（通河县疾病预防控制中心；黑龙江通河150900）
【摘要】目的 分析探讨胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157的效果，为临床提供参考依据。方法 选择100例细菌感染体作为研究对象，胶体金颗粒制备使用柠檬酸三钠还原法，标记抗体使用Ecoli 0157单克隆抗体，Ecoli 0157单克隆抗体的包被载体使用硝酸纤维膜，并制成GICA的检测条，检测条上金标记抗体和标本中的Ecoli 0157结合后，应利用硝酸纤维膜的层析作用移动，直至膜上的固相抗体结合可见红色条带，检测结束后，对胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度、检测条阳性率进行观察。结果 胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度为103cfu/ml,检测条阳性份数共50份，其中包括30例大肠杆菌0157阳性标本，另20例经标本鉴定疑似为弗劳地枸橼酸杆菌。结论 胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157具有较高的检测价值，具有较高的敏感度，具有操作简便、易于判断的优点，可对标本进行快速的筛查，适合在临床中应用和推广。
关键词：胶体金标记免疫层析法；大肠杆菌0157；效果
目前对病原体进行鉴定的主要方法为细菌培养，但是该鉴定方法的耗时较长、费用较高，不能在短时间内满足临床快速诊断的要求，因此，如何采取有效的鉴定方法对大肠杆菌0157进行检测已成为临床探讨的重要议题。本文为进一步探究胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157的效果，特选择了100例细菌感染体作为研究对象，利用硝酸纤维膜的层析作用移动，直至膜上的固相抗体结合可见红色条带，检测结束后，对胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度、检测条阳性率进行观察，最后得出“胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157具有较高的检测价值”这一结论，现作如下报告。
1 患者的基线资料和方法
1.1 患者的基线资料
选择100例细菌感染体作为研究对象，保存菌株均符合中国疾病预防控制中心传染病预防控制所的诊断标准，其中包括29例铜绿假单胞菌、15例增多性李斯特菌、30例金黄色葡萄球菌、26例表皮葡萄球菌，所有细菌均购于中国医学细菌保藏管理中心，产肠毒素性大肠杆菌33例、肠侵袭性大肠杆菌37例、致病性大肠杆菌30例。
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1.2 方法
选择100例细菌感染体作为研究对象，胶体金颗粒制备使用柠檬酸三钠还原法，标记抗体使用Ecoli 0157单克隆抗体，Ecoli 0157单克隆抗体的包被载体使用硝酸纤维膜，并制成GICA的检测条，检测条上金标记抗体和标本中的Ecoli 0157结合后，应利用硝酸纤维膜的层析作用移动，直至膜上的固相抗体结合可见红色条带，检测结束后，对胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度、检测条阳性率进行观察。
在胶体金标记免疫层析法检测条的加样端加入150ul的增菌样品，与此同时，在样品检测条的另一端爬行，将金标记抗0157抗体溶解并一起移动，如果样品中含有Ecoli 0157，硝酸纤维膜上包被抗0157抗体区则显示红色的胶体金，如果样品中不含有Ecoli 0157，硝酸纤维膜上包被抗0157抗体区则不显示红色的胶体金，强阳性标本在2分钟内即可在检测线内见到红色条带，弱阳性标本则需在10-15分钟内判读结果。
1.3 观察指标
具体的观察指标包括灵敏度、检测条阳性率，以探讨胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157的效果。
1.4 数据处理
灵敏度、检测条阳性率使用SPSS19.0软件进行统计学处理和数据分析，以95%作为可信区间，检测条阳性率采用计数资料表示，采用卡方检验进行对比分析，灵敏度采用计量资料表示，采用t检验，当两组患者的P值小于0.05时，代表两组患者的计数资料或者计量资料差异具有统计学意义。
2 结果
本研究结果显示，胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度为103cfu/ml,检测条阳性份数共50份，其中包括30例大肠杆菌0157阳性标本，另20例经标本鉴定疑似为弗劳地枸橼酸杆菌。
3 讨论
相关的临床研究资料表明，肠出血性大肠埃希菌是引起肠道感染性疾病的重要原因，目前已成为严重的全球性的公共卫生问题，在许多国家都爆发流行，大肠埃希菌0157会导致出血性肠炎[1]，且约有10%的患者会发展成为溶血性尿毒综合征或者血栓性血小板减少性紫癜，死亡率高达30%以上。因此，采取有效的临床检测手段对大肠杆菌0157进行鉴定十分的重要[2]。
山梨醇麦糠凯琼脂培养基是检测大肠杆菌0157的常用方法，该检测方法选择山梨醇发酵阴性的大肠杆菌，进一步用生化和血清学试验进行鉴定，在一定程度上可以发挥较好的鉴定效果，但是该检测方法的仪器较为昂贵，费用较高，其推广难度相对较大[3]。
胶体金标记免疫层析法检测使用胶体金标记免疫层析双抗体夹心法，层析作用与膜上抗Ecoli 0157抗体结合后，可以对被测物起到明显的浓缩作用，增强胶体金免疫层析检测的灵敏度和特异性，且该检测方法采用GICA检测条具有快速、简便、不需要任何仪器设备的优点,与传统的GICA试剂相较，可有效减少操作步骤，具有较高的灵敏度，且造价低廉，适合在基层医院中推广。
本研究结果表明，胶体金标记免疫层析法检测的灵敏度为103cfu/ml,检测条阳性份数共50份，其中包括30例大肠杆菌0157阳性标本，另20例经标本鉴定疑似为弗劳地枸橼酸杆菌，这说明，GICA检测条与弗劳地枸橼酸杆菌存在一定的交叉反应，检测过程中，可以通过简单的生化试验进行区分，以进一步提高检测的准确性。
综上所述，胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌0157具有较高的检测价值，具有较高的敏感度，具有操作简便、易于判断的优点，可对标本进行快速的筛查，适合在临床中应用和推广。
【参考文献】
[1]崔希,熊齐荣,熊勇华等.免疫磁分离结合胶体金免疫层析法快速检测大肠杆菌O157∶H7[J].分析化学,2013,41(12):1812-1816.
[2]王鹏,潘世扬,王芳等.NJ001特异性抗原胶体金免疫层析试纸条的研制与初步应用[J].中华检验医学杂志,2014,37(7):548-552.
[3]孙济宇,罗晓庆,白光锐等.胶体金免疫层析法床旁快速检测烧伤创面铜绿假单胞菌的效果[J].中华烧伤杂志,2014,30(3):270-272.
论文作者:王佳
论文发表刊物:《医师在线》2016年6月第12期
论文发表时间:2016/8/8
标签：层析论文; 胶体论文; 大肠杆菌论文; 免疫论文; 标记论文; 抗体论文; 灵敏度论文; 《医师在线》2016年6月第12期论文;