（成都中医药大学 四川 成都 611137）
【摘要】 目的：建立伯氏疟原虫青蒿素抗性、氯喹抗性鼠疟模型，考察伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟与氯喹抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效差异。方法：伯氏疟原虫常规株经青蒿素逐量递增给药法连续培养16代，建立伯氏疟原虫青蒿素抗性株鼠疟模型；比较伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟与氯喹抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效差异。抗疟药效实验采用四天抑制给药法，采血镜检药后24小时原虫血症密度、转阴率及28天治愈率。结果：五种抗疟药分别对氯喹抗性鼠疟及青蒿素抗性鼠疟治疗，24h原虫血症密度均有明显差异（P<0.05）；氯喹抗性鼠疟、青蒿素抗性鼠疟对本芴醇均有可疑耐药（原虫血症密度>0.005）；复方蒿甲醚对氯喹抗性鼠疟药后24h的疗效优于氯喹（P<0.05），对青蒿素抗性鼠疟药后24h的疗效优于本芴醇。复方蒿甲醚及蒿甲醚对氯喹抗性鼠疟28天治愈率分别为50%和100%，对青蒿素抗性鼠疟28天治愈率分别为70%和100%。结论：伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效普遍差，而氯喹抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效较好。
【关键词】 青蒿素抗性鼠疟模型；氯喹抗性鼠疟；疗效
【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）20-0196-02
1.引言
上世纪60年代中国的医药工作者从中药青蒿中提取的青蒿素成为抗氯喹恶性疟的最佳药物。随着多个高效速效青蒿素衍生物的诞生以及复方类药物的开发应用，距离在全球范围内控制与消灭疟疾的目标愈来愈临近。然而近40年来，由于青蒿素及其衍生物单方不规范的广泛应用，逐渐出现恶性疟对青蒿素类药物的敏感性下降的迹象，而且证实青蒿素抗性疟已出现[7-8]。本实验目的是初步考察伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟与氯喹抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效差异的研究。意义是为青蒿素抗性疟耐药机制的研究奠定模型基础，也为复方蒿甲醚的技术研究提供依据。
2.实验研究
2.1 材料
2.1.1实验动物：
昆明小鼠，雌雄各半，标准体重18～22g。华硕实验动物中心提供，许可证scxk(川)2008-24。实验室温200C～240C，相对湿度50%～80% 。
2.1.2主要器材、试剂与仪器
吉姆萨染液、磷酸二氢钾、磷酸氢三钠、柠檬酸钠 、吐温-80、聚乙二醇400、金龙鱼菜籽油、电子天平、电热恒温干燥箱、光学显微镜及莱卡摄像头（日本奥林巴斯公司）、Adobe Photoshop CS3（ Adobe）
2.1.3 实验药物：
提纯蒿甲醚净含量99.4%，提纯本芴醇净含量99.8%，提纯青蒿素净含量99.0%，购置于成都川湘生化有限公司（批号101230，批号101012，批号091230）；
磷酸氯喹片，规格：250mg×1000片，购于西南制药二厂（批号0003042）。
2.2 方法及技术路线
伯氏疟原虫氯喹抗性株的复苏、血传保种及液氮冻存方法及传代动物同伯氏疟原虫常规株。
伯氏疟原虫氯喹抗性株维持方法，依文献进行---血传2代小鼠感染率达5%时（接种后1～2天），给药磷酸氯喹40mg/kg一次以维持抗性，维持抗性后待原虫感染率达20%后血传下一代，此后每隔一代维抗一次。
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伯氏疟原虫氯喹抗性株抗性检测方法，依文献进行——血传小鼠感染率达5%时（接种后1～2天），给予400mg/kg磷酸氯喹连续三天，停药后24h存活的小鼠查见原虫血症，证实此氯喹抗性株为高度抗性耐药株。
