王天奇[1]2004年在《洛阳地区规模化猪场猪胸膜肺炎血清学调查及控制方法研究》文中进行了进一步梳理胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)是猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonfae，PCP)的病原菌。胸膜肺炎是规模化猪场最重要的呼吸道病之一，影响着全球的养猪业，最急性和急性胸膜肺炎可造成死亡，而亚急性和慢性病例则可导致猪生长缓慢，饲料报酬降低。近年来，本病的发生和流行目趋严重，国内大部分地区已有报道。 已发现的胸膜肺炎放线杆菌有15个血清型，不同血清型之间没有或仅有弱的交叉保护作用，这给临床诊断和免疫预防带来很大困难。同时，胸膜肺炎放线杆菌易产生耐药性，敏感个体在感染后短时间内因肺组织出血而死亡。因此，研究猪传染性胸膜肺炎的血清学流行规律、进行敏感性药物的筛选、探讨有效的药物和免疫控制方法，将有利于提高本病的控制水平。 本试验利用间接血凝试验，对来自洛阳地区部分规模化猪场的928份血清样品进行了胸膜肺炎抗体检测，以抗体效价≥1：8为阳性判定标准，结果发现，上述被检样品的总阳性率为30.39％(282／928)，经产母猪、20日龄哺乳仔猪、40日龄断乳仔猪、80～100日龄育肥猪和150～180日龄育肥猪的阳性率分别为61.59％、42.46％、7.07％、30.05％、15.52％，阳性猪抗体效价的几何平均数分别为1：69.01、1：15.29、1：11.89、1：26.92和1：18.65。 利用12种抗菌药物对18个APP分离株进行体外药敏试验，结果发现其耐药性顺序为：链霉素、克林霉素＞诺氟沙星＞青霉素G、卡那霉素、环丙沙星＞氨苄青霉素、庆大霉素、头孢唑啉＞氟苯尼考＞阿米卡星、头孢曲松。分离株对氟苯尼考、阿米卡星、头孢曲松敏感的比例分别为77.78％、83.33％和83.33％，它们可作为临床控制猪传染性胸膜肺炎的首选药物。 利用氟苯尼考和丁胺卡那霉素对临床病例进行控制，有效率分别为95.71％和90.37％(P＜0.01)，对照组的有效率为66.87％，与试验组差异极显着(P＜0.01)。 利用胸膜肺炎放线杆菌叁价灭活苗免疫妊娠后期母猪(约84天)，其所产仔猪20日龄、40日龄、60日龄和80日龄抗体效价的几何平均数分别为1：35.50、1：19.70、洛阳地区砚模化猪场猪钩膜肺炙血靖学调蜜众控控制方性研究1:12.10和l:10.08，高于非免疫母猪所产仔猪(P<0.05或P<0.01)。非免疫母猪所产仔猪于40日龄进行免疫，60日龄、80日龄和100日龄时的杭体效价几何平均数分别为1:38.50、1:24.25和1:18.80，高于相应日龄的非免疫猪(P<0.01)o关键词:洛阳地区;猪传染性胸膜肺炎;胸膜肺炎放线杆菌;杭体;效价;敏感性
郑娟[2]2009年在《洛阳地区规模化猪场PMWS血清学、病理学及防制研究》文中提出采用猪II型圆环病毒ELISA抗体检测试剂盒,检测病猪血清中抗II型圆环病毒ORF2蛋白的抗体的方法。对洛阳地区的11个猪场的755份血清进行检测,结果显示,这11个猪场都为阳性猪场。在755份血清样品中,PCV-2抗体阳性率为52.32%(395/755),其中,40～70日龄断奶仔猪血清样品阳性率为41.83%(105/251);育肥猪(80～150日龄)血清样品阳性率为51.37%(150/292);经产母猪血清样品阳性率为66.04%(140/212)。证明洛阳地区规模化猪群中,PCV-2抗体阳性率比较高,不同猪场的阳性率在32.26%～60.42%。试验还显示,猪群的PCV-2抗体阳性率随着年龄的增长而升高。采用苏木精—伊红染色(H.E染色),对患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的断奶仔猪的肺脏、肝脏、肾脏、淋巴结和脾脏进行了病理学观察。