毛建平[1]2004年在《mRNA结构靶点筛选新方法RASS的研究》文中认为尽管反义核酸、Ribozyme、DNA enzyme以及双链RNA干涉小分子与mRNA分子在一级结构上严格按Watson-Crick碱基匹配原则互补配对发挥作用，然而能有效结合发挥作用的却是那些接近mRNA分子高度折迭结构的“靶点”的反义序列。本工作的主要目标是建立mRNA靶点的筛选方法，运用反义设计技术进行基因治疗和基因功能研究。 首先，采用单链寡核苷酸随机序列文库，首次应用3’末端固定方法使mRNA在液相中的自然状态下与其进行杂交，通过洗脱、筛选，获得mRNA的结合文库序列，阐明mRNA全部结构靶点，建立了一种新的mRNA靶点筛选的分子生物学方法RASS(RNA accessible sites screening)。 其次，用RASS方法和文献报道的MAST(mRNA accessible sites tagging)技术同时对模型基因--绿色荧光蛋白GFP的mRNA进行了靶点筛选，应用RASS获得GFP mRNA上3个结合靶点1，2，4，采用MAST方法获得了1，2，3和4等4个靶点，其中1、2、4与RASS的3个靶点完全相同。体外，4个靶点中1、2、4号靶点的反义核酸有效，2和4号的结合效果最好；细胞内1、2、4号的反义核酸明显而特异抑制了荧光蛋白表达，2号反义核酸突变2个碱基的对照组在体外体内均丧失了作用效果。 对2号靶点设计了向5’和向3’移位的多条反义核酸(分别错位4个和8个碱基的反义核酸A2-8、A2-4、A2+4、A2+8)，实验表明，只有2号靶点反义核酸的作用效果最好，据RASS所设计合成的反义核酸序列准确，是最佳设计的反义核酸序列。 10-23DNA enzyme的体内体外作用活性和反义核酸组完全相同，四个靶点的2和4号靶点的10-23DNA enzyme切割效果最好，1号其次，3号效果不佳。细胞内抑制效果与之相同。10-23DNA enzyme的体外体内作用活性正确反映了反义核酸结合有效性，提出：10-23DNA enzyme可以作为体外评价mRNA结构靶点的工具。博}一学位论文论文摘要 设计l小23DNA enzyme对照组时，如果突变错配的碱基位于切割位置的左右碱基使10一23DNA enzyme突环结合能力降低，体外丧失了对mRNA的降解能力，但在细胞内仍抑制GFP基因表达，10一23DNA enzyme的结合臂序列发挥了反义核酸作用。10一23DNAenzyme对照组突变10一23DNA en即me两个结合臂中间碱基，使10一23DNA enzyme保留突环结合能力、降低两臂结合能力，则丧失了对mRNA的降解能力，细胞内也丧失了抑制GFP基因表达。 !o一23DNA enzyme自身具切割mRNA的活性，用实验证明了10一23DNA enzyme的侧翼结合臂序列与RNA互补结合以后能发挥诱导RNaseH的酶促降解mRNA作用，认为10一23DNA enzyme能产生比反以核酸更理想的基因抑制效果。证明DNA enzyme在细胞内具有双重活性，比反义核酸有更好的应用潜力。 第叁，将RAsS方法和MAsT方法、计算机软件RNAstructure3.71模拟方法对GFP的靶点，MAsT方法和RNAstructure3 .71模拟方法对小鼠Fas基因，兔p一globin基因片段的靶点进行了比较。 RNAstructure3.71模拟长度较短的基因靶点正确。据MAST技术获得的兔(oryetolagus eunieulus)p一globin基因mRNA(属于122nt的小基因片段)的靶点2个，和计算机软件RNAstructure3.71模拟分析的位点，也和寡核普酸微阵列杂交技术筛选获得的靶点结果(NatazieM，1 997)完全一致。 已经证明绿色荧光蛋白(GFP) mRNA4个结构靶点中2，4号是高效结合靶点，MAsT技术获得了4号，但是它把2号靶点当作了低频率、低效靶点从而忽略了2号靶点，得到了3号无效靶点;RASS得到的靶点均有效，可能因为RNA“随机”标记技术导致了MAST对有效靶点的忽视;而R了、55采用末端标记，能够获得全部有效靶点。 RNAstrueture3.71软件分析的靶点与GFP的4个靶点中有3个相同，约有50%一60%能被预测得到。MAST筛选了1 .skb小鼠Fas基因2个靶点(1，2)，只有一个最有可能被RNAstructure软件预测分析得到(靶点2)，尚有许多其它可能的靶点。软件分析模拟推荐的结构靶点较多，随着基因长度增加计算机软件分析确认靶点的难度增大，预测的靶点需要实验验证，但是它对实验筛选靶点、设计反义核酸有辅助价值。RAss和MAsT等实验筛选方法能筛选各种长度基因mRNA的靶点，比软件预测具有简单、快捷和有效的优，点。博卜‘学位论义论文摘要 第四，由于RASS和MAST方法在应用中，需要一条一条地测定成百条序列，1次测序反应获得1条文库小片段序列，测定过程繁杂，消耗大量人力和物力，不利于其在普通实验室推广应用。本研究自行建立了两个专利方法，其一采用小序列酶切、连接、克隆测序，其二通过设计搭桥引物、扩增达到连接而完成连接测序的目的。文库小片段序列通过连接进行测序，1次测序反应可以获得8至20条文库小片段序列，其费用约为原始方法的二十分之一至八分之一。此方法快速而经济，能满足普通实验室应用凡ASS，MAS’I’筛选靶点的需求。
李奇, 杨俊, 杨简, 杨英[2]2019年在《环状RNA与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系》文中研究说明环状RNA(circRNAs)具有高度保守,结构稳定,表达丰富以及组织特异性与发育阶段特异性表达等特征。circRNAs能够从调控基因转录、miRNA海绵以及调控蛋白的翻译与表达等多种途径来发挥其生物学功能,并显示出对心血管疾病的重要调控能力。因此,circRNAs作为生物标志物和治疗靶点在冠心病的诊断和治疗中发挥重要作用。本文对circRNAs的分类、结构特点以及生物学功能进行归纳总结,并简要介绍其在冠心病中的最新研究进展,以期为诊断和治疗冠心病提供新思路。
杨哲, 李建基, 黄赞松[3]2019年在《原发性肝癌靶向药物治疗试验与临床研究进展》文中研究说明肝癌是一种高发的消化系统恶性肿瘤,传统的治疗方法对于中晚期肝癌疗效不佳,索拉非尼是第一个用于肝癌治疗的分子靶向药物,靶向药物的出现为中晚期肝癌患者提供了新的选择.近年来,特别是免疫治疗的加入,已发现许多新型靶向药物可明显改善中晚期肝癌患者的预后,因此靶向药物成为了研究热点.本文就近年来肝癌靶向药物治疗试验及临床研究进展做一综述.
参考文献：
[1]. mRNA结构靶点筛选新方法RASS的研究[D]. 毛建平. 中国人民解放军军事医学科学院. 2004
[2]. 环状RNA与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系[J]. 李奇, 杨俊, 杨简, 杨英. 实用医学杂志. 2019
[3]. 原发性肝癌靶向药物治疗试验与临床研究进展[J]. 杨哲, 李建基, 黄赞松. 世界华人消化杂志. 2019