陈光忠, 罗炳德, 邹飞, 王斌, 万为人[1]2003年在《高温诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其信号转导机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过实验探讨高温所致神经元损伤发生机理,为热环境医学中防治高温致脑损伤提供实验依据和新的治疗切入点。方法:通过建立原代培养的SD大鼠乳鼠海马神经元高温损伤模型,应用LSCM、原位末端标记、DNA电泳分析、AO染色、免疫细胞化学及FCM等技术方法,从细胞超微结构改变、胞浆Ca~(2+)浓度变化、PKC激活、染色体DNA损伤及HSP70、Bcl-2蛋白表达等方面,集中研究了高温诱导海马神经细胞凋亡的分子机理、形态
陈光忠[2]2003年在《高温诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其信号转导机制研究》文中指出人体在高温环境下适应和耐受能力的研究历来受到国内外关注。它决定了人类与环境交互作用的过程中能否有效地适应环境，维持生存。从军事医学的角度看，更要求在高温野战条件下保持战斗能力。而中枢神经系统作为机体适应内外环境的高级调节中枢，在高温环境适应中具有重要的作用。因此，研究高温因素与中枢神经系统的相互作用，探索提高机体热适应能力的有效途径，对于提高热区作业人员和部队指战员的工作和战斗效率，减少中暑引起的非战斗减员，具有重要的意义。不少研究发现，热主要是通过皮肤感受器的传入冲动和温度升高的血液共同影响中枢神经系统，引起一系列的神经内分泌及免疫功能改变，从而导致脑功能的改变，在行为学上表现为脑力作业时认知能力下降，反应速度降低，工作错误率增加等，严重影响人们的生活、工作甚至健康和生命。目前有关高温致神经系统发育畸形的研究国外有较多报道，但对于高温作用后神经元的应激反应研究很少，故探讨高温对中枢神经系统的影响具有重要的意义。而海马作为大脑边缘叶的重要组成部分，与认知功能有密切的关系，是对学习和记忆功能非常重要的脑区。因此研究高温对海马神经元的影响及其作用机制对寻找有效拮抗中枢神经系统高温损害的措施具有重要的理论及现实意义。 近年来研究表明，无论是在低等的的模式生物(如线虫、果蝇等)还是在高等的脊椎动物(如大鼠、恒河猴等)，应激导致细胞死亡的主要方式是通过诱导细胞凋亡而产生的。细胞凋亡是生物进化过程中形成的一种调节生命活动过程的重要机制，凋亡的发生是组织器官正常发育与免疫功能的形成所必需的，另一方面，过度的凋亡是机体受到环境有害刺激因素(包括高温、缺氧、电离辐射等)作用产生损伤的主要机制之一。关于中枢神经系统损伤的缺血缺氧损伤机制已有较多研究报道，包括很多假说，如：兴奋性氨基酸毒性学说、单胺神经递质毒性学说、钙失调学说、线粒体假说、自由基学说、NO学说等等。目前多数学者认为是多种因素共同作用导致了中枢神经细胞的死亡。研究证明蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、Bc1-2及Ca~(2+)在应激诱导的中枢神经细胞凋亡中具有重要的作用。PKC广泛存在于机体的组织细胞中，可分布于胞膜和胞质中，己发现哺乳动物中至少存在12种亚型，其分子实质是一组广泛分布具有单一肤链结构的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。PKC激活后，通过磷酸化众多位于膜上和胞浆内的底物蛋白而发挥广泛的生理作用，调节细胞的代谢和生理功能。关于PKC促进和抑制细胞凋亡的文献均见报道，但其在高温诱导的海马神经细胞损伤中的作用尚未见报道。 Bd一2是自B细胞淋巴瘤中发现的第一个抑制细胞凋亡的原癌基因，已发现Bcl一2在胚胎神经系统的整个发育过程中以及幼鼠的神经系统中均有表达。在脑发育的细胞程序化死亡阶段，Bd一2表达维持在较高水平，然后随着年龄逐渐降低。为证实Bd一2抑制细胞凋亡的作用，Mo一toy~等用胚胎干细胞同源基因重组技术培育了Bd一2缺陷鼠，结果发现Bd一2缺陷鼠在鼠胚脑和脊髓中有广泛的神经元死亡，与其它许多原癌基因促进细胞过度增殖不同，Bcl一2能抑制程序化细胞死亡，延长细胞存活。 虽然对于PKc、Bd一2及c扩+参与细胞保护作用的机理有了基本的认识，但对于高温诱导海马神经元的凋亡及导致神经元凋亡的相关信号转导机理尚未完全阐明，仍有待于进一步探讨。 本课题建立了离体原代培养的SD大鼠乳鼠海马神经细胞高温损伤模型，应用激光共聚焦显微镜技术、原位末端标记、DNA电泳分析、荧光染色、免疫细胞化学及流式细胞术等现代分子生物学的方法，从细胞超微结构的改变、胞浆Ca2+浓度的变化、PKc的激活、染色体DNA损伤及HSP7o、Bd一2蛋白表达改变等方面，集中研究了高温诱导海马神经细胞凋亡的分子机理、形态学改变、生物化学改变及可能的调控环节。旨在实验探讨高温所致神经元损伤发生机理的同时，为热环境医学中防治高温致脑损伤提供实验依据和新的治疗切入点。本课题研究的主要结果和结论包括如下几方面: 1.高温致海马神经元损伤的主要方式是诱导细胞凋亡。在本实验观察的40℃及42℃高温作用后24h内，细胞凋亡是主要的死亡方式，表现为细胞存活率下降、凋亡率增高、细胞出现典型的凋亡形态学特征、透射电镜可见核内染色质浓缩密集呈新月形或块状、染色体DNA出现特征性的片段化表现，且随温度的高低、作用时间的长短不同表现为不同的时程和损伤程度。 2.高温可上调海马神经元袭达直SP76波Bcl一2蛋白。两者表达变化趋势一致，Bcl一2表达高峰稍早于HSP70，免疫组化结果显示至24h，两种蛋白表达仍然较高。在高温诱导的海马神经细胞凋亡中，HSP70蛋白具有重要的保护作用;而Bcl一2则可以通过多条途径抑制细胞的凋亡。 3.实验结果表明Ca2+超载是高温诱导的海马神经细胞凋亡时的一个早期事件，高温处理后30:进行c扩十扫描即可发现其荧光强度明显增强，说明c扩十超载可能是系列凋亡因子激活的启动子。 4.通过PKC抑制剂CTC的应用，反向说明PKC在高
