·案例报道·
可疑斑迹前列腺特异性抗原检测1例
姜淑玲，李辉，李莹娟，杨双华，景强
（昆明法医院司法鉴定中心，云南 昆明 650034）
关键词： 法医遗传学；前列腺特异性抗原；DNA；亲权指数；匹配概率
1 案 例
1.1 简要案情
某夫妻携带一张附着有可疑斑迹且潮湿的卫生纸到本鉴定中心，该卫生纸为丈夫在家里客厅垃圾桶中所捡。该夫妻要求检验卫生纸上可疑斑迹中是否有男性精液及女性成分，对其进行DNA检测，并与夫妻双方DNA分型结果进行比对。
1.2 检验过程及结果
通过金标试剂条法对卫生纸上的斑迹进行人精液前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）检验，结果呈阳性（图1），提示该卫生纸上含有人精液或人前列腺液。
坝体填筑分两期施工，一期施工左岸滩地，二期施工右岸河床。一、二期沥青心墙接头设计采用扩大接头型式，纵向1∶3斜坡。实际施工过程中高程4 046 m以上一期沥青心墙未能预留扩大接头，扩大接头无法实现。
检查已提交的控制点观测记录、成果精度、点之记以及计算过程等。主要内容有：(1)分析判定控制网的布设是否合理，控制点的点位和密度能否符合碎部测量的需要。(2)进行控制测量时外业观测的精度是否满足相应等级的规范要求。(3)标石的类型能否满足规范的要求，埋设标石是否稳固坚实。(4)布设图根点的位置、密度是不是符合解析法细部测量的规定。(5)平差计算软件是否正规，平差计算的结果是否正确，所有精度指标是否符合规范限差的要求。(6)资料提交是否完整。
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图1 卫生纸上可疑斑迹PSA检测结果
剪取2 cm×1 cm的卫生纸置于离心管中，加入TES 1 mL、10%十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate，SDS）50μL、20mg/mL蛋白酶K 5μL，混匀，37℃温浴过夜，以10 625×g离心20 min，取上清液150 μL备用，沉淀用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）洗涤3次，以10625×g离心20min，弃上清液后备用。分别于上清液中加入2μL蛋白酶K、50μL 10%Chelex-100，沉淀中加入 5 μL 蛋白酶 K、10 μL 1 mol/L二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）、150 μL 10%Chelex-100，提取DNA，采用Chelex-100法提取夫妻双方血样的DNA，使用PowerPlex®21试剂盒（美国Promega公司）进行PCR复合扩增，扩增体系为10μL。使用3130基因分析仪（美国AB公司）对PCR复合扩增产物进行电泳分离，采用GeneMapper ID-X v1.5软件（美国AB公司）进行数据处理。
将该卫生纸上的DNA与丈夫的DNA进行比对，结果并不匹配，表明该卫生纸上的斑迹不是丈夫所留。将卫生纸上的DNA与夫妻双方DNA联合比对发现，卫生纸上DNA的所属者与夫妻双方存在亲子关系，根据本鉴定中心统计的20个STR基因座遗传多态性分布频率，按照《亲权鉴定技术规范》（GB/T 37223—2018）中亲权指数（parentage index，PI）的计算方法，该卫生纸上DNA所属者与夫妻双方的累积亲权指数（combined parentage index，CPI）为 2.10×109，在不考虑双胞胎或者近亲情况的前提下，从遗传学角度支持夫妻双方是卫生纸上DNA所属者的生物学父母亲。
上清液中未提取到DNA，沉淀中提取的DNA分型结果显示，没有三等位基因或多个等位基因混合的基因座，表明该卫生纸斑迹中的DNA来源于单个个体，无混合成分，且Amelogenin性别基因座为XY。综合分析认为，该卫生纸上的可疑斑迹为单个男性个体所留。
