王永刚[1]2000年在《LEPTIN单克隆抗体的制备及其应用性探索》文中研究指明以重组人leptin作为抗原，利用杂交瘤技术成功制备了3株鼠抗人leptin McAb，对其性质进行了系统的分析，并对其在诊断中的应用进行了初步探索。 3株特异性较好，效价和亲和常数较高。3株McAb均为IgGl亚类，ELISA检测腹水效价为10~(-6)～10~(-7)，特异性较好，亲和常数（Ka）分别为1.67×10~9L/mol，3.0×10~8L/mol，7.5×10~8L/mol。 采用常规的免疫方法制备了兔抗人leptin多克隆抗体，特性分析表明特异性较好，效价较高。经DEAE-FF纯化后的血清，用过碘酸纳法与辣根过氧化物酶进行了标记，方法学结果表明，标记后的酶标抗体质量较好。 以单克隆抗体作为固相抗体，多克隆抗体为酶标抗体，建立了一种检测人血浆中leptin的双抗体夹心酶联免疫吸附分析方法（ELISA）。此法的灵敏度为16ng/ml，批内变异系数为8.36％（n=10）批间变异系数为10.22％（n=5），测得回收率为92.8～106％。
杨世方[2]2003年在《八肽胆囊收缩素对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的作用及其机制探讨》文中研究表明脑卒中是严重危害人类健康的重大疾病之一，随着人口老龄化社会的到来，其高发病率、致死率和致残率，已渐居各种疾病之首。脑缺血是脑卒中最为常见的发病类型。因此，对脑缺血的发病机制、预防和救治的研究是当前国内外亟待解决的重大课题。谷氨酸（glutamate,Glu）是中枢神经系统主要的兴奋性递质，但其过度释放又可引起神经元损伤。脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R) 损伤的主要通路就是细胞外谷氨酸水平升高→N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体的过度激活→细胞内钙超载→一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS）激活→自由基、一氧化氮(nitric oxide, NO) 及过氧亚硝基阴离子（ONOO-）的大量产生。针对这一通路诸环节损伤机制的基础研究或神经保护剂的开发研究，是当前国际上的研究热点。胆囊收缩素（cholecystokinin, CCK）广泛存在于人和动物的胃肠道和中枢神经系统，是一种典型的脑肠肽,也是脑中含量最丰富的神经肽之一。CCK在脑中以神经递质或调质的形式参与了多种生理及病理过程。CCK以多种分子形式存在，其中硫酸化的羧基端8肽胆囊收缩素（cholecystokinin-octapeptide, CCK-8）是CCK在脑中的主要存在形式，也是具有CCK完全生物学功能的最小活性片段。目前发现，主要有两种不同的CCK受体，即CCK A型受体（CCK-AR）和CCK B型受体（CCK-BR）。CCK-BR在脑中分布广泛，而CCK-AR仅零散分布于某些脑区。近年来研究发现CCK具有多方面的抗损伤作用，如抗胃肠道I/R损伤、抗癫痫 、拮抗Glu的神经毒性，减轻乙酰胆碱能神经元损伤等作用。有关CCK和脑缺血关系的研究很少，究竟是CCK还是其受体拮抗剂具有抗脑缺血的作用，尚存异议。CCK是否可通过影响Glu损伤通路，而减轻动物局部脑缺血 (focal cerebral ischemia, FCI)/再灌注(FCI/reperfusion, FCI/R)损伤，迄今未见报道。FCI或再灌注时，血液、脑组织CCK-8水平及其受体表达的变化规律，也不清楚。<WP=6>本实验采用栓线法大鼠FCI/R模型，通过侧脑室内（intracerebroventricular, icv）注射CCK-8或其受体拮抗剂，从形态、功能及代谢水平研究了CCK-8抗FCI/R损伤的作用及其受体机制；并在整体及离体水平，采用生物化学、免疫组织化学、分子生物学、放射免疫检测等手段，对CCK-8抗FCI/R损伤的机制进行探讨。