张霞[3]2012年在《黄芪注射液抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡的JNK通路研究》文中进行了进一步梳理脑血管疾病是临床常见病、多发病，是叁大致死疾病之一，严重危害人类的健康和生命。随着人口增加及老龄化程度加重，其发病率、病死率及致残率呈逐年上升趋势。其中缺血性脑血管病占很大的比例，脑缺血治疗的关键是迅速恢复脑血液灌注，保持血流通畅。但恢复血流灌注后脑损伤仍可能进一步加重，即存在脑缺血再灌注损伤。缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)是指遭受一定时间缺血的组织恢复血供后,组织损伤程度加重的病理现象。脑缺血再灌注损伤危害极大，其损伤机制涉及众多复杂环节和因素，是多年来科学家一直关注的重点。随着对脑缺血损伤机制研究的日益深入,细胞凋亡在脑缺血再灌注中的作用引起关注。研究表明,神经细胞凋亡是缺血性脑损伤后细胞死亡的重要形式。细胞凋亡受多种相关基因及其蛋白调控，其中天冬半胱氨酸蛋白酶(Caspase)与细胞凋亡关系最密切。黄芪注射液为临床治疗缺血再灌注性脑血管病的常用药物，可抑制细胞凋亡的发生，但具体通过何种信号转导通路抑制细胞凋亡，其机制尚未完全阐明。本课题组前期实验证实，黄芪注射液可抑制体外培养的缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡，并证实黄芪注射液通过抑制JNK通路发挥该作用。但是，在体内情况下，黄芪注射液是否能够抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡，是否能抑制JNK通路，尚属未知。本课题通过观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3表达的影响，探讨黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡的抑制作用；并分别应用JNK的激动剂和抑制剂，探讨黄芪注射液的抗凋亡作用是否通过抑制JNK通路来实现。第一部分黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响。目的:观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响。方法:选取成年雄性SD大鼠，随机分为4组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注组)、黄芪注射液组、黄芪注射液溶剂对照组。采用四血管阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型，黄芪注射液组和黄芪注射溶剂对照组在缺血前30min分别给予黄芪注射液和无菌去离子水(6ml/kg)，再灌注24小时（hours,h）后采用HE及TUNEL染色观察大鼠海马CA1区神经元病理学变化。结果：HE染色：模型组大鼠海马神经出现明显的病理变化，海马神经细胞排列欠规则，界限不清楚，正常细胞结构消失，胞核区域浓染，出现凝固性坏死，细胞脱失明显，与假手术组相比大鼠海马CA1区神经元数目明显减少(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液组大鼠海马CA1区神经元数目明显增多(P<0.05)，而溶剂对照组与模型组相比则无明显变化(P>0.05)。TUNEL染色法实验结果显示：与假手术组相比，模型组凋亡细胞显着增多(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液组的凋亡细胞显着减少(P<0.05)，而黄芪注射液溶剂对照组与之相比则无统计学差异(P>0.05)。小结：黄芪注射液可减少大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的丢失，减轻细胞凋亡。第二部分黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3表达的影响目的：观察黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡相关蛋白Caspase-3及其mRNA表达的影响。方法:选用成年雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注)、黄芪注射液组和黄芪注射液溶剂对照组。造模方法同第一部分，除假手术组外，各组均进行脑缺血0.5h。分别于再灌注0h、0.5h、2h、6h、24h、72h和120h后采用组织免疫化学法、 Western blot法检测海马神经元Caspase-3蛋白的表达， Real-Time PCR法检测海马神经元Caspase-3mRNA的表达。结果：组织免疫化学结果显示：假手术组大鼠海马CA1区神经元核规整，有少许胞浆黄染；模型组大鼠海马CA1区神经元核皱缩，染色质边集，大量胞浆黄染，胞核内有少许黄色颗粒，除0h，0.5h外，海马CA1区神经元Caspase-3蛋白阳性表达在各个时间点均比假手术组明显增多(P<0.05)；黄芪注射液溶剂对照组海马CA1区神经元形态变化和海马CA1区神经元Caspase-3阳性表达与模型组一致(P>0.05)；黄芪注射液组大鼠海马CA1区神经细胞有轻微核皱缩，可见部分神经元胞浆黄染，除0h,0.5h时间点之外，海马神经元Caspase-3蛋白阳性表达在相对应时间点均比模型组明显减低(P<0.05)。随着再灌注时间的延长，模型组、黄芪注射液溶剂对照组及黄芪注射液组均可见到阳性神经元胞质中黄色颗粒逐渐增多，于24h达到高峰。Western blot和Real-Time PCR结果显示:与假手术组相比，除0h和0.5h外，模型组Caspase-3蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)，再灌注24h后Caspase-3蛋白及mRNA表达达到高峰。与模型组相比，黄芪注射液组除0h和0.5h外的各个时间点Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05)；而黄芪注射液溶剂对照组Caspase-3蛋白及mRNA表达与模型组相比则无显着变化(P>0.05)。小结：黄芪注射液可抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元Caspase-3蛋白及mRNA的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注引起的海马神经元凋亡。第叁部分JNK抑制剂和激动剂对脑缺血再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响目的：观察JNK抑制剂和激动剂对脑缺血再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响。方法：选用成年雄性SD大鼠随机分为7组：假手术组、模型组(脑缺血再灌注)、黄芪注射液溶剂对照组、黄芪注射液组、JNK抑制剂组、JNK激动剂组和DMSO组(药物溶剂对照组)。造模方法同第二部分。再灌注24h后采用细胞免疫化学法、Western blot法和Real-Time PCR法检测海马神经元Caspase-3的表达。