结果发现,肺脏肿大、坚硬或似橡皮,有明显的间质性肺炎;肝脏淤血、水肿或萎缩,肝细胞有颗粒变性现象,肝小叶间质增生,有大量淋巴细胞和嗜中性白细胞浸润,胆管萎缩;肾脏肿大并有出血点,为多灶性间质性肾炎,肾小管间有大量淋巴细胞呈弥漫性浸润,肾小管上皮脱落并有蛋白尿;淋巴结肿大发黄,淋巴小结的结构不完整,淋巴结的副皮质区增宽;脾脏肿大,也有的脾脏萎缩,脾小体的结构不完整或消失(发生凝固性坏死),脾脏中央动脉周围淋巴鞘内的淋巴细胞密度增大。为探讨PMWS的综合预防控制措施,本课题采用对患有PMWS的猪场进行综合防治试验。用该猪场患病猪典型的病变器官制作自家灭活苗,对出生15日龄的仔猪进行预防接种,并配合长效土霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、黄芪多糖、支原净、强力霉素等药物治疗,大大提高了仔猪的成活率。试验Ⅰ组16窝162头仔猪,采用自家灭活苗配合药物进行预防,未出现疫情,至60日成活率为89.51%(145/162);90日龄成活率达87.65%(142/162)。试验Ⅱ组16窝165头仔猪,采用药物预防,断奶后有少部分出现了病情,至60日成活率为80.61%(133/165);90日龄成活率为75.15%(124/165)。而对照组4窝41头仔猪,仍采用发生疫情前的预防程序,断奶后有一部分出现了病情,至60日成活率为53.66%(22/41);至90日龄成活率仅为43.90%(18/41)。经t检验,试验组与对照组差异极显着(P<0.01),试验Ⅰ组与试验Ⅱ组差异显着(P<0.05)。
郑教雀[3]2013年在《APP抗体IHA检测法建立及江西省和周边地区APP血清学调查》文中研究说明胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus Pleuropneumoniae，APP）属巴氏杆菌科放线杆菌属，是猪传染性胸膜肺炎的病原菌，它给养猪业带来巨大的经济损失。该病原菌常呈隐性状态，我们通过检测猪群的胸膜肺炎放线杆菌血清抗体水平，以了解猪群的感染状态，从而为控制与防治该病的流行提供参考。试验将保存鉴定的APP菌种复苏后，培养菌液反复冻融，经超声波裂解处理后提取菌体抗原，致敏经戊二醛固定鞣酸化的兔红细胞，成功建立了APP抗体的间接血凝检测方法（IHA）。应用该法对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬等病毒的阳性血清检测试验，结果均为阴性。不同批次APP抗原经IHA检测，重复性良好。表明所建立的APP抗体IHA检测法有较好的特异性和重复性。应用所建立的APP抗体IHA检测法对2011年1月至2012年12月，来自江西省及周边地区的10170份血清进行了APP抗体血清调查，结果阳性率为82.0%。其中江西省抚州市阳性率最高，为92.8%（620/668）；景德镇市最低，为60.8%（62/102）。萍乡市的抗体效价平均数最高，为1:2~(5.86)；景德镇市的抗体效价平均数最低，为1:2~(4.68)。就不同猪群阶段而言，从仔猪到肥猪，再到公猪或母猪，其阳性率以及抗体效价平均数都呈上升趋势。就不同月份与季节而言，冬春季节的阳性率较高，而夏秋季节阳性率则较低；但抗体效价平均数恰好相反，冬春季节的较低，而夏秋季节偏高。通过两年血清样品的血清调查发现，2012年与与上年同期相比，除1月份外，其他月份的阳性率都有不同程度的升高。说明该病感染情况仍有所加重，应当引起广大兽医工作者注意。
韩庆安, 张贵军, 许玉静, 刘红, 张晋江[4]2009年在《河北省规模猪场PRDC相关病原感染的血清学调查》文中进行了进一步梳理采用ELISA和凝集试验方法对2004～2007年259个规模猪场的9640份血清样本进行PRDC相关病原感染的血清学调查。结果表明:PRRSV、PCV-2、PRV、SIV(H1N1)、M.H、APP、HPS、PAR、Tpl感染抗体总体阳性率分别为38.29%、50.86%、25.78%、39.20%、29.63%、30.00%、27.07%、6.10%和42.79%,CSF总体带毒率为19.15%,但不同年度、不同类型规模猪场和猪群的各病原体感染抗体阳性率(带毒率)之间存在着差异。