比，PDS低、高剂量组心肌细胞的表面积有所减少（P＜0.05或者P＜0.05）。
2.2PDS对心肌细胞肥大中总蛋白质含量的影响
肥大模型组中心肌细胞的总蛋白浓度、单个细胞的蛋白质量与对照组比较显著增加，比较有差异存在有统计学意义（P＜0.05），证明AngⅡ可以让心肌细胞中蛋白质的合成不断增多；PDS低、高剂量组和肥大模型组比较，PDS低、高剂量组总蛋白质的浓度、单个细胞的蛋白质量减少，有差异存在有统计学意义（P＜0.05），见表1。
注，表中*表示和假手术组对比，P＜0.05；#表示和模型组对比，P＜0.05
2.3PDS对心肌细胞肥大中钙离子的影响
肥大模型组Ca2+的浓度（285.6±17.5）nmol/L与对照组（132.5±12.7）nmol/L比较，前者浓度显著上升（P＜0.05）；PDS低、高剂量组和肥大模型组对比，心肌细胞中的Ca2+显著降低（P＜0.05）。
3.讨论
AngⅡ在心肌细胞肥大中具有一定的促进作用，其往往被选用为诱导心肌细胞肥大的药剂。在本研究中采用浓度为10-7mol/L的AngⅡ来对乳鼠心肌细胞的原代培养进行诱导，且成功建立了细胞肥大的模型。研究结果中表明，肥厚模型组的表面积、总蛋白质含量比对照组高，PDS低剂量组、高剂量组可以使肥大心肌细胞表面积、总蛋白质的含量明显减少，因此说明PDS可以抑制AngⅡ诱导细胞肥大[2]。
另外，同样有研究证明细胞中的组Ca2+会刺激细胞功能出现紊乱，进而导致心肌肥大。发生心肌肥大时，心肌细胞膜中的Ca2+受体密度会不断增大，且增加的幅度和细胞肥大的程度有关。本研究中，AngⅡ诱导心肌细胞肥大的模型中，Ca2+含量显著上升，PDS低、高剂量组的Ca2+含量明显降低，这说明PDS可以对心肌细胞肥大中的Ca2+进行调增，进而使其在心肌细胞肥大药理中的抑制作用得以有效发挥[3]。
总而言之，PDS在血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中可以起到抑制作用，其与隔绝钙调神经磷酸酶的信号传导通路相关。
参考文献：
[1]韩冬，于晓风，曲绍春.人参二醇组皂苷对心肌梗死后心室重构大鼠心脏形态学及血流动力学的影响[J].中国老年学杂志，2011，31（1）：57-9．
[2]余良主，王柏军，王帮华.人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响[J].湖北科技学院学报（医学版），2013，25（64）：765-767.
[3]代德强，张亚杰，王楚盈.人参二醇组皂苷对血浆血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响[J].中国老年学杂志，2013，33（23）：5920-5922.
论文作者:黄翠兰
论文发表刊物:《健康世界》2015年5期
论文发表时间:2015/10/23
标签：心肌论文; 细胞论文; 表面积论文; 浓度论文; 诱导论文; 人参论文; 剂量论文; 《健康世界》2015年5期论文;