结果：组织免疫化学结果显示：假手术组大鼠海马神经元核膜完整，核大而圆，有1-2核仁，有少许细胞胞浆黄染；模型组大鼠海马神经元胞核皱缩，染色质边集，大量细胞胞浆黄染，胞核内有少许黄色颗粒，海马神经细胞Caspase-3蛋白阳性表达比假手术组明显增多(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液溶剂对照组、DMSO组的Caspase-3蛋白阳性表达无明显变化(P>0.05)，而黄芪注射液组和SP600125组的Caspase-3蛋白阳性表达均明显降低(P<0.05)，但此两组之间无明显差别(P>0.05)，同时JNK激动剂组的Caspase-3蛋白阳性表达则明显增加(P<0.05)。Western blot及Real-TimePCR结果显示:与假手术组相比，模型组Caspase-3蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)；与模型组相比，黄芪注射液溶剂对照组、DMSO组的Caspase-3蛋白及mRNA表达无明显变化(P>0.05)，而黄芪注射液组、SP600125组的Caspase-3蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)，但此两组之间无明显差别(P>0.05)，同时JNK激动剂组的Caspase-3蛋白及mRNA表达则明显增加(P<0.05)。小结：黄芪注射液可通过抑制JNK信号通路的激活而减少Caspase-3的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元的凋亡。结论：1黄芪注射液可减少大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的丢失，减轻细胞凋亡。2黄芪注射液可抑制大鼠脑缺血再灌注后海马神经元JNK信号通路的激活而抑制Caspase-3蛋白及mRNA的表达，从而抑制大鼠脑缺血再灌注引起的海马神经元凋亡。
牛利[4]2016年在《高糖高脂膳食所致的IETM诱发SAD的探讨》文中认为第一部分高糖高脂膳食所致的IETM诱发大鼠MS目的:探讨高糖高脂膳食所伴发的IETM在大鼠MS中的作用。方法:48只雄性SD大鼠适应性喂养1周,随机分为对照组(NC)和模型组(HSHF),每组24只,NC组喂以正常膳食,HSHF组喂以高糖高脂膳食(0.25%cholic acid+1%cholesterol+10%sucrose+20%lard+70%normal fodder)。每组动物再随机分为叁组,NC:6月,9月,12月,每组8只;HSHF:6月,9月,12月,每组8只。各组动物分别于实验第6月末、第9月末、第12月末进行相应的处理:在麻醉状态下,腹主动脉取血并分离血浆;无菌条件下取肾周和附睾脂肪组织称重;断头处死,迅速取脑,于冰上分离两侧海马及皮层,一半置于10%的中性福尔马林固定,常规制片备用;一半铝箔纸包好液氮速冻,随后放入-80℃冰箱备用。1.检测血浆中MS相关指标的变化采用酶法测定血浆甘油叁酯(TG)、甘油二酯(DAG)、游离脂肪酸(FFA)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TCH)、血糖(FPG)及胰岛素(FIN)水平。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),公式为:HOMA-IR=FPG×FIN/22.5。2.检测血浆中炎症相关因子的变化采用鲎试剂显色法检测血浆中内毒素(LPS)水平;采用ELISA试剂盒检测血浆中TNF-α、IL-6及IL-1的变化。结果:实验期间,NC及HSHF组大鼠均状况良好,各阶段HSHF组大鼠较NC组大鼠体重及Lee’s指数明显增加(P<0.05),内脏脂肪占体重百分比也明显增加(P<0.05),提示HSHF组大鼠出现肥胖。1.血浆中MS相关指标的变化HSHF组大鼠各阶段血浆中TG、TCH、DG、FFA、LDL、FPG、FIN水平均明显升高(P<0.05),HDL水平则显着降低(P<0.05)。提示经过高糖高脂膳食喂养后,动物出现了糖代谢紊乱及异常脂蛋白血症。2.血浆LPS及促炎因子的变化HSHF组大鼠血浆LPS在6月就有明显的升高,且在整个实验过程中,LPS一直处于高水平状态,与NC组相比差异具有显着性(P<0.001);TNF-α、IL-1及IL-6水平在不同阶段较NC组也有不同程度的升高(P<0.05)。结论:1.高糖高脂膳食可诱导大鼠出现肥胖、糖耐量异常、异常脂血症等,提示动物发生了MS。2.高糖高脂膳食诱导的IETM所致的慢性低度炎症、脂质异地蓄积与IR可能是MS发生的基础。第二部分IETM在MS相关疾病AD发生发展中的作用研究目的:探讨高糖高脂膳食诱发的IETM是否会导致大鼠AD样改变及其在此过程中所起的作用。方法:动物分组与处理同实验一。1.检测脑组织中AD标志性蛋白的水平采用Western blot方法检测海马Tau蛋白磷酸化水平;采用ELISA试剂盒检测皮层及海马Aβ含量。2.脑组织病理检测皮层和海马H&E染色,观察脑组织病理学变化。3.AD相关基因检测采用PCR法检测脑组织中AD相关基因BACE、APOE4、IDEm RNA的表达。4.脑组织炎症相关指标的检测ELISA法检测脑组织中DAG、FFA、TNF-α、IL-6、IL-1水平的变化;血浆LPS水平检测;ELISA检测血浆中MCP-1的变化;免疫组化法检测脑组织CD68表达;免疫荧光法检测小胶质细胞OX-42的表达。采用IPP6.0软件分析CD68及OX-42免疫反应阳性细胞数。5.脑组织胰岛素抵抗水平检测Western blot法检测中枢胰岛素信号转导相关蛋白JNK、PI-3K、AKT、GLUT、GSK-3β等水平。6.脑细胞凋亡水平检测脑细胞凋亡采用TUNEL试剂盒,原位杂交二步法进行检测。采用IPP6.0软件分析细胞凋亡率。结果:1.脑组织中AD标志性蛋白的变化HSHF组大鼠海马Tau蛋白199位点的过度磷酸化在6月就表达增加,一直持续到12月(P<0.01);Tau蛋白396位点的磷酸化在6月时表达不是十分明显,但9月、12月均异常升高(P<0.01);Tau蛋白212位点的过度磷酸化随着时间的推移表达逐渐增加,其较NC组相比,差异具有显着性。HSHF组大鼠皮层及海马Aβ含量在各个阶段均明显升高,其差异具有显着性(P<0.05)。2.脑组织病理学变化HSHF组大鼠脑组织皮层及海马在6月均出现少量炎细胞的浸润,小胶质细胞及淋巴细胞增生,后逐渐加重,持续到12月炎性细胞浸润最为明显。3.A D相关基因变化HSHF组大鼠海马组织IDE m RNA表达随着时间的推移逐渐降低,到12月表达明显减少;而APOE4、BACE基因m RNA表达均较NC组明显升高,其差异具有统计学意义。4.