4年来对全省规模猪场一直危害较重的病原体有PRRSV、PCV-2、SIV、M.H、APP和Tpl,而CSFV在2004年和2005年、PRV在2005年和2006年、HPS在2006年和2007年对全省规模猪场危害较重,PAR对河北省规模化猪场危害较轻。M.H感染抗体的高低与猪场规模的大小呈负相关;PRRSV、PRV、CSFV和SIV(H1N1)对不同类型猪群的危害有一定的规律性,其中PRRSV、PRV、CSFV对猪群的危害程度的高低依次为经产母猪、育肥猪、保育猪和后备母猪,而SIV(H1N1)则为经产母猪、育肥猪、后备母猪和保育猪。总之,河北省规模猪场PRDC主要病原是PRRSV、PCV-2、PRV、SIV、M.H、APP、HPS和Tpl,其中,PRRSV、PCV-2、M.H和HPS是防控的重点。
李林溪[5]2013年在《胸膜肺炎放线杆菌异源保护抗原肽筛选及ApxIV体外表达》文中研究指明胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎放线杆菌疾病的主要病原菌，该病是世界范围内流行并严重危害养猪业的重要传染病。胸膜肺炎放线杆菌具有多个血清型，其致病力和免疫原性各不相同，主要血清型之间缺乏免疫交叉保护，影响了其疫苗的开发。我们先前的研究通过MALDI-ToF质谱鉴定出了六个共同抗原蛋白，单链DNA结合蛋白（PA-Ssb）、噬菌体休克蛋白A（PA-PspA）、甘油醛-3磷酸脱氢酶（PA-GAPDH）、丙酮酸激酶（PA-Pk）、丝氨酸羟甲基转移酶（PA-Shmt）以及天冬氨酸转氨酶（PA-Ast）。以痤疮丙酸杆菌参考菌株设计引物克隆并测序了以上六个蛋白，通过Genebank以及其他生物信息学数据库对其进行了分析，并上传至Genebank数据库。构建了六个抗原蛋白的原核表达载体pGEX-PA-Ssb、pGEX-PA-Pspa、pGEX-PA-GAPDH、pGEX-PA-Pk、pGEX-PA-Shmt和pGEX-PA-Ast，并表达纯化出了六个抗原蛋白的GST融合蛋白。通过小鼠模型免疫并以胸膜肺炎放线杆菌血清1型和5a型感染，分别得到免疫保护率达到（对血清1型）20%（PA-GAPDH）至80%（PA-Ssb）和（对血清5a型）10%（PA-Ast）至60%（PA-Ssb）。免疫保护作用最佳的抗原蛋白PA-Ssb与胸膜肺炎放线杆菌多个血清型均具有较高同源性的两段短肽，PH1（N`-AKNNSSGAGNSKDWGGN-C`）与ApxIV毒素同源，PH2（N`-VIESLSKG-C`）与ZnuA基因同源。人工合成的PH1和PH2短肽与胸膜肺炎放线杆菌多个血清型抗体均有较强的抗原抗体反应，其中PH1的反应较强。通过构建胸膜肺炎放线杆菌Nanoluc荧光素酶突变株，证明这一新型荧光素酶可以在胸膜肺炎放线杆菌内表达并催化Furimazine底物发光，是一种新型的报告基因。为了鉴定ApxIV毒素的调控子基因，通过基因工程方法构建了胸膜肺炎放线杆菌血清15型荧光突变库，采用IVIS系统对2万个以上的突变株进行了荧光筛选，没有筛选出有效的发光克隆。胸膜肺炎放线杆菌在体外培养条件下，其毒素ApxIV可以通过SDS-PAGE、免疫印迹、MALDI-ToF质谱、荧光定量PCR等方法检测出其基因的转录与表达。其表达受到培养条件不同以及钙离子浓度不同的影响。在含有5mM钙离子的增强型PPLO培养基中ApxIV的表达水平最高。本研究初步摸索了胸膜肺炎放线杆菌异源疫苗开发的一条途径，并首次以多种方法证明ApxIV毒素的体外表达。为今后胸膜肺炎放线杆菌的新型疫苗开发以及重要毒力因子的研究提供了一定基础。
参考文献：
[1]. 洛阳地区规模化猪场猪胸膜肺炎血清学调查及控制方法研究[D]. 王天奇. 南京农业大学. 2004
[2]. 洛阳地区规模化猪场PMWS血清学、病理学及防制研究[D]. 郑娟. 河南农业大学. 2009
[3]. APP抗体IHA检测法建立及江西省和周边地区APP血清学调查[D]. 郑教雀. 江西农业大学. 2013
[4]. 河北省规模猪场PRDC相关病原感染的血清学调查[J]. 韩庆安, 张贵军, 许玉静, 刘红, 张晋江. 养殖与饲料. 2009
[5]. 胸膜肺炎放线杆菌异源保护抗原肽筛选及ApxIV体外表达[D]. 李林溪. 吉林大学. 2013