刘琳
（黑龙江省农垦北安管理局中心医院 黑龙江北安 164095）
【摘要】目的：探讨细菌学检验的方法和结果分析。方法：对细菌标本进行采集和送检。结论：细菌的检验对细菌的感染控制有很大的帮助。因此，要加大力度,更好地发挥临床微生物检验在医院感染控制中的作用。
【关键词】细菌学；检验；
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）01-0220-01
1.标本采集与注意事项
1.1 标本采集的时间
标本采集应在早期和未服用抗菌药物之前。
1.2 标本采集的种类
检验标本主要以患者的大便为主。某些情况下，患者的呕吐物、沾染粪便的衣物和尸体的肠内容物及环境水样亦可作为检材。
1.3 标本采集的方法
以采集患者粪便为主，采样时可用灭菌小勺或棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处转动取出。采用后者应注意棉拭大小适宜，避免采便量过少。一般要求水样便采取1～3ml，成形便采取指甲大小(2～3g)的粪量；采呕吐物、沾染粪便的衣物等，用无菌棉拭蘸取标本后插入碱性蛋白胨水管中送验；采水样时，用无菌采样瓶采水450ml送验(检验时将标本全部倒入含5％食盐及10％蛋白胨的浓蛋白胨水50m1中，增菌培养后按粪便标本检验方法进行分离培养。
1.4 标本的送检
采得的患者标本应在床边立即接种于培养基，不能立即检查的，要接种于碱性蛋白胨水或文．腊保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中保存，尽快送往检验室。标本与保存液的比例要适当，8～10ml保存液可加入l～3ml液体便或指甲大小的成形便，过多的大便量可降低保存液的pH。送检标本时应填写“标本送检单”，人源性标本应写明患者姓名、地址、发病时间、采集时间、临床诊断等。
2.检验方法和结果
2.1 病原学检查
2.1.1显微镜检 取黏液絮状的粪便标本直接涂片，空气自然干燥，在火焰上加热固定，用革兰或用l：10稀释的复红染色，镜检有无弧菌。一般新鲜粪便中弧菌形态较典型，排列成鱼群状。
取洁净的凹玻片，凹窝上涂上凡士林或滴水少许，取生理盐水1滴放在盖片中央，然后加粪便材料或新鲜培养物少许混合制成菌液，迅速小心地将盖玻片翻转轻放于凹片上，借凹窝周围的凡士林或水滴固定之，然后置高倍镜下观察动力。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆如无凹片，可采用压滴标本观察动力，取菌液l滴置于载物玻片上，复以盖玻片，高倍镜下观察动力。
2.1.2分离培养 液体增菌培养：将患者米泔样粪便或保存液检材采用灭菌毛细管吸取1ml左右，接种于碱性蛋白胨水中或直接将采便棉拭接种于碱性蛋白胨水中增菌培养。霍乱弧菌特别是埃尔托生物型在碱性蛋白胨水中生长迅速，易在表面上生成菌膜，37℃增菌6～8小时后，可取表面生长物或菌膜平板划线分离，同时做涂片染色和动力检查，必要时做再次碱性蛋白胨水增菌培养。
2.2 血清学检查期工程
血清学检查抗体的成分为抗菌抗体。为进行血清学诊断，需要采取患者的双份血清，在发病第1～3天采第一份血清，第l5～20天采第二份血清。检查血清中抗菌抗体常用凝集试验和杀弧菌试验，后者比前者敏感。血清学检查有助于进行流行病学追溯诊断。
2.2.1试管凝集试验 用生理盐水对倍连续稀释待检血清，每管含稀释血清0.5ml。将标准菌在营养琼脂上的l6～18小时培养物用0.2％甲醛生理盐水制成约含水量18亿菌/ml(相当于细菌标准比浊管浓度)的悬液，每一稀释血清管加0.5ml；另将菌悬液加入0.5ml生理盐水中作对照。摇匀，置37℃3小时观察初步结果，再放冰箱(4℃)或室温过夜，观察最后结果。生理盐水对照不出现自然凝集，能使菌凝于管底成伞状，上清半透明者判为++，以能使菌呈++凝集的血清最高稀释度判为血清凝集效价。第二份血清效价比第一份血清增长4倍或以上者有诊断意义。
2.2.2杀弧菌抗体检测 于经洗涤处理、无水乙醇浸泡和紫外灯照射灭菌的微量培养板或4×10孔聚苯乙烯塑料板用微量加液滴管每孔加入l滴(0.225m1)灭菌磷酸盐缓冲盐水PBS或生理盐水，再将待测灭活血清l滴(0.025m1)加入每排的第l孔，自第1孔开始做连续对倍稀释至第l0孔。每孔稀释血清加入补体指示菌悬液l滴，加盖，在微型振荡器上振荡l～2分钟，置37℃水浴箱孵育30分钟。加入含0.01％TIC的营养肉汤0.15 ml(2大滴)，混匀后，继续置37％水浴箱孵育4小时。观察结果，以孔内无颜色变化的血清最高稀释度为被检测标本的杀弧菌抗体滴度，第二份血清效价比第一份血清升高8倍或以上者有诊断意义。
2.3 快速辅助诊断
2.3.1制动试验 急性患者的水样便中含大量弧菌。取1滴滴在玻片上，直接镜检可见具有流星状动力的细菌，当加入l滴Ol群霍乱免疫血清后，运动停止，凝集成块。根据这种特殊动力和制动试验，可在几分钟之内做出初步诊断。
2.3.2免疫荧光菌球法 将水样、食品或粪便的增菌培养物接种于含有Ol群或0139群霍乱弧菌荧光抗体的蛋白胨水中，于37℃培养4～6小时，在荧光显微镜下观察，或将标本与荧光抗体混合做离心沉淀后取沉渣在镜下观察。出现一定形态结构的荧光菌球者，即为菌球阳性，挑取菌球做细菌分离。本法尤适于外环境标本的检验。
2.3.3 SPA协同凝集试验 将粪便标本接种于增菌液(碱性蛋白胨水基础上加0.1％蔗糖与0.5％明胶，pH为8.8～9.0)，37℃培育6～8小时。取增菌液与SPA诊断液做玻片凝集，出现(++)凝集时，即取增菌液在酒精上加热煮沸后再做一次凝集，以排除假阳性，如仍能呈现(++)凝集时，可作初诊报告，同时挑玻片上未经加热的凝集块，划种琼脂平皿进行分离，检出霍乱弧菌即作确诊报告。
【参考文献】
[1]刘瑾红.临床细菌学检验的质量控制体会[J].医学综述, 2013,19(16).
[2]柳振华,宋来春.临床细菌学检验在医院感染检测中的应用综述[J].中外医学研究,2010,08(17).
论文作者:刘琳
论文发表刊物:《心理医生》2016年1期
论文发表时间:2016/7/26
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