脑组织炎症相关指标的变化HSHF组大鼠6月、9月、12月脑组织DAG、FFA、TNF-α、IL-6、IL-1均显着升高(P<0.001,P<0.05);血浆中LPS、MCP-1等均明显升高,其差异具有统计学意义(P<0.001);脑组织免疫组化结果显示,HSHF组大鼠在各个阶段CD68表达均明显增加;小胶质细胞被激活,随着时间的推移活化程度逐渐加重。5.脑组织胰岛素抵抗状态的改变HSHF组大鼠脑组织海马p-JNK、p-PI-3K、p-AKT、GLUT蛋白含量在各个阶段均较NC组明显降低,且随着时间的推移降低更加明显。GSK-3β的含量则表现为随着时间的推移逐渐升高。6.脑细胞凋亡凋亡结果显示,随着高糖高脂膳食喂养时间的延长,HSHF组大鼠脑组织中会出现大量的细胞凋亡,其较NC组相比,具有统计学意义。结论:1.高糖高脂膳食所致模型组大鼠发生MS时始终伴有IETM,且其脑组织可表现出AD的特征性改变,成功构建了MS相关AD的动物模型。2.IETM在引起外周慢性低度炎症、脂质异地蓄积及胰岛素抵抗的同时也会导致脑组织出现同样的改变。3.AD的发生与脑内慢性炎症、脂质蓄积及胰岛素抵抗有密切关系。第叁部分IETM启动MS相关疾病AD的基本机制目的:探讨IETM启动MS相关疾病AD的基本机制。方法:动物分组与处理同实验一。1.血浆中氧化应激相关因子的检测ELISA法检测血浆中丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)的含量。2.免疫荧光法检测脑组织活性氧水平取出液氮冻存的脑组织OCT包埋制备成冰冻块,用冰冻切片机以5um厚度连续切片,将DHE工作液滴加于冰冻切片上,荧光显微镜下观察脑组织ROS水平。3.Western blot法检测内质网应激相关蛋白的表达取冻存的脑组织Western blot法检测GRP78、CHOP蛋白的表达。4.ELISA测定脑组织匀浆FFA、DAG的含量。结果:1.HSHF组大鼠血浆MDA水平与NC组相比显着升高,且脑组织中ROS含量明显增加,随着时间的推移,ROS增加更为明显。2.Western blot检测GRP78与CHOP,GRP78结果显示HSHF组在6月,9月逐渐升高,9月达到最大值,12月有所下降但仍高于NC组;CHOP在NC组几乎不表达,HSHF组随着时间的推移表达逐渐增加,到12月达到最大值。3.HSHF组动物脑组织匀浆FFA、DAG含量明显增高,提示脑组织出现脂质异地蓄积,进而导致脂毒激活了内质网应激。结论:1.IETM所致的氧化应激与内质网应激可能是所有代谢性疾病发生的基本机制。2.AD的发生机制与MS发生机制基本一致,可以初步认为AD也属于MS相关疾病。综上所述,本研究得出以下结论:1.高糖高脂膳食喂养大鼠可伴随IETM的发生,且程度逐渐加重;IETM可导致MS相关疾病的发生。2.IETM所致慢性低度炎症、脂质异地蓄积、IR是MS与AD发病的共同机制,可以初步认为AD也属于MS相关疾病。3.IETM所致的氧化应激与内质网应激可能是所有代谢性疾病的基本机制。
鲍娟[5]2008年在《GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及其抗细胞凋亡机制的研究》文中认为第一章GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及对其行为组织学的影响背景与目的阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以进行性记忆力减退、认知功能障碍为特征的中枢神经系统变性疾病,病因和发病机制至今尚未完全清楚。近年研究发现,AD脑内存在热休克蛋白70(heat shock protein 70)表达变化,并和神经元的存活有关联。HSP是细胞受到各种刺激时产生的高度保守的具有重要生理功能的多肽类蛋白质分子家族,可通过分子伴侣作用调节蛋白质的正常结构功能及抗氧化、抗凋亡等作用提高细胞对应激原的耐受,保护细胞抗损伤。目前已证实,抗溃疡药物Geranylgeranylacetone(GGA)可明显诱导大鼠胃肠、肝脏、心脏、视网膜等多种器官组织甚至中枢神经系统的HSP70表达。国外已将其应用于脑血管病动物模型,发现可明显诱导脑内HSP70表达而发挥神经保护作用。现国内外均尚未有将GGA用于AD研究的报道。我们通过实验建立AD大鼠模型,观察模型大鼠以及GGA灌胃干预后其海马HSP70表达的情况和行为组织学改变,研究GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用并探讨可能机制,为临床治疗AD提供新的理论基础和方法。方法健康雄性SD大鼠144只随机分为对照组、模型组、GGA干预组,每组各48只,其中,每组又分为术后1天、术后7天、术后14天和术后21天4个时间点,各时间点每组12只大鼠。模型组和GGA干预组大鼠双侧海马注射Aβ_(1-42),对照组注射等量溶媒。术后大鼠清醒后GGA组即予GGA800mg/kg/d灌胃,余两组予等量生理盐水灌胃,持续21天。术前及术后7天、14天、21天Y迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;各时间点行为学测试结束后处死动物,每组取6只大鼠脑组织冰冻切片行HE染色,观察海马CA1区神经元形态改变;刚果红染色观察Aβ的沉积;每组再各取6只用RT-PCR和Western-blot测定各时间点大鼠海马HSP70基因和蛋白表达变化。结果1.术前各组大鼠获得记忆所需电击次数比较差异无统计学意义(P>0.05),随时间的推移,模型组大鼠达到学会标准所需电击次数逐渐增加,术后14天与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),术后21天模型组大鼠学习记忆能力下降最显着(P<0.01)。GGA组大鼠术后14天、21天达到学会标准所需电击次数虽较对照组仍有增加,但较模型组明显减少,学习记忆能力明显改善(P<0.05)。2.对照组大鼠海马CA1区细胞排列整齐、均匀,细胞结构完整;模型组大鼠海马CA1区细胞排列不均匀、结构紊乱不整齐、不清楚,神经元减少,至术后21天病理改变最显着;GGA组大鼠不同时间点CA1区细胞较模型组排列相对整齐、均匀,结构也较其完整,神经元减少有所改善。3.模型组大鼠脑组织切片刚果红染色,在海马CA1区与齿状回之间可见染色阳性的物质,周围小胶质细胞相对较聚集,可能为Aβ沉积。对照组大鼠脑组织切片刚果红染色未见Aβ沉积,GGA干预组切片亦未发现明显的Aβ沉积。4.模型组和GGA组大鼠术后1天海马HSP70mRNA表达和蛋白表达和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);术后7天、14天、21天模型组大鼠海马HSP70mRNA和蛋白表达较对照组逐步减少,差异具统计学意义(P<0.05);术后各相应时间点GGA组大鼠海马HSP70mRNA和蛋白表达均较模型组明显增加(P<0.05),其中14天、21天HSP70mRNA增加显着(P<0.01)。