王亮[1]2001年在《利用重组F26G实现呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化的研究》文中研究说明本文对重组F26G（Furostanol glycoside 26-O-β-glucosidase）实现的呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化进行研究。用BamHⅠ和XbaⅠ两种限制酶酶切质粒pKG27，获得了含有编码F26G cDNA的基因片段，将其重组到表达载体pET-22b上，经酶切及PCR的筛选和确认，证明编码F26G的cDNA成功的克隆到表达载体上，构建了表达质粒pET-22b-F26G。 摸索了呋甾皂苷、螺甾皂苷的检测方法，并确立了TLC及HPLC检测条件，以此为基础，确立了体外酶转化反应的条件，成功的检测到了重组菌表达产物的F26G酶活性，证明构建的表达质粒成功的表达出F26G酶。 对重组菌的培养基pH值、培养时诱导物的加入时间及诱导时间等条件进行了考察，确立了高表达的菌体培养条件。 利用重组菌表达的酶对来源于不同种植物的一系列不同结构的呋甾皂苷进行催化转化，利用TLC、HPLC及ESI-MS等方法对酶反应检测、分析，考察重组F26G酶对底物的选择性及催化能力。放大酶反应，对转化产物进行了制备及纯化，确认其结构，对呋甾皂苷、螺甾皂苷间的转化机制进行了探讨。
王亮, 游松, 蒋雅红, 姚新生[2]2001年在《利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化》文中研究指明用BamHⅠ和XbaⅠ两种限制酶酶切质粒 pKG2 7,获得了编码F2 6G(F2 6G :furostanolgly coside 2 6 O β glucosidase)的cDNA ,然后将其重组到表达载体 pET 2 2b上而得到pET 2 2b CSF2 6G ,利用大肠杆菌E .coliBL2 1进行表达 ,用胞内可溶蛋白进行酶反应 ,通过TLC、HPLC分析证明重组菌表达出高活性的F2 6G酶 ,并实现了呋甾皂苷到螺甾皂苷的体外生物转化
参考文献：
[1]. 利用重组F26G实现呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化的研究[D]. 王亮. 沈阳药科大学. 2001
[2]. 利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化[J]. 王亮, 游松, 蒋雅红, 姚新生. 中国药物化学杂志. 2001