中国人民解放军第四六三医院肿瘤介入科 辽宁沈阳 110042
【摘 要】目的：探明SUFU、GLI1基因在正常胰腺组织以及胰腺癌和癌旁组织中的mRNA表达，分析miR-223的表达与GLI1、SUFU基因转录之间的关系，以及SUFU、GLI1基因在胰腺癌发病过程中的作用。方法：对正常胰腺组织以及胰腺癌和癌旁组织进行总RNA的提取，采用Real-time PCR方法，检测SUFU、GLI1基因在mRNA水平上的表达，分析其与miRNA-223的表达量之间的关系。结果：以正常的胰腺组织为对照，mRNA的表达量以中位数和四分位数表示，胰腺癌组织中GLI1mRNA的表达量为4.81，胰腺癌癌旁组织中的表达量为1.99，两组之间存在显著差异（P=0.042）。胰腺癌组织中SUFU mRNA表达量为1.23，胰腺癌癌旁组织的表达量为1.72，两组之间无显著差异（P>0.05），胰腺癌癌旁组织中GLI1 mRNA的表达量与miR-223在胰腺癌癌旁组织中的表达量之间存在一定程度的相关性（r=0.432，p=0.005）。SUFU、GLI1 mRNA在胰腺癌组织中的表达量与miR-223在胰腺癌表达变化无明显相关性（P＞0.05）。结论：GLI1mRNA参与了胰腺癌的发生，而SUFU mRNA与胰腺癌发生关系不大。GLI1基因及miR-223在胰腺癌的发生中可能起到一定的协同作用。
【关键词】胰腺癌，miRNAs，miRNA-223，GLI1，SUFU
胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤，由于其缺乏早期诊断的标志物，以至于大多数胰腺癌患者明确诊断时已经发展到了晚期，由此错过了手术治疗胰腺癌的最佳时期[1]。目前胰腺癌的死亡率很高，各国统计5年生存率仅为2%～10%[2]。因此，本文通过检测胰腺癌组织和配对的癌旁组织中 SUFU 和 GLI1 的表达，以此分析与miR-223在其表达量之间的关系，探究胰腺癌发生发展过程中这两者之间有无相关性。
1材料与方法
1.1实验材料
本实验所取材料为我院的46例胰腺癌患者手术标本，手术时分别取切除部分胰腺癌组织和癌旁组织。46名胰腺癌患者中男性26名，女性20名，年龄36-77岁。另外3例正常胰腺组织为对照组进行试验。手术切除的标本立即进行液氮保存。
1.2研究方法
逆转录-聚合酶链式反应（Real-time PCR）
按照日本TOYOBO公司的试剂盒（FSK-100）说明书进行逆转录和PCR扩增。miRNA逆转录反应（RT）的反应条件：37℃，15min→85℃，5second→85℃，5second，扩增产物于4℃保存。miRNA的cDNA扩增条件：95℃ 15 sec→60℃60 sec→4℃ hold，循环45次。
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1.3 统计方法
利用 SPSS13.0 软件进行数据统计，数据以X ±s 或中位数（四分位数）表示，无具体统计学方法（t检验或Spearman相关分析）
2 结果
2.1 胰腺癌组织中 SUFU、GLI1mRNA的表达
对胰腺癌组织标本中的SUFU、GLI1mRNA和U6（内参）进行了Realtime-PCR扩增检测。选取U6为内参，胰腺癌组织中GLI1mRNA的相对表达量为4.678±0.2267，而胰腺癌癌旁组织的相对表达量为2.050±0.2374（N=6），两组之间存在显著差异（P< 0.0001）（图2.2.2），胰腺癌组织中SUFU mRNA表达量为1.160 ±0.1048胰腺癌癌旁组织的表达量为1.520 ±0.1422（N=6），两组之间无显著差异（P=0.0688）。
2.2 胰腺癌组织中miR-223的表达
对胰腺癌标本组织中的miR-223和U6进行了Real-time PCR。正常胰腺组织miR-223的表达量为1.00，胰腺癌癌旁组织中miR-223的表达量为1.52±1.02（N=6），胰腺癌组织中miR-223的表达量为3.47±1.45（N=6），miR-223在胰腺癌癌旁组织中的表达量与正常胰腺组织比较统计无差异（P=0.444）而在胰腺癌组织中的表达量与正常胰腺组织比较统计有显著性差异（P=0.001），此外，在癌旁组织中的表达和胰腺癌组织中表达有统计有显著性差异（P=0.011）。
2.3 胰腺癌组织中 SUFU、GLI1mRNA 的表达量与 miR-223表达量相关性分析
分析SUFU、GLI1mRNA的表达量与miR-223的表达量之间的关系，结果提示：miR-223在胰腺癌癌旁组织中的表达量与GLI1mRNA在癌旁组织中表达量存在一定相关性（Spearman r=0.432，p=0.005）。
3 讨论
细胞信号转导作为一种细胞之间信号传递的形式，在肿瘤的发生发展过程中起到了重要的作用。
本实验的结果显示，与正常的胰腺组织相比较，GLI1 mRNA在胰腺癌组织中的表达量明显高于癌旁组织中的表达量，表明Hedgehog信号转导通路中的GLI1在胰腺癌的发生过程中起到了一定的作用。而癌旁组织中GLI1mRNA与miR-223的表达量之间有一定的相关性。在胰腺癌的发生过程中GLI1基因及miR-223的表达发挥了一定的作用，至于GLI1基因及miR-223在胰腺癌发生过程中是如何发生协同作用的，以及如何通过调控GLI1基因的转录和miR-223的表达来控制胰腺癌的发生是我们未来可以努力攻克的方向。希望未来的研究能够为临床医生早期诊断胰腺癌提供方便，提高胰腺癌患者的生存率和生活质量。
参考文献：
[1] Tascilar M，Skinner HG，Rosty C，Sohn T，Wilentz RE，Offerhaus GJ，Adsay V，Abrams RA，Cameron JL，Kern SE，Yeo CJ，Hruban RH，Goggins M.The SMAD4 protein and prognosis of pancreatic ductal adenocarcinoma [J].Clin Cancer Res，2001，7：4115-21.
[2] Bartel DP.MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and function [J].Cell，2004，116：281-297.
作者简介：
钱钧 1975.11.13 副主任医师 硕士 籍贯锦州。
论文作者:钱钧
论文发表刊物:《航空军医》2015年7期
论文发表时间:2015/10/16
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