长沙市疾病预防控制中心 湖南长沙 410001
【摘 要】对透析液内毒素进行检测。通过采集三甲医院和二级医院共14所医院的透析液278份，按照《中国药典》2015版第二部附录收载的细菌内毒素检查法的中浊度法进行检测。结果表明，278份透析液内毒素含量范围为0.3032～0.4523 EU/ml，含量平均值为0.3829 EU/ml，其中275份透析液细菌内毒素含量小于1.0 EU/ml，有2份透析液内毒素含量1.0~2.0EU/ml，有1份透析液内毒素含量大于2 EU/ml。结论：经对不同级别医院透析液内毒素检测结果比较表明，三甲医院与二级医院（去除不合格样品）检测结果之间差异无显著统计学意义。
【关键词】透析液；内毒素
Abstract：Within the dialysate endotoxin detection.By collecting a total of 14 hospitals dialysate 278 parts，according to the bacterial "Chinese Pharmacopoeia" 2015 edition of the second collection contains endotoxin test for turbidity method for detecting the top three hospitals and two hospitals.The results showed that，within 278 parts dialysate endotoxin content in the range of 0.3032 ~ 0.4523 EU / ml，the average content of 0.3926 EU / ml，of which there are 275 in the dialysate endotoxin content of <1.0 EU / ml，there are 2 parts dialysate endotoxin 1.0 ~ 2.0EU / ml，1 share of dialysate endotoxin content> 2 EU / ml；through different levels within the hospital dialysate endotoxin detection result of the comparison showed that the top three hospitals and two hospitals（removal of defective samples）detection results There was no significant difference between statistical significance.
Keywords：dialysate；endotoxin
1.概述
细菌内毒素，是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，可激活中性粒细胞等释放出内源性制热原，主要作用在体温调节中枢，从而引起发热。细菌内毒素是细菌死亡后的细胞壁残片，化学成分为蛋白质、脂多糖等，其中引起热原的主要为脂多糖。
随着近几年血液透析技术的发展，血液透析应用越来越广泛，在给患者带来益处的同时，也造成其他疾病的风险，比如细菌内毒素的超标，引起热原反应，进而造成严重的后果；再比如血液污染，造成血液病等。因此控制透析液的细菌内毒素成为评价透析液质量的一个重要方面。为了更好的对透析液细菌内毒素进行研究，我们对当地三甲医院（共8所医院）和二级医院（6所）的血液透析科的透析液内毒素进行检测。
2.透析液内毒素检测研究进展
2.1样品来源、试剂及仪器
本次检测标本采集时间为2015.5-2016.5期间，标本来自当地三甲医院和二级医院共14所医院，共采集透析液278份。
试剂及仪器：鲎试剂（湛江博康海洋生物有限公司）、MB-80微生物快递动态检测系统。
2.2样本采集
在透析液进口处采集透析液，透析操作进行后30min再采集样本，在特定的采集口进行采集。样品采集完成后，常规消毒，之后再冲洗1min，然后用5ml灭菌注射器吸取约3ml，注入专用采血管中（除内毒素），密封，贴好标签，待测。
2.3标准曲线建立
2.3.1 仪器
试验前，将MB-80微生物快递动态检测仪预热一段时间，升温至37℃。然后根据使用说明书，进入程序，进行相关参数设置（反应时间、预设透光度值等）。
2.3.2制备标准曲线
用标准细菌内毒素稀释成3个不同的浓度的溶液，相邻两个浓度的稀释倍数应小于10倍。取细菌内毒素标准品1支，加入1.0ml细菌内毒素检查用水，混合15 min，稀释配成：2.0EU/ml、0.25EU/ml、0.03EU/ml的反应溶液，备用。
2.3.3 制备鲎试剂
移液管准确吸取细菌内毒素检查用水1.5ml，沿瓶壁缓缓加入安瓿内，轻轻转动瓶壁，使内容物全部溶解（避免振摇）。取反应试管11支，按2.0EU/ml、0.25EU/ml、0.03EU/ml各浓度平行3管，阴性对照平行2管标记[1]。
2.4检测方法
细菌内毒素的检测方法药典规定有两种方法，一种是家兔法，一种是鲎试剂法。鲎试剂法中包含凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。本文采用鲎试剂法中的动态浊度法进行检测，用鲎试剂与样品中的细菌内毒素反应，测定不同时间的吸光度值，通过鲎试剂浊度变化情况，得到样品中细菌内毒素的含量。
2.5结果
2.5.1标准曲线测定
阴性对照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间[2]，标准曲线的相关系数r=09967，标准曲线成立。
2.5.1细菌内毒素检测结果
结果表明，278份透析液内毒素含量范围为0.3032~0.4523 EU/ml，含量平均值为0.3829 EU/ml，其中275份透析液细菌内毒素含量小于1.0 EU/ml，2份透析液细菌内毒素含量为1.0~2.0EU/ml，有1份透析液内毒素含量大于2 EU/ml。
2.5.2统计分析
经对不同级别医院透析液内毒素检测结果比较表明，三甲医院与二级医院（去除不合格样品）检测结果之间差异无显著统计学意义。
3.讨论
本次数据存在的异常，可能是透析液本身存在一定的问题。目前大部分血液透析单位没有健全的监管体系，也没有完整的监控过程，而透析液本身的程序较为复杂，设计的环节应尽量少，避免多环节造成污染。同时，现行法规标准太宽，违背实际要求，主要体现在透析用水的细菌内毒素控制限度高于透析液的细菌内毒素，这使得无法完成操作。其次原因可能是配制人员未经过系统的GMP培训，无菌意识薄弱，容易造成操作不当。进而造成污染[3]。最后可能原因是造成适宜细菌繁殖生长，导致污染现象严重。
从上述分析原因可知，很多环节均会引起透析液内毒素检测超标，为保证患者的使用，需要从事透析液各个环节的操作人员或医护人员严格按照相关的规定执行，才能避免出现不合格的情况。
透析液的采样过程中，影响质量的关键因素是送样时间、酒精消毒、送检密封状态等。在本次采集过程中，可能影响其质量的原因是送检时间的差异，由于检测仪器在三甲医院，因此二级医院的样品通过密封后，运送至三甲医院进行检测，运送过程由于交通拥堵浪费了时间，使得部分先取样的供试液存储超过2h[2]。因此，在以后的监测过程中，尽量避免送检标本的送检时间延长与一次性注射器使用情况差等关键因素。
参考文献：
[1]韦群.通过内毒素检测控制透析用水及透析液质量的探讨[J].中国血液净化，2012，11（2）：104-106
[2]祝荣文，杨亦彬，刘永，尚会强，李列宽.常规内毒素检测对降低血液透析治疗风险的临床价值[J].中国血液净化，2015，14（9）：569-571
[3]秦瑾，冯忠军，李筱软，高伟，张进贵.透析液内毒素检测采样方法的探讨[J].河北医科大学学报，2010，31（8）：1002-1003
论文作者:罗美华（副主任技师）,肖姗（主管检验师）
论文发表刊物:《航空军医》2016年第18期
论文发表时间:2016/10/14
标签：内毒素论文; 细菌论文; 医院论文; 试剂论文; 含量论文; 浊度论文; 样品论文; 《航空军医》2016年第18期论文;