2.2.1伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟与氯喹抗性鼠疟对青蒿素类药物疗效差异
2.2.1.1实验对象
伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟、伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟
2.2.1.2实验药物的配制
①复方蒿甲醚，依据混悬液配置要求（油 25%，聚乙二醇20%，吐温-80 2.5%，水52.5%），药液标准0.208mg/0.4ml。②蒿甲醚的配制（同复方蒿甲醚，药液标准为1.6mg/0.4ml。③青蒿素16mg/kg/d④本芴醇的配制（同复方蒿甲醚），药液标准为1.12mg /0.4ml。⑤磷酸氯喹组给药标准2mg/0.4ml/d。
2.2.1.3伯氏疟原虫鼠疟模型的建立
伯氏疟原虫青蒿素抗性鼠疟模型的建立同氯喹抗性鼠疟模型，分别血传接种60～80只小鼠，称重分组，雌雄各半。同时建立伯氏疟原虫常规鼠疟模型，血传接种60～80只小鼠，称重分组，雌雄各半。
2.2.1.4抗疟疗效评价标准
28天内100%治愈鼠疟需满足以下标准：停药后24h未查见原虫血症或原虫血症＜0.005；7天后每周一次镜检原虫，28天内无复燃为治愈。
2.2.1.5统计学分析
计量资料均用SPSS17.0进行单因素方差分析，组间比较采用LSD法。P＜0.05为有统计学意义。
3.结果
3.1 复方蒿甲醚、蒿甲醚、青蒿素、本芴醇和氯喹治疗伯氏疟原虫常规鼠疟后，均使原虫生长受到抑制,药后24h的原虫血症密度无明显差异（P>0.05）,转阴率较高，均无复燃，28天治愈率均为100%。
3.2 青蒿素抗性鼠疟、氯喹抗性疟对抗疟药的疗效差异
①复方蒿甲醚处理氯喹抗性鼠疟、常规鼠疟给药后24h原虫血症密度与青蒿素抗性鼠疟相比有显著差异（P<0.05），但是原虫血症均＜0.005无临床意义；
蒿甲醚处理氯喹抗性鼠疟后24h原虫血症密度与青蒿素抗性鼠疟相比有显著差异（P<0.05），但原虫血症均＜0.005无临床意义；青蒿素处理常规鼠疟给药后24h原虫血症密度与青蒿素抗性鼠疟相比有显著差异（P<0.05），但两组原虫血症＜0.005无临床意义；本芴醇对氯喹抗性鼠疟、常规鼠疟处理后24h原虫血症密度与青蒿素抗性鼠疟相比无明显差异（P>0.05），但是氯喹抗性鼠疟本芴醇组给药后24h原虫血症≥0.005具有临床意义；氯喹处理氯喹抗性鼠疟后24h原虫血症与青蒿素抗性鼠疟相比有显著差异（P<0.05），氯喹抗性氯喹组后24h原虫血症≥0.005具有临床意义。
4.小结与讨论
本实验结果显示蒿甲醚对青蒿素抗性、氯喹抗性鼠疟疗效较好，28天治愈率高于复方蒿甲醚。表明伯氏疟原虫青蒿素抗性株对复方蒿甲醚的敏感性有下降的趋势。复方蒿甲醚是减量增效延缓抗药性的优秀配方。所以，从新的角度进一步对复方蒿甲醚进行技术研究以及继续开展青蒿素类药物抗疟复方的研究依然是未来抗疟药的趋势和要求。
【参考文献】
[1] 陈颖丹,林宝英,张家埙.伯氏疟原虫青蒿素抗性系的培育研究，中国寄生虫学与寄生虫病杂 志 2002年2月第20卷第1期:37-38.
[2] 陈颖丹,林宝英, 张家埙,伯氏疟原虫青蒿素抗性产生于多抗性基因pbmdr-1的关系抗性基因pbmdr一1的关系,中国寄生虫病防治杂志，2001年10月15卷第5期:267-270.
[3] 屠呦呦，青蒿素及青蒿素类药物[M]，化学工业出版社，2009:233-238.
[4] 刘德全，邱持平,我国抗氯喹恶性疟的抗性程度及其地理分布[J]，寄生虫学与寄生虫病杂志，1986，4：81-85.
[5] 庞学监，王光泽，复方蒿甲醚治疗海南省恶性疟33例的效果[J]，海南医学1996 (03 )：141-142.
课题基金来源:.国家“重大新药创制”科技重大专项“专利到期药再创新”：抗疟专利到期药物大品种－复方蒿甲醚片的技术再创新研究（2012ZX09202101-005）；
论文作者:孙雪英,代勇,徐志慧,韩韬,梁昊,孙红霞
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第20期供稿
论文发表时间:2015/9/30
标签：抗性论文; 氯喹论文; 疟原虫论文; 青蒿素论文; 原虫论文; 甲醚论文; 复方论文; 《医药前沿》2015年第20期供稿论文;