随后向夫妻双方了解情况，自述家中育有一儿一女，儿子年仅5岁，因为儿子有起夜排尿至家中垃圾桶中的习惯，妻子怀疑被检卫生纸是浸有儿子尿液的卫生纸。随后本鉴定中心采集该5岁男童的血样进行DNA检验及比对，结果显示卫生纸上DNA所属者与该男童为同一个体。按照《个体识别技术规范》（SF/Z JD0105012—2018）中似然率（likelihood ratio，LR）的计算方法，得出卫生纸上DNA与该男童DNA的LR值为1.58×1027，提示卫生纸上的DNA系该男童所留。
针对被检卫生纸PSA检测结果呈阳性，本中心取被检卫生纸进行沉渣涂片染色镜检，未发现精子。此外，本中心还采集了健康4岁男童的尿液、稀释尿液和末段尿液进行人精液PSA检测和DNA检测，PSA检验结果呈阴性（图2），对其DNA进行检测，未检出扩增产物。
图2 健康4岁男童的尿液PSA检测结果
2 讨 论
PSA是一种相对分子质量为33 000～34 000的酸性糖蛋白，在前列腺组织和精液中被发现，PSA在精液中的平均质量浓度为 200～5 500 μg/mL[1-2]，在法医物证学鉴定中可用于确证可疑斑迹是否为人精斑，但在精液以外的多种人体体液中也可检测到PSA，例如尿液、血液、乳汁及羊水等[3-4]。男性在排尿时，前列腺液会与尿液混合，尿道周围的腺体也会分泌少量PSA[5]，故尿液中可以检测到PSA。但前列腺作为男性性器官之一，在青春期逐渐发育成熟并分泌前列腺液，本案中被检卫生纸PSA检验结果呈阳性，且在卫生纸上检出单个男性个体DNA，而该男性个体为5岁男童，说明被检卫生纸上的PSA来自尚未到青春期及性发育成熟期的5岁男童，结合男童母亲描述被检卫生纸被男童尿液浸湿过的情况，推测PSA检验阳性可能为男童尿液中混有PSA所致。本例案情的特殊性提示我们，在日常法医物证学鉴定工作中，遇到可疑斑迹DNA检测（或男女混合斑迹检测）的委托，尤其在PSA检验呈阳性时，切忌先入为主地认为是性成熟个体所留，在尊重被鉴定人隐私的前提下，需充分了解案情细节，对可能涉及的男女性个体，甚至是子女或家庭成员，在条件允许的情况下应尽可能采集相关个体的样本进行比对，有助于在出现类似特殊案例时，能结合案情给出科学、严谨及明确的鉴定意见。
参考文献：
[1]SENSABAUGH G F.Isolation and characterization of a semen-specific protein from human seminal plasma：A potential new marker for semen identification[J].J Forensic Sci，1978，23（1）：106-115.
[2]李学博，莫耀南，李守玮，等.尿液斑前列腺特异抗原的法医学检验[J].华中科技大学学报（医学版），2012，41（2）：241-243.
[3]陈凤生，王德芬，陆国强，等.青春发育期男孩尿液中睾酮及精子的检查[J].男性学杂志，1996，10（2）：90-92.
[4]YU H，DIAMANDIS E P.Prostate-specific antigen in milk of lactating women[J].Clin Chem，1995，41（1）：54-58.
[5]WANG M C，PAPSIDERO L D，KURIYAMA M，et al.Prostate antigen：A new potential marker for prostatic cancer[J].Prostate，1981，2（1）：89-96.
中图分类号： DF795.2
文献标志码： B
doi： 10.12116/j.issn.1004-5619.2019.04.033
文章编号： 1004-5619（2019）04-0505-02
作者简介： 姜淑玲（1988—），女，主要从事法医物证学鉴定；E-mail：873612033@qq.com
通信作者： 景强，女，教授，主要从事法医物证学、法医毒物学的研究及鉴定；E-mail：jing58103@126.com
（收稿日期 ：2018-07-05）
（本文编辑：张素华）
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