（重庆市巴南区中医院 401320）
摘要：目的 探讨重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）对鼻咽癌细胞CNE-2体外抗肿瘤作用的研究。方法 以人鼻咽癌细胞CNE-2为细胞模型，用不同浓度rhTNF-α作用于体外培养的CNE-2鼻咽癌细胞，用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测胸苷磷酸化酶（TP）。结果 rhTNF-α浓度分别为10 ng/ml，50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml时，TP表达水平分别为5.02±0.32ng/ml，15.38±1.05ng/ml，5.86±1.63ng/ml，44.31±2.17ng/ml，差异有统计学意义（F=23.43，P<0.01）。结论 rhTNF-α在体外能有效抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖，能剂量依赖性上调胸苷磷酸化酶的表达。
关键词：rhTNF-α；鼻咽癌；CNE-2细胞；胸苷磷酸化酶
鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤之一，其发病率一直居于前例[1]。重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）是有抗肿瘤活性的细胞因子，但肿瘤细胞的异质性及敏感性各异，因而TNF-α存在毒副作用，限制了其临床应用。而新型重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）具低毒副作用、靶向性强等优点，其体外抗肿瘤效能明显升高[2]。胸苷磷酸化酶（TP酶）的表达水平能够预测肿瘤对药物的敏感性[3]。本研究为体外实验，选择人鼻咽癌细胞CNE-2为研究对象，探讨不同剂量rhTNF-α对TP酶的调节作用，为鼻咽癌的个体化治疗提供参考。
1材料及方法
1.1细胞系 人鼻咽癌细胞CNE-2由中山大学医学院生化教研室细胞库提供。本研究起始于2016年2月，止于2017年1月。
1.2试剂 人rhTNF-α购于厦门特宝生物工程有限公司；胸苷磷酸化酶（TP）检测试剂盒购于美国B&D公司。
1.3 方法
1.3.1 细胞培养 将鼻咽癌CNE-2细胞接种于体积分数为10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中，在37℃、5%CO2培养箱中培养，2-3天传代1次。
1.3.2 检测肿瘤细胞中TP水平 采用酶联免疫法（ELISA），严格参照ELISA试剂盒操作手册。
1.4 统计学方法 采用SPSS20.0进行数据处理，计量资料采用x±s表示，多组间计量资料的比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1不同剂量rhTNF-α对鼻咽癌CNE-2细胞TP水平的影响
鼻咽癌CNE-2细胞TP表达水平在不同剂量rhTNF-α的作用下表达水平不同，随着rhTNF-α浓度的增加TP表达水平逐步升高，差异有统计学意义（F=23.43，P<0.01），各组间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
表1 不同剂量RhTNF-α对CNE-2细胞TP酶水平的影响（x±s）
注：a与对照组比较，t值分别为13.68，21.56，25.07，33.56，P<0.05；b与试验组A比较，t值分别为16.34，21.72，31.02，P<0.05；c与试验组B比较，t值分别为9.36，13.60，P<0.05；d与试验组C比较，t值为11.77，P<0.05
3 讨论
鼻咽癌在头颈部恶性肿瘤中占首位，可能与遗传因素和居住环境的空气受污染有关。筛选安全有效、副作用小的肿瘤靶向抗肿瘤药物一直是近年来的研究热点，TNF-α是迄今为止发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子，在体内外能特异性地直接杀伤肿瘤细胞，rhTNF-α既具有hTNF-α活性，稳定性较好，又具有导向杀伤作用，为TNF-α肿瘤靶向治疗开创了新思路[4]。TP酶是胸苷嘧啶代谢过程中的关键酶，在恶性肿瘤组织中活性明显高于周围正常组织3-10倍，且与肿瘤的浸润和转移有关，已成为化疗的靶向分子[5]。本研究中，随着rhTNF-α浓度的增加TP表达水平逐步升高（F=23.43，P<0.01），各组间两两比较差异显著（P<0.05），提示rhTNF-α能明显提高鼻咽癌细胞CNE-2 的TP表达水平，与报道[6]相吻合。200ng/ml的rhTNF-α作用时TP表达水平与10ng/ml时比较提高8倍多，说明了rhTNF-α对肿瘤细胞TP的调节作用有肿瘤细胞依赖性及剂量依赖性。rhTNF-α是如何上调TP酶蛋白的具体机制尚不清楚，研究[7]发现TNF-α可以提高结肠癌细胞的TP表达，主要通过II型受体（TNF-a R2）而不是I型受体来实现，TP活性的提高与TPmRNA的表达水平有关，R2受体在上调TP酶蛋白的表达中起了重要作用。
总之，适当剂量rhTNF-α能明显上调CNE-2肿瘤细胞中TP的表达，毒副作用较少，是鼻咽癌治疗的一种可行方法。
参考文献
[1]连仕锋，季明芳，吴标华，等.EB病毒血清学筛查鼻咽癌高、中危人群的随访研究[J].中华预防医学杂志，2015，49（1）：26-30.
[2]黄璟，周毅.肿瘤坏死因子α及其抑制剂的研究进展[J].国际口腔医学杂志，2015，42（1）：63-68.
[3]叶钿均，王绮雯，张继民，等.慢病毒转染胸苷磷酸化酶基因增强5'-脱氧氟尿苷抗结肠癌细胞活性[J].中华肿瘤杂志，2015，37（1）：18-24.
[4]李敏，李舸，贾欢欢，等.不同浓度 hTNFα对软骨细胞及其基质相关基因表达的影响[J].中国骨质疏松杂志，2015，24（5）：541-545.
[5]吴月琴，白文启，李灵敏，等.结直肠癌中5-氟尿嘧啶代谢酶的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2015，22（6）：619-623，627.
[6]周勇军，李龙平，王新华，等.rhTNF-α对人肝癌细胞HepG-2体外抗肿瘤作用研究[J].实用检验医师杂志，2015，21（3）：158-163.
[7] 王绮雯，刘剑，叶钿均，等.基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立[J].广东医学，2015，22（1）：30-34.
第一作者，职称：副主任医师。学历：本科。姓名：李鏖。性别：男。出生年月：19690409。籍贯：綦江区打通镇。研究方向：耳鼻咽喉科。单位：重庆市巴南区中医院。地址：巴南区龙洲湾龙德路20号。邮编：401320。通信作者姓名：曾钟杰，性别：男，出生年月：196503，籍贯：巴南区，研究方向：耳鼻咽喉头颈外科，单位：重庆市巴南区人民医院，地址：重庆市巴南区鱼洞新农街2号，邮编：401320，职称主任医师，学历大学本科，第二作者 曾原 同医院同科室。
论文作者:李鏖1 曾钟杰2（通讯作者） 曾原2
论文发表刊物:《航空军医》2018年12期
论文发表时间:2018/8/29
标签：肿瘤论文; 鼻咽癌论文; 癌细胞论文; 鼻咽论文; 细胞论文; 磷酸化论文; 巴南区论文; 《航空军医》2018年12期论文;