吴昊1 刘万里1，2 陈昱倩1 杨璐1 孙刚1 孙蓉1 王光铭1
1.南京市中西医结合医院，江苏 南京210014；2.南京中医药大学，江苏 南京2100
摘要：目的：以奥美拉唑为对照，观察降逆汤对大鼠反流性食管炎模型TNF-α、胃泌素及PCNA的影响。方法：采用不全幽门缝扎+食管下括约肌切开术制备大鼠反流性食管炎模型，并随机分为治疗1组、治疗2组（高剂量组、中剂量组、低剂量组）、正常对照组、空白模型对照组、阳性治疗组，治疗3周后处死大鼠，测定大鼠食管PH值及黏膜病变情况，取大鼠腹主动脉血及食管标本，测定大鼠血浆TNF-α、胃泌素、PCNA水平。结果：降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著降低RE大鼠模型食管黏膜炎症积分、食管内PH、血浆TNF-α水平及PCNA水平，降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著增高大鼠RE模型血清胃泌素水平。结论：降逆汤对反流性食管炎模型大鼠具有治疗作用，其抑制TNF-α、PCNA表达、增加胃泌素水平，抑制食管黏膜损伤、调节LES运动可能是其作用机制的一部分。
关键词：降逆汤；反流性食管炎；TNF-α；胃泌素；PCNA
反流性食管炎（reflux esophagitis，RE）是一种常见的消化道动力障碍性疾病，是胃和（或）十二指肠内容物反流入食管而引起的食管黏膜病变，属于祖国医学“吐酸”、“噎膈”等范畴。内镜下表现为食管黏膜充血、水肿、糜烂。临床主要表现为泛酸、烧心、胸骨后疼痛、吞咽痛或咽下梗阻感等，本病在我国呈逐年上升趋势[1]，且本病症状复杂，复发率高，具体发病机制不完全明确[2-5]。我们总结本病病机乃肝胃不和，胃失和降；根据这一病机特点自拟了降逆汤治疗本病，取得了较好的临床疗效[6-7]。本研究通过临床疗效评估、动物体内实验两部分研究，观察胃泌素、肿瘤坏死因子-α、增殖细胞核抗原、胃酸检测等指标变化，以阐明降逆汤抗反流，干预RE的可能作用机制。
材料与方法
一、实验材料
1．实验动物：健康雄性wistar大鼠，体重（200±20）g，由南京市中西医结合医院药理实验室实验动物中心提供，许可证号：SCXK（苏）2015－0004。
2．实验药物：降逆汤（黄连、吴茱萸、竹茹、枳壳、桔梗、乌贼骨、大贝母、白芨等）购自江苏省医药公司，生产批号均为20151201。奥美拉唑肠溶胶囊购自常州四药制药有限公司，生产批号：20151112。
3．实验试剂：兔抗TNF-α多克隆抗体（Cell Signaling公司）、PCNA多克隆抗体（abcam公司）等。
4．实验仪器：NSA—Ⅲ型SS32型冷冻离心机，7060全自动生化分析仪，FACC Calibur流式细胞仪，PH值测定仪（sartorius公司）等。
二、实验方法
1．动物分组及造模：将90只Wistar大鼠于术前24小时禁食不禁水。行不全幽门缝扎+食管下括约肌切开术：正中腹切口，用消毒针由胃体部位穿刺入胃并通过幽门至十二指肠端，避开血管，缝扎消毒针外部剩余幽门，缝扎完毕后，将针抽出，缝合胃部穿刺点，之后于食管胃交界处纵行切开食管下括约肌约0.5cm，分离至粘膜层完全暴露于视野中。术后3周造模完成。大鼠随机分为治疗1组、治疗2组（高剂量组、中剂量组、低剂量组），空白模型对照组，阳性对照组、正常对照组，每组10只，常规饲养24h后给药。
2．药物制备及干预：造模24h后，治疗1组：（高剂量组433g/L、中剂量组217g/L、低剂量组108g/L）降逆汤联合奥美拉唑0.067g/L灌胃；治疗2组：（高剂量组433g/L、中剂量组217g/L、低剂量组108g/L）降逆汤灌胃；正常对照组：给予生理盐水灌胃；空白模型对照组：给予生理盐水灌胃；阳性对照组：给予奥美拉唑0.13 g/L灌胃。按10ml/kg给药，每天一次，连续给药3周。
3．标本留取：末次给药24h后，断髓处死大鼠，取下食管组织。
4．观察指标：
1）一般状态观察：各组大鼠体重、精神状态及活动情况。
2）道黏膜肉眼表现：处死后取食管并纵行剖开，清洗食管，观察大体表现并进行RE分级，比较治疗前后食道黏膜变化情况（表1）。
3）食管pH值测定：将各组大鼠麻醉后剖腹，将pH记录仪pH电极插入胃一食管交界点以上1cm食管黏膜处读取并记录pH值。
4）测定血浆TNF-α、胃泌素、PCNA。
三、统计学处理