对照组大鼠海马各时间点HSP70mRNA和蛋白表达无明显变化。结论1.AD大鼠海马HSP70表达呈持续低水平,而HSP70的低表达使其神经保护作用减弱,这可能参与了AD的病理发展过程。2.GGA诱导的AD大鼠海马HSP70表达上调可能通过抑制Aβ毒性,减轻神经元损害,增加神经元的存活,从而改善AD大鼠的学习记忆能力。第二章GGA诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及对细胞凋亡和凋亡途径相关因子cytochrome C、caspase-9、FADD、caspase-8表达的影响背景与目的海马、皮层区域为主的神经元大量丢失是AD的另一主要病理特征。对AD的研究表明,AD患者认知功能损害与这种海马、大脑皮质神经元的丢失密切相关,而神经元丢失可能主要是由Aβ毒性作用诱导的细胞凋亡引起。caspases途径的激活在触发和执行神经元凋亡中起主要作用,其触发机制包括线粒体途径和胞膜的死亡受体信号通道。已有研究表明HSP70在抗凋亡中发挥了重要作用,但在对其具体抗凋亡机制,特别是对死亡受体途径的作用研究结果不一,甚至矛盾。目前对HSP70在AD活体中的抗凋亡研究未见报道。本研究通过建立AD大鼠模型,观察AD模型大鼠以及GGA灌胃干预后海马HSP70表达变化和神经元凋亡的关系,以及海马组织线粒体凋亡途径和死亡受体凋亡途径相关因子cytochrome C、caspase-9、FADD、caspase-8的表达变化,探讨GGA诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其在AD中的抗凋亡机制,为临床治疗AD提供新的理论基础和方法。方法经Y迷宫筛选的健康雄性SD大鼠36只随机分为对照组、模型组、GGA干预组,每组各12只。模型组和GGA干预组大鼠双侧海马注射Aβ_(1-42),对照组注射等量溶媒。术后大鼠清醒后GGA组予GGA800mg/kg/d灌胃,余两组予等量生理盐水灌胃,持续21天。造模后21天,处死动物,每组取6只大鼠脑组织冰冻切片进行TUNEL-HSP70免疫荧光双标染色,激光共聚焦显微镜观察结果并对阳性细胞计数;每组再各取6只用Western-blot测定鼠海马cytochromeC、caspase-9、FADD、caspase-8蛋白表达变化。结果1.激光共聚焦扫描显微镜观察,造模后21天,对照组大鼠海马CA1-齿状回之间各层区域可见少量胞核为绿色FITC-dUTP标记TUNEL染色阳性细胞,呈小圆形、环形或颗粒状,以及胞浆为红色TRITC标记的HSP70荧光染色阳性细胞。模型组TUNEL阳性细胞较对照组明显增多(P<0.01),而HSP70表达显着减少(P<0.05);GGA干预组TUNEL阳性细胞数较模型组显着减少(P<0.01),HSP70荧光染色阳性细胞则较对照组和模型组均明显增多(P<0.01);大部分胞浆HSP70免疫荧光染色呈阳性的细胞,其胞核不被FITC-dUTP特异性标记;FITC-dUTP标记阳性的细胞其胞浆则缺乏HSP70表达或HSP70表达较弱。2.模型组大鼠海马caspase-9表达较对照组明显增加,差异具有显着性意义(P<0.01);GGA组大鼠海马caspase-9表达较模型组显着减少(P<0.01)。3.模型组大鼠海马FADD表达较对照组明显增加(P<0.05);GGA组FADD蛋白表达亦较对照组增加(P<0.05),并且和模型组比较差异无显着性(P>0.05)。4.模型组大鼠海马caspase-8蛋白表达较对照组明显增加(P<0.05);GGA组caspase-8蛋白表达较模型组明显减少(P<0.05),并和对照组比较差异无显着性(P>0.05)。5.模型组大鼠海马cytochrome C蛋白表达较对照组明显增加(P<0.05);GGA组cytochrome C蛋白表达较模型组明显减少(P<0.05),并和对照组比较差异无显着性(P>0.05)。结论1.Aβ_(1-42)可通过诱导大鼠海马神经细胞线粒体凋亡途径和死亡受体凋亡途径的激活而促进细胞凋亡,可能是AD神经功能损害的重要原因。2.GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达上调的神经保护作用可能与其增强抗凋亡机制,减轻神经元损伤有关。
万莉[6]2012年在《卡马西平对大鼠海马及顶叶皮质区神经细胞凋亡的影响》文中研究表明目的：卡马西平（Carbamazepine，CBZ）临床应用广泛，是治疗癫痫发作、各种外周神经痛的常用药物之一，亦可以用于抗狂躁抑郁、抗心律失常、抗利尿、治疗耳鸣、面肌痉挛及酒精戒断综合征等方面[1]。因其广谱，有效，价格低廉卡马西平目前应用广泛，但同时其导致严重不良反应的报道日益增多，也受到了人们的关注。卡马西平所致不良反应涉及体内多个系统，包括皮肤及其附件，中枢神经系统、消化系统、血液及心血管系统等[2]。卡马西平所致神经系统不良反应常见的有眩晕、嗜睡、共济失调、幻觉、记忆力下降、注意力不集中及意识障碍等[3]。减少甚至避免不良反应的发生是目前人们最关心的问题之一。本实验旨在通过观察应用卡马西平对大鼠海马及顶叶皮质区神经细胞凋亡的影响，探讨其造成诸多不良反应的可能机制，为尽量避免药物副作用及指导临床医生更好的应用卡马西平提供理论依据。方法：1实验动物及分组：SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠30只，体重(200±20)g，随机分成3组，其中每组分2个亚组，每个亚组5只大鼠：N生理盐水组：①生理盐水灌注15天组②生理盐水灌注30天组；L低剂量卡马西平组：①低剂量卡马西平灌注15天组②低剂量卡马西平灌注30天组；H高剂量卡马西平组：①高剂量卡马西平灌注15天组②高剂量卡马西平灌注30天组。2给药方法：采用灌胃法，连续每天灌胃。低剂量卡马西平组：卡马西平以125mg/kg/d研碎溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃；高剂量卡马西平组：卡马西平以500mg/kg/d研碎溶于生理盐水（2ml/100g）给大鼠灌胃；生理盐水组：灌注等量生理盐水（2ml/100g/d）。3动物取材：大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，从左心室进针，先快速灌注生理盐水，继以4%的多聚甲醛缓冲液先快后慢灌注，然后迅速取材大鼠海马及顶叶部分，放入4%的多聚甲醛缓冲液固定，逐级乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。4标本检测：选取大鼠海马及顶叶部位连续冠状石蜡切片，片厚约5μm。