（上海市奉贤区奉城医院肾内科 上海 201411）
【摘要】 目的：本研究旨在探讨外周血T淋巴细胞亚群、白介素-2（IL-2）在慢性肾功能衰竭(CRF)患者中的临床意义。方法：30例CRF病人来自我院住院患者（剔除感染者），分为肾功能正常组，肾贮备能力下降期组和氮质血症期组。30例肾功能正常对照者来自我院健康体检者，采用FCM技术检测CD4+、CD8+细胞亚群的变化、ELISA法检测细胞分泌IL-2的水平，综合分析淋巴细胞功能在CRF病人免疫功能下降中所扮演的角色。结果：（1）CRF患者外周血CD4+、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值均显著低于正常对照组(P＜0.05～0.01）；（2）CRF外周血单个核细胞IL-2分泌能力较正常对照组明显降低(P＜0.01)；（3）CRF患者外周血IL-2活性同CD4+/CD8+比值呈明显正相关(P＜0.01)。结论：T淋巴细胞亚群紊乱，特别是CD4+/CD8+比值失调和IL-2活性与CRF病人细胞免疫功能处于低下状态均呈明显相关性。
【关键词】 T淋巴细胞亚群；IL-2；慢性肾功能衰竭
【中图分类号】R692.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）34-0083-02
前言
本研究通过分析CD4+、CD8+细胞、CD4+/CD8+比值和IL-2在不同程度肾损害患者中的变化，从而发现T淋巴细胞亚群、IL-2对CRF患者的病情评估、疗效评价及预后判断的意义。
1.方法与材料
1.1 研究对象
30例CRF病人来自我院住院患者。男性18例，女性12例，平均年龄(57.14±23.22)岁，根据叶任高，陆再英主编的全国高等学校教材《内科学》第六版中慢性肾衰竭的诊断标准分3 组：肾功能正常组，肾贮备能力下降期组和氮质血症期组。对照组为30例健康成人志愿者，男性15例，女性15例，年龄(48±15.29)岁。
1.2 T细胞亚群标记
分别采集CRF患者和正常对照组外周静脉血5mL，肝素钠（1∶9）抗凝管抗凝。采用直接荧光法标记细胞膜表面各个抗原，具体方法如下：
（1）取试管加入抗凝全血100ul，分别加入标记为CD4-FITC/CD8-PE的混合抗体10ul，混匀后室温下避光反应15min； （2）加溶血剂1000ul混匀，室温下放10min；（3）立即上流式细胞仪检测
1.3 IL-2水平检测
采用ELISA法检测IL-2水平。样品孔每孔加待测样品100μl；每孔(除零孔)加第一抗体工作液100μl(两滴)，放37℃温育60min。每孔(除零孔)加酶联工作液50μl(一滴)，放37℃温育30min；加TMB显色液A、B各一滴，放37℃，避光显色15min；加终止液A、B各一滴，轻轻混匀；用450nm波长读取吸收道，求得IL一2活性单位(u/ml)。
1.4 统计学分析
以SPSS19.0软件进行数据分析，数据均以(x-±s)表示，用Mann-Whitney-u-test分析组间差异，t检验、方差分析检验相关系数。P＜0.05为差异有显著意义。
2.结果
2.1 CRF组CD4+、CD8+细胞及CD4+/CD8+比值均较正常对照组明显下降。
表1 慢性肾衰患者T细胞亚群的变化
如表2和图2所示，随着肾功能的下降其IL-2的水平亦逐渐下降，氮质血症期组患者IL-2水平明显低于对照组、肾功能正常组以及肾储备能力下降组（所有P＜0.05）。
3.讨论
慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是指各种肾脏疾病引起的缓慢进行性肾功能损害，最后导致尿毒症和肾功能完全丧失，引起一系列临床症状和生化、内分泌等代谢紊乱组成的临床综合征。从原发病起病到肾功能不全的开始，间隔时间可为数年到十余年。
近年来，随着免疫学研究方法与手段的不断完善以及免疫学研究的不断开展，很多临床疾病与机体免疫之间的关系逐渐引起人们的关注和重视。细胞免疫及白细胞介素一2(IL一2)在免疫调节的不断认识，其与CRF的关系日益受到重视，认为CRF免疫功能紊乱主要是细胞免疫受损[1,2]。
人体外周血T淋巴细胞亚群的改变反映机体的细胞免疫状态，T淋巴细胞分为CD4+辅助/诱导T细胞和CD8+抑制/杀伤T细胞[3,4]，CD4+T细胞具有辅助T细胞转化为效应T细胞、B细胞产生抗体及活化巨噬细胞等功能，起辅助、诱导细胞免疫与体液免疫的作用。CD8+T细胞具有抑制T细胞活化、B细胞产生抗体及细胞毒作用等，起抑制细胞免疫与体液免疫的作用。当机体处于正常状态时，T细胞中CD4+T细胞亚群与CD8+亚群的相互制约与平衡对于正常的机体免疫调节具有重要作用。本研究发现CRF各期CD4+、CD8+细胞均较对照组不同程度降低，氮质血症期组CD4+、CD8+细胞均较对照组降低显著。相关性分析显示，CRF与T淋巴细胞亚群都存在显著的相关性。
白介素2（Interlukin-2，IL-2）是一种T细胞生长因子，主要是由辅助性T细胞产生，小部分是由CD8+T细胞、NK细胞和NKT细胞产生[5]。IL-2为α螺旋型细胞因子，其分子量为15.5kDa[5，6]，抗原刺激能强烈诱导CD4+T细胞及CD8+T细胞产生IL-2，IL-2通过与高亲和性的受体相结合后发挥其生物学作用。传统理念一直认为IL-2为促进T细胞、B细胞、巨噬细胞及NK细胞的增殖，具有广泛的免疫增强作用[7]，曾被称为“T细胞刺激因子”[5，8]。然而，随着之后的研究人们慢慢发现，IL-2对体内免疫系统的影响较为非常复杂，更多研究发现IL-2主要通过与其受体结合并传递信号对各免疫细胞产生不同的影响，并特异性获得靶细胞的定向化和功能活性。本研究发现，氮质血症期组患者IL-2水平明显低于对照组、肾功能正常组以及肾储备能力下降组，相关性分析显示CRF与IL-2水平存在显著的相关性。
本研究从体内外，正反向，多方位多角度探讨CRF患者淋巴细胞功能的相关指标及药物干预后的变化，为进一步阐明CRF病人免疫功能低下发生机制、感染发生率及死亡率均高于一般人群提供有力的理论依据，综合分析淋巴细胞功能在CRF病人免疫功能下降中所扮演的角色，为防治CRF病人合并感染提供新的靶点，并可为临床防治CRF病人感染，延缓肾功能恶化、提高生活质量、降低治疗费用提供理论依据。
【参考文献】
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论文作者:唐新妹
论文发表刊物:《医药前沿》2017年11月第34期
论文发表时间:2018/1/6
标签：细胞论文; 淋巴细胞论文; 免疫论文; 肾功能论文; 患者论文; 对照组论文; 病人论文; 《医药前沿》2017年11月第34期论文;