1 CCK-8减轻大鼠FCI/R损伤1.1 CCK-8 对FCI/R损伤引起的大鼠脑形态学改变的影响观察CCK-8或其非特异性受体拮抗剂－丙谷胺（proglumide, Pro）对大鼠FCI/R所致脑形态学改变及脑梗死体积的影响。健康雄性SD大鼠(250g～290g), 用10%水合氯醛麻醉（350mg/kg, ip）后，采用栓线（直径0.25 mm）法复制FCI/R模型。脑缺血过程中，监测平均动脉血压、心率，并保持直肠温度在36.5℃～37.5℃。icv注射（前囟点后0.8 mm，左旁开1.5 mm，硬膜下3.7 mm）在脑缺血开始前15 min～20 min进行，药物均以人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid, ACSF）作为溶剂，注射总体积为5 μl。实验分为Sham组；I/R组；不同剂量CCK-8（0.3μg、1.0μg、2.0μg、4.0 μg）+I/R 组；Pro（20μg）+I/R组；Pro（20μg） + CCK-8（1.0 μg）+I/R组。各组动物均于脑缺血1 h再灌注24 h,断头取脑，经氯化-2,3,5-三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride ,TTC）染色后测脑梗死体积。另外，在Sham、I/R、CCK-8 (1.0μg)+I/R组各取3只大鼠，经升主动脉灌注4% 多聚甲醛固定大脑，进行常规HE染色，光镜观察形态学改变。结果如下：⑴ 脑缺血前、脑缺血20 min或60 min、再灌注20 min各时点的血压和心率变化，组间比较无显著差异 (P>0.05)。icv注射CCK-8后动脉血压仅出现轻微波动，10 min-15 min内恢复至给药前水平。 ⑵ 全脑经TTC染色后，可见非梗死脑组织被染成深红色，缺血梗死的脑组织呈苍白色，梗死区位于缺血半球大脑中动脉（middle cerebral artery, MCA）供血区。从冠状脑片TTC染色可见缺血梗死区主要位于缺血侧纹状体的背外侧及覆盖其上的大脑皮层。I/R组，大脑皮层及纹状体呈大面积的梗死；CCK-8+I/R组，大脑皮层及纹状体的梗死范围均有明显的缩小。⑶冠状脑片经HE染色后光镜下可见，I/R组缺血区大脑皮<WP=7>层呈广泛的液化样坏死，细胞出现空泡样改变，神经细胞大量丢失，残存的细胞胞核固缩深染，核仁模糊或消失，细胞间质染色浅而不均匀。CCK-8（1.0μg）+I/R组脑缺血区存活神经元较多，空泡样改变较轻、发生核固缩的细胞较少，细胞间质染色较均匀。⑷ icv 注射0.3μg～4.0μg 的CCK-8均可缩小FCI/R引起的脑梗死范围，这种作用在CCK-8的剂量为1.0μg (139.30±45.28 mm3)和2.0μg (149.83±42.38 mm3)时最强，与I/R组脑梗死体积(203.93±55.81 mm3)相比分别少31.5%和26.5%( P值均<0.05)。Pro+I/R组梗死体积(255.38±51.78 mm3)显著大于I/R组（P<0.05）；预先注射Pro，可完全阻断CCK-8的神经保护作用。结果表明，中枢给予CCK-8可减轻大鼠FCI/R损伤，这一作用具有剂量相关性，并可被CCK-8的非特异性受体拮抗剂Pro阻断;单纯注射Pro可增加梗死体积。提示内外源性CCK在脑对缺血的耐受性方面起重要作用。然而何