标本分别行HE染色光镜下观察海马及顶叶皮质区神经细胞的形态学特征；原位末端标记法（TUNEL法）检测海马及顶叶皮质区神经细胞凋亡情况；免疫组织化学法检测凋亡相关基因fas及caspase-3在海马及顶叶皮质区的表达。5统计学方法：采用SPSS13.0统计分析软件，方差分析法进行统计分析，以P<0.05为检验水准，认为有统计学意义。多组间均数用One-WayANOVA检验比较，各组均数间两两比较用SNK检验。结果：1HE染色结果各卡马西平组大鼠海马神经细胞轮廓不清，细胞间距变大，排列凌乱，胞核深染固缩，周围可见到空泡形成，其中高剂量组此现象尤为严重。各生理盐水组细胞排列整齐，未见上述表现。各卡马西平组大鼠顶叶皮质区神经细胞排列较为整齐，仅偶见细胞皱缩及周围空泡现象，较生理盐水组顶叶皮质区细胞形态无明显改变。2TUNEL法检测结果各卡马西平组大鼠海马区均可见较多阳性细胞。其中高剂量组（H1和H2组）海马区TUNEL阳性细胞明显增多，呈大片状分布，其余两组可见散在分布的TUNEL阳性细胞。H2组与N2组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)；H1组与N1组阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05）; L2组与N2组阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）；L1组与N1组阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）；H2组与H1组阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05）。各卡马西平组大鼠顶叶皮质区神经细胞仅见散在少量阳性细胞。各组间均数比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3免疫组织化学法检测结果3.1Fas表达结果各卡马西平组大鼠海马区均可见fas表达，各生理盐水组大鼠海马区见少量fas表达。其中高剂量卡马西平组海马神经细胞可明显见到fas的广泛表达。H2组与N2组表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)；H1组与N1组表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）；L2组与N2组表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）；L1组与N1组表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）；H2组与H1组表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。各卡马西平组大鼠顶叶皮质区均见fas表达，各组表达量均较低。各组间表达量均数比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3.2Caspase-3表达结果各卡马西平组大鼠海马区均可见caspase-3的表达。其中高剂量组海马神经细胞可明显见到caspase-3的广泛表达。H2组与N2组表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)；H1组与N1组表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）；L2组与N2组表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）； L1组与N1组表达量比较差异无统计学意义（P>0.05）；H2组与H1组表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。各卡马西平组大鼠顶叶皮质区均见caspase-3表达，各组表达量均较低。各组间表达量均数比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3.3Fas与caspase-3表达的关系各组大鼠海马区fas与caspase-3的表达呈正相关。结论：1大鼠灌胃卡马西平未引起其顶叶皮质区神经细胞过度凋亡现象；2大鼠灌胃低剂量卡马西平未引起其海马区神经细胞过度凋亡现象；3大鼠灌胃高剂量卡马西平可致其海马区神经细胞过度凋亡及fas和caspase-3的高表达，且给药时间越长凋亡程度越重；4各组大鼠海马区fas与caspase-3的表达呈正相关，提示fas介导的细胞凋亡途径可能参与了卡马西平诱导的海马神经细胞凋亡机制。
刘莎莎[7]2012年在《黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及JNK3表达的影响》文中研究指明缺血性脑血管疾病是临床常见且严重威胁人类健康的一类疾病，其中脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI)是缺血性脑血管病发病的重要病理生理过程，并成为制约其疗效的重要因素，因此研究脑缺血再灌注损伤的病理生理机制及加强其防治研究成为当今医学界的紧迫任务。在缺血性脑血管疾病的发生发展过程中，细胞凋亡是神经元损伤的发生机制之一，其中凋亡相关基因c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N terminal kinase3,JNK3)的表达与神经元凋亡关系十分密切。黄芪注射液为临床治疗缺血性脑血管病的常用药物，可抑制细胞凋亡的发生，但具体通过哪条信号转导通路发挥作用，其机制尚未完全阐明。因此本实验通过观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及JNK3表达的影响，探讨黄芪注射液脑保护作用的分子机制。第一部分不同剂量黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及caspase-3表达的影响目的:观察不同剂量黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马神经元凋亡及caspase-3表达的影响，明确其发挥脑保护作用的最佳药物浓度。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芪注射液组，其中黄芪注射液组根据给药剂量又分为2ml/kg、4ml/kg、6ml/kg、8ml/kg和10ml/kg五个亚组。四血管阻断（4VO）法制备全脑缺血再灌注大鼠模型。