应用SPSS15.0统计软件。剂量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析，不符合正态分布及方差齐性的采用秩和检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义。
四、结果
1．一般状态观察：各组大鼠造模后活动减低，进食减少，体重减轻，各组无明显差异（P＞0.05），予对应药物治疗后，治疗1组高剂量组、中剂量组、低剂量组）、治疗2组（高剂量组、中剂量组、低剂量组）、阳性对照组大鼠进食增多，活动频繁，体重未明显增加（P＞0.05）。
2.食道黏膜肉眼表现（表2）：
P空白模型对照组、正常对照与各组对比P＜0.05，治疗1高组治疗1低组、治疗1中组与阳性对照组、阳性对照组相比P＜0.05
7.总结
降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著降低RE大鼠模型食管黏膜炎症积分，且各治疗方案疗效无差异；降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著降低RE大鼠模型食管内PH，且降逆汤高剂量联合奥美拉唑与单独服用奥美拉唑相比改善具有统计学差异；降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著降低大鼠RE模型血浆TNF-α水平，且降逆汤高剂量联合奥美拉唑与单独服用奥美拉唑相比改善具有统计学差异；降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著增高大鼠RE模型血清胃泌素水平，且降逆汤高剂量联合奥美拉唑、降逆汤低剂量联合奥美拉唑与单独服用奥美拉唑相比具有统计学差异；降逆汤高中低剂量、降逆汤高中低剂量联合奥美拉唑均能显著降低大鼠RE模型PCNA的表达，且降逆汤高剂量联合奥美拉唑、降逆汤中剂量联合奥美拉唑、降逆汤低剂量联合奥美拉唑与单独服用奥美拉唑相比改善具有统计学差异；
讨论
近来研究表明，胃泌素具有生理性调节LES运动的作用[8]。TNF-α又称分化诱导因子，对淋巴细胞有刺激作用，在食道中能介导黏膜损伤作用，参与GERD发病。PCNA是目前反应组织细胞增殖功能的指标之一，其过度表达是细胞增殖的重要标志。有研究表明[9]，正常食管黏膜组织中PCNA阳性反应很弱，但食管黏膜在刺激物的作用下，增生细胞不断分化、增殖并随着炎症的加重，表达率也逐渐地增加，PCNA的阳性表达在反流性食管炎中具有重要的作用，对RE患者的疗效和预后估价具有重要意义[10-11]
我们总结出本病的基本病机乃肝胃不和，胃失和降；我们根据这一病机特点，自拟了降逆汤治疗本病，取得了较好的临床疗效。方中黄连泻心火，又善清胃降逆，制酸止呕；吴茱萸入肝经，调和肝胃，降逆止呕；竹茹清热降逆止呕；枳壳疏肝理气，桔梗引气上行，两者升降相因，有助于气血运行。乌贼骨、大贝母制酸和胃止痛。白及降逆止呕，收敛消肿。现代药理研究表明黄连具有抗菌、抗病毒及解痉、调整胃肠平滑肌收缩等功能[12]，吴茱萸中所含的吴茱萸苦素为苦味质，有苦味健胃作用，其所含的挥发油又具有芳香健胃作用[13]。乌贼骨所含的胶质成分可在糜烂或溃疡面形成保护膜，有利于食管粘膜的修复和溃疡面的愈合[14]，白芨降逆止呕，收敛消肿，抑菌止血，具有高度粘性，含有胶体状成分，能在受损黏膜表面形成一层保护膜，可防护粘膜受损[15]，与乌贼骨配合，可使药液粘滞，覆于粘膜，增强屏障作用[16]。诸药合用，共奏疏肝健脾、和胃降逆、抑酸护膜之功。且本方临床应用多年，可有效控制RE临床症状，并显著减少复发，现已成为我院科内协定方。
本研究采用现代生物学技术观察降逆汤对大鼠反流性食管炎模型胃泌素、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、增殖细胞核抗原（PCNA）、胃酸检测等指标。研究证明降逆汤能有效治疗反流性食管炎，其机制可能与抑制TNF-α、PCNA表达、增加胃泌素水平，从而抑制食管黏膜损伤、调节LES运动有关。
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论文作者:吴昊1,刘万里1，2,陈昱倩1,杨璐1,孙刚1,孙
论文发表刊物:《健康世界》2018年19期
论文发表时间:2018/11/20
标签：食管论文; 剂量论文; 大鼠论文; 黏膜论文; 奥美论文; 低剂量论文; 模型论文; 《健康世界》2018年19期论文;