李翀[3]2007年在《阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者炎症因子与动脉粥样硬化相关性研究》文中指出目的：探讨OSAS患者颈动脉IMT与血浆TNF-α、IL-18水平的相关性，以及CPAP治疗对血浆TNF-α、IL-18水平和颈动脉IMT的作用。方法：将52例多导睡眠图确诊的男性OSAS患者(OSAS组)按照AHI分为轻度、中度和重度三个亚组。并将年龄和BMI匹配的18例非OSAS男性作为对照组。对OSAS组中20例患者进行CPAP治疗。比较OSAS组与对照组组间颈动脉IMT、血浆TNF-α、IL-18和外周循环血脂代谢参数的差异和相关性。并分析CPAP治疗前后各项参数的改变。结果：OSAS组AHI、TNF-α、IL-18显著高于对照组，最低SpO_2和HDL显著低于对照组。OSAS组颈动脉IMT较对照组增厚，其中中度和重度OSAS亚组有显著差异。Pearson相关分析显示颈动脉IMT与AHI、IL-18水平呈显著正线形相关(P=0.000)；与TNF-α水平呈正相关(P=0.04)；与最低SpO_2水平呈显著负相关(P=0.005)；年龄与颈动脉IMT也有相关趋势。多因素逐步回归分析显示AHI和年龄是颈动脉IMT的预测因素。血浆TNF-α与IL-18、AHI呈显著正线性相关，与最低SpO_2、HDL呈显著负线性相关；血浆IL-18与AHI呈显著正线性相关，与最低SpO_2、HDL呈显著负线性相关。CPAP治疗后OSAS患者AHI、收缩压、舒张压、血浆IL-18水平及血浆TNF-α水平均显著降低，最低SpO_2显著升高(P值均＜0.001)；胆固醇、HDL、LDL、TG和颈动脉IMT未呈显著性改变。结论：本研究证实OSAS患者颈动脉IMT增厚，血浆TNF-α和IL-18水平升高。颈动脉IMT与血浆TNF-α、IL-18水平，AHI及最低血氧饱和度相关。AHI和年龄是颈动脉IMT的独立预测因素。此外，TNF-α及IL-18水平与AHI呈显著正相关；与最低血氧饱和度及HDL呈显著负相关。这些均提示OSAS患者高水平的血浆TNF-α和IL-18可能促进其动脉粥样硬化。CPAP治疗后能够改善患者AHI，最低血氧饱和度，降低血浆TNF-Ah IL-18水平，从而可能纠正动脉粥样硬化进程，减少发生心脑血管事件的危险。
翟铁军[4]2005年在《芪玄益心胶囊抗实验性糖尿病冠心病大鼠心肌缺血及对其细胞膜I_（tol）影响的研究》文中指出本文总结归纳了中医对糖尿病及其并发冠心病的认识,在提出本病病机是以气阴两虚为本、血瘀痰浊为标基础上,拟益气养阴、活血宣痹化痰治疗法则的芪玄益心胶囊进行了动物实验研究。实验通过与西药组(美吡达)和中药组(丹参滴丸)对照,观察芪玄益心胶囊对实验性糖尿病冠心病大鼠的影响。结果显示:芪玄益心胶囊可改善病变大鼠的心电图和心脏功能,降低血糖、糖化血清蛋白,升高血清胰岛素,调整血脂紊乱,减少血小板源性生长因子、基质金属蛋白酶在心肌中的表达,增强其瞬时外向钾电流。证实:①芪玄益心胶囊可改善糖尿病冠心病大鼠的心肌缺血、调整其代谢紊乱,从而确定其对糖尿病冠心病的治疗效果;②糖尿病冠心病大鼠的缺血心肌细胞膜存在瞬时外向钾电流的病理性降低,而芪玄益心胶囊具有提高其瞬时外向钾电流,恢复其动作电位的作用,在细胞水平明确了芪玄益心胶囊的相关作用位点;③芪玄益心胶囊减轻病变大鼠血小板源性生长因子、基质金属蛋白酶在心肌中的表达,具有抗心肌纤维化、减轻心脏重塑作用。从而揭示了芪玄益心胶囊药效作用的主要机理。
参考文献：
[1]. LEPTIN单克隆抗体的制备及其应用性探索[D]. 王永刚. 上海医药工业研究院. 2000
[2]. 八肽胆囊收缩素对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的作用及其机制探讨[D]. 杨世方. 河北医科大学. 2003
[3]. 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者炎症因子与动脉粥样硬化相关性研究[D]. 李翀. 南京医科大学. 2007
[4]. 芪玄益心胶囊抗实验性糖尿病冠心病大鼠心肌缺血及对其细胞膜I_（tol）影响的研究[D]. 翟铁军. 黑龙江中医药大学. 2005