缺血30min，再灌注24h后，分别采用HE染色观察海马CA1区病理学变化；TUNEL染色与医学图像分析结合的方法检测各组大鼠海马CA1区神经元凋亡情况； western blot方法检测各组大鼠海马组织caspase-3蛋白的表达。结果:HE染色结果显示：模型组大鼠海马出现明显的病理改变，镜下可见海马CA1区锥体细胞排列紊乱，界限不清楚，正常细胞结构消失，固缩成叁角形或不规则型；而黄芪注射液4ml/kg、6ml/kg、8ml/kg、10ml/kg组可见海马神经元的病理变化得到明显改善，且大剂量效果较明显。TUNEL和western blotting结果显示：与假手术组相比，模型组大鼠海马组织神经元凋亡指数及caspase-3蛋白表达明显增多(P <0.05)；与模型组相比，黄芪注射液4ml/kg、6ml/kg、8ml/kg、10ml/kg组神经元凋亡指数及caspase-3蛋白表达明显减少(P <0.05)，而黄芪注射液2ml/kg组差异无显着性(P>0.05)；黄芪注射液6ml/kg、8ml/kg、10ml/kg抑制细胞凋亡及减少caspase-3蛋白表达的效果优于4ml/kg (P <0.05)，但6ml/kg、8ml/kg、10ml/kg叁个亚组之间差异无显着性(P>0.05)。小结:1.四血管阻断法可成功建立脑缺血再灌注大鼠模型，黄芪注射液可改善脑缺血再灌注后海马CA1区神经元病理学改变。2.黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及caspase-3蛋白表达，且呈剂量-效应关系，最佳给药浓度为6ml/kg。第二部分黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马组织JNK3表达的影响目的:观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马组织JNK3表达的影响，探讨其发挥脑保护作用的分子机制。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、黄芪注射液组和黄芪注射液溶剂对照组。其中模型组、黄芪注射液组和黄芪注射液溶剂对照组缺血30min后再灌注，根据再灌注不同时间点再分为0h、0.5h、2h、6h、24h、72h和120h7个亚组。分别采用免疫组织化学和Westernblot方法检测大鼠海马组织JNK3蛋白表达的变化，荧光定量PCR方法检测海马组织JNK3mRNA的表达。结果:与假手术组相比，模型组除120h外的各时间点海马JNK3蛋白及mRNA的表达均较假手术组增加(P<0.05)；与模型组相比，除120h之外，黄芪注射液组在各个时间点JNK3蛋白及mRNA表达均降低(P <0.05)，而黄芪注射液溶剂对照组与模型组相比则差异无显着性(P>0.05)。小结:1.脑缺血再灌注后大鼠海马组织JNK3蛋白及mRNA表达增高，与海马神经元凋亡相一致，提示JNK3可能参与了脑缺血再灌注引起的海马神经元凋亡。2.黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注后大鼠海马组织JNK3mRNA及蛋白表达，从而抑制脑缺血再灌注引起的大鼠海马神经元凋亡。结论1.黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注后大鼠海马神经元的凋亡及caspase-3蛋白的表达，且呈剂量-效应关系，最佳给药浓度为6ml/kg。2.黄芪注射液可减少脑缺血再灌注大鼠海马组织JNK3mRNA及蛋白表达，从而抑制脑缺血再灌注引起的大鼠海马神经元凋亡。
罗灵[8]2016年在《艾司西酞普兰对抑郁模型大鼠内质网应激相关基因表达的调控机制》文中进行了进一步梳理目的:探讨艾司西酞普兰、N-乙酰半胱氨酸、美托洛尔干预抑郁模型大鼠大脑皮质和海马及对内质网应激PERK通路相关基因表达的调控作用。方法:成年健康雄性SD大鼠45只随机分为5组(n=9,250±30g),分别为:1.C组:正常+生理盐水组(10 ml/kg/d),2.D组:抑郁障碍+生理盐水组(10ml/kg/d),3.用药模型组:(1)X组:抑郁障碍+艾司西酞普兰组(10 mg/kg/d),(2)M组:抑郁障碍+美托洛尔组(10mg/kg/d),(3)N组:抑郁障碍+N-乙酰半胱氨酸组(125mg/kg/d)。除正常组外,同时对其余4组大鼠进行慢性轻度不可预见性刺激结合孤养制备抑郁大鼠模型,刺激的同时不同药物组在造模第1天起每早8:00-9:00同时腹腔注射相应的药物共4周,正常组及抑郁模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液。于实验前1天和实验第28天运用敞箱实验和糖水消耗实验评定大鼠行为学改变。流式细胞术AnnexinⅤ-PI双标染色法检测大鼠大脑皮层及海马细胞凋亡率。透射电镜法观察大鼠大脑皮层和海马神经细胞形态,内质网、线粒体变化。采用Real-time PCR和Western blot方法检测大鼠大脑皮层及海马钙调蛋白激酶II(Ca MKⅡ)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)基因及蛋白的表达。结果:(1)应激前各组大鼠敞箱实验中的行为学得分(水平运动得分+垂直运动得分)及糖水消耗实验百分比均无明显差异(P>0.05);应激后敞箱实验行为学总得分及糖水消耗实验消耗百分比分别比较,D组较C、X、M、N组分别比较均显着下降(均P<0.05)。(2)与C组比较,D组大鼠大脑皮质及海马凋亡率显着增高(P<0.05)。与D组比较,X、M、N组皮质凋亡率均降低(P<0.05),作用效果为X>M,N>M。与D组比较X、N组海马凋亡率均降低(P<0.05),作用效果为X>M,N>M。(3)电镜结果显示:正常组海马、皮质神经细胞及细胞器完整,结构清晰;抑郁模型组大鼠海马及皮质神经元细胞及细胞器出现结构模糊、排列紊乱、数量减少;其他用药模型组大鼠海马及皮质神经细胞变化介于正常组与抑郁模型组之间。(4)Western blot结果显示:大鼠大脑皮质各组间ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、PERK蛋白表达均无明显差异(P>0.05)。大鼠大脑皮质Ca MKII蛋白表达,与C组比较,D组Ca MKII蛋白表达升高(P<0.05)。大鼠大脑海马各组间ERK、JNK、PERK蛋白表达均无明显差异(P>0.05)。大鼠大脑海马p-ERK蛋白表达,与C组比较,D组p-ERK蛋白表达降低(P<0.05);与D组比较,X、N组p-ERK蛋白表达升高(P<0.05)。