黄导1 李凌晨2 纳鑫2（通讯作者）
（1龙川县妇幼保健院 广东 河源 517300）
（2昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室 云南 昆明 650500）
【摘要】目的：为提高紫杉醇对乳腺癌细胞增殖的抑制作用，增强化疗药物的抗肿瘤效果，对紫杉醇和双氢青蒿素两种药物联合作用于人乳腺癌细胞检测是否可以起到更好的抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法：用人乳腺癌细胞MCF-7为实验细胞株。分别用五个浓度的双氢青蒿素和统一浓度的紫杉醇处理对数期肿瘤细胞，用MTT法测定细胞增殖抑制率。结果：DHA+TAX联合用药组的IC50值比DHA组单独给药的IC50值分别要低35%，药物的抑制作用随着作用时间和给药浓度的增加而增强。结论：双氢青蒿素和紫杉醇联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率要明显高于两药单独作用，且药物抑制作用随着作用时间和给药浓度的增加而增强。
【关键词】紫杉醇；双氢青蒿素；联合用药
【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）14-0160-01
我国的乳腺癌发病率呈逐年上升的趋势[1]。紫杉醇（taxinol，TAX）具有显著的抗肿瘤活性，由于紫杉醇会产生耐药，降低了其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用，地限制了其在临床乳腺癌治疗中的疗效。青蒿素类化合物对肿瘤抑制也有较好的效果,并且可增强某些化疗药物的敏感性，尤其以双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）抗肿瘤活性最强，有研究发现双氢青蒿素能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖[2]。为提高紫杉醇对乳腺癌细胞增殖的抑制作用，增强化疗药物的抗肿瘤效果，本研究通过联合用药，将紫杉醇和双氢青蒿素两种药物同时应用于人乳腺癌细胞，对两种药物联合使用是否可以起到更好的抑制肿瘤细胞增殖的作用进行检测。
1.材料与方法
1.1 主要药品和试剂
药品 双氢青蒿素：昆明制药厂；紫杉醇注射液（紫素）：北京协和药厂，批号：141203；主要试剂二甲基亚砜：Amresco产品，批号：0718A01；二甲基四氮唑蓝：Amresco公司生产，批号：0793。
1.2 实验方法
MTT对抑制率的检测,分为五个组：选用紫杉醇做阳性对照药物，分为空白组、溶媒对照组、单独DHA组、单独紫杉醇组、DHA+紫杉醇组。浓度梯度相同，5,10,20,40,80μmol/L，每组样本设3个复孔，24小时、48小时后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μL,于37℃继续孵育4h终止培养，记录结果。抑制率=（溶媒组OD-实验组OD/溶媒组OD）×100%IC50值由IC50值计算软件得出。
1.3 统计学处理
定量分析实验重复3次，数据以x-±s表示，应用Microsoft Excel进行统计学分析。以LSD检验分析样本均数间的差异，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.实验结果
实验通过设置5种不同浓度的药物作用于体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7，分为空白组（没有任何处理过的MCF-7细胞）、溶媒对照组、单独DHA组、单独紫杉醇组、DHA+TAX组。作用时间设置为两组(24小时，48小时)采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖抑制率。结果显示DHA对人乳腺癌细胞MCF-7有抑制作用，其中抑制率随浓度和作用时间的增加而增加。紫杉醇对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用较为明显，作用24小时,48小时后，药物的抑制作用随着作用时间和给药浓度的增加而增强。双氢青蒿素、紫杉醇以及二者联合用药对MCF-7细胞的抑制率见图1与图2。
通过计算IC50值发现药物作用24h或48h后，DHA+TAX联合用药组的IC50值比DHA组单独给药的IC50值分别要低35%，24小时DHA IC50为84.20mg/L DHA+PTX为54.40mg/L。
4.讨论
紫杉醇是临床治疗乳腺癌的一线药物。但肿瘤细胞耐药性导致紫杉醇的临床疗效不断降低依旧是一个有待解决的问题[3]。青蒿素是目前最有效且不易产生抗药性的一线抗疟药，现发现其作用广泛，对肿瘤生长的抑制作用亦是近年来研究的新热点之一[4]。为提高紫杉醇对肿瘤细胞增殖的抑制作用，增强化疗药物的抗肿瘤效果，将双氢青蒿素与紫杉醇同时作用于人乳腺癌细胞MCF-7，计算IC50值发现药物作用24h或48h后，DHA+TAX联合用药组的IC50值比DHA组单独给药的IC50值分别要低35%，并且双氢青蒿素和紫杉醇联合用药对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率要明显高于两药单独作用，且药物抑制作用随着作用时间和给药浓度的增加而增强。
【参考文献】
[1]林芳，钱之玉，薛红卫，等。青蒿素和青蒿琥酯对人体乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用比较研究[J].中草药，2003，34（4）：347-349.
[2]陈尧尧。二氢青蒿素的抗肿瘤活性研究进展[J].广西中医药大学学报，2012，3：72-74.
[3] LEE J P，HAHN H S，HWANG S J，et al.Selective cyclooxygenase inhibitors increase paclitaxel sensitivity in taxane-resistant ovarian cancer by suppressing P-glycoprotein expression [J].J Gynecol Oncol，2013，24(3):273-279.
[4]刘玉翠，杨阳，金嵩，等.双氢青蒿素抗肿瘤机制的研究进展[J].吉林医药学院学报，2014，3：216-218.
论文作者:黄导1,李凌晨2,纳鑫2（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2018年5月第14期
论文发表时间:2018/5/9
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