榄香烯联合奥沙利铂作用于肺腺癌A549细胞株的实验研究论文_董超1,白静慧2通讯作者

(1.辽宁中医药大学 辽宁沈阳 110032;2.辽宁省肿瘤医院 110042)

摘要:目的 探讨榄香烯联合奥沙利铂诱导人肺腺癌A549细胞生长抑制和凋亡的作用。方法 将人肺腺癌A549细胞株进行传代培养,将不同浓度榄香烯以及奥沙利铂作用于细胞株上,MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。结果 榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml,奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。联合组抑制率明显高于单药组。结论 两者联合在一定浓度范围内呈现出协同的抗肿瘤作用。

关键词:榄香烯;奥沙利铂;肺腺癌;增殖抑制

榄香烯是近年来从温郁金中提取的一种有效成分。它具有广谱抗肿瘤、免疫保护等作用。从中提取的β-榄香烯对多种细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用[1]。本实验研究旨在研究不同浓度的榄香烯联合奥沙利铂作用于处理的 A549 细胞株上,检测细胞的增殖抑制率,以更好的指导临床用药。

1.材料与方法

1.1材料与试剂

肺腺癌细胞株A549由中国医科大学提供;榄香烯乳注射液由大连金港制药有限公司提供;奥沙利铂购自江苏恒瑞制药有限公司;1640 培养基、小牛血清由上海实生细胞生物技术有限公司提供;四甲基偶氮唑盐、二甲基亚砜由美国Sigma公司提供。上述药品均按说明书保存,现用现配。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养

将人肺腺癌 A549 细胞放置于1640 培养基(含10%小牛血清、青霉素100 ug/L,庆大霉素100 ug/L),在 37℃、5%CO 2、饱和湿度培养箱中培养,待其生长良好、铺满瓶壁的70%-80%,用胰蛋白酶消化传代培养。

1.2.2细胞增殖抑制实验

取对数生长期的肺癌A549细胞株按5*104个/孔分别接种于96孔板上,每孔加入150 μL的1640培养液。待A549腺癌细胞充分贴壁后,倒出培养液,分别加入不同质量浓度奥沙利铂(1、7、14、28、56、112μg/ml)和榄香烯(1、5、10、40、80、160μg/ml),每个浓度设6个平行孔,继续培养24,48 h。培养结束后每孔加入MTT溶液(5mg/ml)25ul,继续孵育4小时,小心吸弃孔内上清液。加入二甲亚砜200ul/孔,振荡至结晶物充分溶解,在酶联免疫测定仪上选择570nm波长。按下式可计算出各浓度组的抑制率。以上实验各重复3次,求平均值。

细胞抑制率=[对照组吸光值(A)—实验组吸光值(A-)]/对照组吸光值(A)*100%

按以下公式计算Q值并判断两药的联合效应:Q=E(A+B)/[EA+(1—EA)*EB],其中,E(A+B)为两药合用的抑制率,EA、EB为两药单用的抑制率。Q为0.85—1.15表示两药作用相加,Q〉1.15表示两药作用协同,Q〈0.85表示两药作用相互拮抗。

1.2.3形态学观察

在收集 A549细胞前,将培养瓶放置在倒置显微镜下进行观察;比较各组在经过不同浓度药物处理后细胞形态、大小及贴壁情况。

1.2.4统计学分析

所得数据均用SPSS 22.0软件进行数据处理。以上所有实验均重复3次。所有数据用± s表示、多个样本比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验,检验水准 α = 0.05。P < 0.05表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 榄香烯、奥沙利铂对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用

MTT法检测结果表明,榄香烯及奥沙利铂对A549细胞均有明显的增殖抑制作用,且有一定的浓度和剂量依赖性。在一定范围内,随着药物浓度及作用时间的增加,其抑制率也增加。榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml。奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。

2.2榄香烯联合奥沙利铂对A549细胞的增殖抑制作用

将20μg/ml及40μg/ml的榄香烯联合7μg/ml的奥沙利铂作用于A549细胞24h,结果显示联合组抑制率明显高于单药组。但榄香烯和奥沙利铂两单药之间比较无统计学意义。见下表

3.讨论

肺癌是近年来常见的恶性肿瘤,更是位居癌症死因首位,并且其发病率仍在不断上升[2]。肺癌的预后不仅取决于早期发现,更与早期诊断、早期治疗密不可分。I和II期的NSCLC病人有望通过手术切除达到治愈。多数肺癌患者初次确诊时已经为局部晚期,临床治疗很困难[3]。目前,肺癌治疗多以化疗为主。但是大多数常用的化疗药物对肿瘤细胞缺乏特异性,并且受到化疗药物副作用、毒性和抗药性的限制,所以化疗药物在杀死癌细胞的同时,也影响正常组织细胞。其中顺铂在临床应用以来其有着无可比拟的抗癌作用,但其毒副作用也在一定程度上限制了它的使用,因此找到一种疗效高、毒性作用小的治疗方案已成为共识。而奥沙利铂的研制成功就可克服顺铂的不足之处[4]。榄香烯乳注射液也是新研制的抗肿瘤药物,其作用主要表现为激活氧化还原系统、逆转化疗耐药、诱导细胞凋亡等 [5]。部分研究指出其在阻滞细胞生长周期、诱导细胞凋亡、调节抗体免疫功能、对放、化疗的增效减毒方面具有确切的疗效。所以该实验通过两药联合应用,不仅可以提高化疗药物的治疗潜力,还可以减少全身副作用及耐药性。为肺癌的药物治疗提供基础相关依据。

参考文献

[1]高红军,秦海峰.榄香烯治疗非小细胞肺癌的作用机制研究进展[J].现代生物医学进展,2010,10(21):4149-4151.

[2]周兴芹,仇晓军,赵洪瑜,王燕,季斌. 榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响[J]. 交通医学,2010,24(03):233-235.

[3]李刚,任宏,王健生,张云锋,张靖,杜宁,孙欣,秦思达. 重组金属蛋白酶组织抑制因子-3与顺铂联合应用对肺癌细胞A549生长抑制与凋亡的影响[J]. 西安交通大学学报(医学版),2017,(03):422-426

[4]张帆. 奥沙利铂联合榄香烯对人肺癌细胞生长抑制和凋亡的体外研究[D].中国医科大学,2010.

[5]Chengcai Yao,Jie Jiang,Yuanrong Tu,Shefang Ye,Haoxin Du,Yi Zhang.β-elemene reverses the drug resistance of A549/DDP lung cancer cells by activating intracellular redox system,decreasing mitochondrial membrane potential and P-glycoprotein expression,and inducing apoptosis. Thorac Cancer. 2014 Jul;5(4):304–312.

论文作者:董超1,白静慧2通讯作者

论文发表刊物:《航空军医》2017年28期

论文发表时间:2018/2/6

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榄香烯联合奥沙利铂作用于肺腺癌A549细胞株的实验研究论文_董超1,白静慧2通讯作者
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