大鼠大脑海马p-JNK蛋白表达,与C组比较,D组p-JNK蛋白表达升高(P<0.05);大鼠大脑海马Ca MKII蛋白表达,与C组比较,D组Ca MKII蛋白表达升高,(P<0.05);(5)Real-time PCR结果显示:与C组比较D组大鼠大脑皮质及海马ERK、JNK、PERK、Ca MKII基因表达均无明显差异(P>0.05);与D组比较,X、M、N组大鼠大脑皮质及海马ERK、JNK、PERK、Ca MKII基因表达均无明显差异(P>0.05)。结论:(1)艾司西酞普兰、N-乙酰半胱氨酸、美托洛尔可改善抑郁模型大鼠的行为学异常和快感缺失。(2)抑郁模型大鼠大脑皮质及海马细胞的凋亡率升高。艾司西酞普兰、N-乙酰半胱氨酸、美托洛尔可降低抑郁模型大鼠皮质及海马细胞凋亡率且作用效果为艾司西酞普兰>美托洛尔;N-乙酰半胱氨酸>美托洛尔。(3)抑郁模型大鼠海马及皮质神经元细胞出现不同程度排列紊乱、结构模糊,线粒体等细胞器出现结构模糊,数量减少。艾司西酞普兰、N-乙酰半胱氨酸、美托洛尔可减少抑郁模型大鼠皮质及海马神经元细胞及细胞器出现的变化。(4)抑郁模型大鼠海马p-JNK蛋白表达升高。抑郁模型大鼠皮质及海马Ca MKII蛋白表达升高;(5)抑郁模型大鼠海马p-ERK蛋白表达降低;艾司西酞普兰、N-乙酰半胱氨酸可以升高抑郁模型大鼠海马p-ERK蛋白表达。
林军[9]2005年在《银杏叶提取物（EGb）对糖尿病大鼠学习记忆障碍保护作用的机制研究》文中认为长期糖尿病除了可引起全身多脏器结构和功能损害外,还可引起糖尿病神经病变,包括外周神经病变以及中枢神经神经病变。以往对于糖尿病神经病变的研究、治疗和药物的保护往往着重于外周神经病变方面,而对于糖尿病中枢性损伤的相关研究比较少。因此进行糖尿病脑损伤机制的研究,并寻找相应的保护剂有着十分重要的意义。银杏叶提取物(EGb)主要成分为黄酮类、萜内酯类等,是一有效的抗氧化剂和自由基清除剂,具有明显改善血液流变和组织代谢的作用,对中枢神经系统有独特的保护效应,对应激因素和外伤因素所致的认知缺陷有治疗作用。因此EGb对中枢神经系统退行性疾病,如AD,有广泛的应用价值。本论文以Wistar大鼠为研究对象,在链脲佐菌素(Streptozotocin)诱导的糖尿病模型上,从形态功能学、分子生物学等方面对EGb糖尿病海马损伤的保护作用及其机制进行了探讨。(一)形态功能学方面(1)大鼠腹腔注射Streptozotocin 55mg.kg-1后,出现典型的体重下降、多尿、多饮、血糖升高等表现。6 个月后,Nissl 染色观察表明海马细胞稀疏、无序,神经细胞密度降低;取海马进行其超微结构观察,见大鼠海马锥体细胞出现细胞器结构不清楚,胞体及突起明显肿胀,胞浆空泡化,粗面内质网和游离核糖体明显减少,线粒体肿胀、破坏、溶解,细胞膜崩解等表现以及神经纤维不清楚、神经丝模糊、突触间隙明显增宽、突触后膜致密物厚度(PSD)明显变薄。EGb(100 mg.kg-1)治疗组海马细胞的超微结果得到改善,突触间隙明显缩小,PSD 明显增厚,神经细胞密度有所提高。(2)为了探讨糖尿病大鼠海马损伤的机制,大鼠糖尿病后6 个月,用电子显微镜和TUNEL 方法观察到海马的细胞凋亡现象,表明海马细胞存在着明显的凋亡现象,TUNEL阳性细胞表达的凋亡细胞数明显增加,EGb(100 mg.kg-1)治疗组对海马细胞凋亡增加现象有明显的抑制作用,TUNEL 阳性细胞表达的凋亡细胞数明显减少。(3)糖尿病6个月后,大鼠海马Na+-K+-ATPase活性的由正常的16.07±3.60(μmolPi.mgPr-1.h-1),下降到10.52±3.02,EGb(100、50 mg.kg-1)治疗组对糖尿病大鼠海马Na+-K+-ATPase的活性分别提高到15.50±2.76,14.67±3.55。提示了银杏叶提取物对作为神经元质膜功能状
刘凯[10]2007年在《抗痴呆Ⅰ号对老年性痴呆大鼠的治疗作用及机制探讨》文中研究表明阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种进行性中枢神经系统退行性疾病,以不断进展的记忆障碍,全面智能减退,个性改变以及精神行为异常为主要的临床表现。随着人口老龄化的日趋明显,AD作为老年期痴呆最常见的一种类型,已经成为了一个重要的医学和社会问题。由于AD发病机制复杂,目前治疗AD的药物只是延缓AD的病程,而不能治愈AD,并且价格昂贵。因此开发高效、廉价的抗AD药物具有很高的社会和经济价值。本研究通过腹腔注射D-半乳糖和大鼠海马内注射Aβ25-35分别模拟自由基损伤和Aβ损伤制作大鼠AD模型。选用乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchE)作为本次实验的阳性药物。通过Morris水迷宫和跳台的行为学检测及病理学检测,观察抗痴呆Ⅰ号对AD大鼠的治疗作用。通过对脑内MDA、GSH-PX、CAT、SOD、Na+-K+-ATP酶的检测及电镜和流式细胞仪检测,从自由基及凋亡方面探讨抗痴呆Ⅰ号对AD大鼠治疗作用机制。结果显示:抗痴呆Ⅰ号能改善AD大鼠空间认知能力,被动逃避反射能力及病理变化。抗痴呆Ⅰ号有抗AD脑组织氧化损伤的作用。但电镜和流式细胞仪均未检测到AD大鼠脑组织细胞的凋亡。结论:抗痴呆Ⅰ号对AD大鼠有治疗作用,其机制与抗自由基损伤有关,可能与凋亡无关。
参考文献：
[1]. 高温诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其信号转导机制研究[C]. 陈光忠, 罗炳德, 邹飞, 王斌, 万为人. 中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编. 2003
[2]. 高温诱导大鼠海马神经细胞凋亡及其信号转导机制研究[D]. 陈光忠. 中国人民解放军第一军医大学. 2003
[3]. 黄芪注射液抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡的JNK通路研究[D]. 张霞. 承德医学院. 2012
[4]. 高糖高脂膳食所致的IETM诱发SAD的探讨[D]. 牛利. 山西医科大学. 2016
[5]. GGA诱导AD大鼠海马HSP70表达及其抗细胞凋亡机制的研究[D]. 鲍娟. 中南大学. 2008
[6]. 卡马西平对大鼠海马及顶叶皮质区神经细胞凋亡的影响[D]. 万莉. 河北医科大学. 2012
[7]. 黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及JNK3表达的影响[D]. 刘莎莎. 承德医学院. 2012
[8]. 艾司西酞普兰对抑郁模型大鼠内质网应激相关基因表达的调控机制[D]. 罗灵. 贵州医科大学. 2016
[9]. 银杏叶提取物（EGb）对糖尿病大鼠学习记忆障碍保护作用的机制研究[D]. 林军. 广西医科大学. 2005
[10]. 抗痴呆Ⅰ号对老年性痴呆大鼠的治疗作用及机制探讨[D]. 刘凯. 吉林大学. 2007