任浩[1]2001年在《新型肝炎相关病毒(HGV和TTV)的实验研究》文中指出庚型肝炎病毒（HGV）和输血传播性病毒（TTV）是分别于 1995和 1997年鉴定的新型肝炎相关病毒。HGV为黄病毒家族中的单正链RNA病毒，全长约9．4Kb，从5′到3′依次编码5′－NCR、C、E1、E2、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B和3′-NCR。C区和 E区编码核心蛋白和包膜蛋白，NS3区编码病毒超 Ⅱ组解旋酶、锌蛋白酶和丝氨酸蛋白酶，NS5B编码RNA依赖的RNA聚合酶。几年来，对于HGV的基因组结构与传播途径研究的比较清楚，但仍存在如下问题亟待解决：1．HGV的致病性：由于HGV是在非甲-戊型肝炎患者中发现的，便认为是一个新的肝炎病毒，但随后的研究对其致病性提出了争议，因此，HGV的致病性及致病机制尚未完全明确。2．HGV的组织亲嗜性：对HGV的复制部位持有两种意见，一种认为HGV具有嗜肝性，另一种认为有嗜淋巴性，多数学者倾向后一种看法。3．HGV的细胞感染模型；有研究表明HGV能够在PBMCs、有干扰素抗性的Daudi细胞（B细胞淋巴瘤细胞）、PH5CH、MT-2C中复制和表达，但仍未建立稳定传代感染的细胞模型。TTV为单负链DNA病毒，目前的研究表明TTV在感染者体内可能存在两种形状的基因组，一种是线状，一种是环状，多数研究表明为后一种。TTV虽为DNA病毒，但其基因组结构具有显着的遗传学多样性，可导致不同的变异株，不同变异株导致疾病产生的能力也不同。本研究分别对HGV和TTV进行了一些基础研究。 第一部分庚型肝炎病毒（HGV）的研究 本教研室曾经构建了HGV全基因组cDNA克隆pHGVqz，并在GenBank注册 （注册号为AF081782）。为了进一步阐明HGV的致病性和复制部位，本研究在获得HGV全基因组 cDNA克隆的基础上，体外转录获得了全长 HGVRNA基因组，研究了该RNA转录体对恒河猴的致病性，并初步建立了HGV感染的细胞模型，主要工作如下。1、HGVRNA转录体感染恒河猴的研究 以HGV全长cDNA基因组克隆为模板，体外转录制备了全长HGV RNA转录体，肝内注射感染BK15和BY1两只恒河猴，取其感染后阳性血清分别感染BS1和BM1恒河猴，然后取BM1阳性血清再感染BB1恒河猴。 感染后每周或隔周抽血检测血清 ALT水平、HGV RNA和抗-HGV。除 BS1外，其它实验猴血清ALT均出现不同程度的升高，但存在个体差异。BK15和BY1分别于感染后第1周和第 8周血清 HGV RNA阳转，且持续存在达 27周之久，其余 3只传代感染的恒河猴血清 HGV RNA也均阳转。在五只实验猴血清中均检测到了抗-HGV。定期手术取肝组织检测组织病理变化及 HGV E2蛋白在肝细胞中的表达，所第二军医大学博士学位论文 中文摘要有实验猴肝组织病理检查均呈现轻度肝炎样变。以MAb做免疫组化检测的结果表明，HGV EZ蛋白主要在肝细胞浆中表达，在心脏和脾脏细胞中亦有不同程度的表达，但存在个体差异。在BK15、BYI和 BMI肝组织中检测到了 InRNA的表达。透射电镜观察BK15实验猴肝细胞，发现两种病毒样颗粒，一种呈晶格状排列，直径约25－30urn；一种呈圆团状存在，直径约67urn。 以 HGV特异性的荧光标记探针定量检测 BKIS血清 HGV ILNA的动态变化，验证了血清HGV定性分析结果。定量检测了BK15和BSI的心、肝、胰、肾及BYI、BMI、BBI活检肝组织中HGV正、负链RNA，在除BSI之外的其它实验猴肝组织内均检测到了HGV正、负链RNA的存在，表明HGV能够在肝组织中复制。在BK15猴的心、肝和脾脏细胞中均检测到了HGV的复制，说明在该实验猴体内可能存在嗜肝性和嗜淋巴性双重亲嗜性HGV。而在BSI肝组织末检测到HGV的复制，却在脾脏中检测到高水平的HGV复制，在此猴体可能仅有淋巴亲嗜性HGV株。 结论：恒河猴对HGV敏感，可作为实验动物模型。HGV可在恒河猴中传代感染并引起轻度的肝炎样病变。HGV可以在恒河猴肝组织复制，亦可在心脏和脾脏中复制。2、RGV细胞模型的初步建立 利用LipofeCtamin将HGV RNA转录体转染HepGZ细胞，RTICR检测培养细胞和上清中HGV正、负链NA，在转染后24h便可在培养上清中检测到HGV负链RNA。以此上清感染新鲜HepGZ细胞，每36天传代一次，共传代20余次，细胞至少能够存活90天。传代细胞及培养上清中均可检测到HGV正、负链NA。制备细胞爬片，免疫组化检测到 HGV EZ蛋白在细胞中的表达。SDS．PAG和 Westemblot亦检测到 HGV EZ蛋白在感染细胞中的表达。 取HGV RNA阳性培养上清感染新鲜HepGZ细胞，上清中检测到负链RNA时再感染新鲜细胞，共传代感染一次，传代感染的细胞中均可检测到HGV的复制。 HGV感染的HePGZ细胞经冻存后再复苏，在培养上清和细胞内仍能检测到HGVRNA。 结论：＊印GZ细胞不仅对HGV易感，而且可以支持HGV的复制增殖。3、HGV NSS基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 以 pHGVIwh6重组质粒为模板，PCR扩增 HGV NSS部分基因片段，BalnHI和Kpn酶切后定向克隆至pPROEX HTa载体进行序列测定。将正确的基因片段克隆至转座载体 pFastBac HTa，获得重组转座质粒 pFHTNSS。转化含有 bacmid和辅助质粒的D
高英堂[2]2003年在《肝炎病毒（HBV、HCV）基因诊断芯片的研制和新型肝炎病毒SENV的实验研究》文中研究说明HBV和HCV是临床上最常见、危害最大的两种肝炎病毒,其长期持续的慢性感染与肝硬化、肝癌的发生发展密切相关。随着人们对肝炎病毒认识的不断深入,尤其是肝炎病毒基因组学研究的进展,使临床上现有的血清免疫学方法和以单一PCR技术为主的检测方法其局限性越来越明显,由于不能真实、全面地反映患者体内病毒基因组的各种变异和动态变化,对患者个体的针对性诊断和治疗也受到很大限制。为及时将肝炎病毒的基因研究成果应用于临床实践,需要利用新的分子生物医学技术,研究和开发肝炎病毒的新型诊断方法和诊断试剂。据此,我们重点研究了HBV和HCV基因诊断芯片的制备、应用,以及新型肝炎病毒SENV的实验研究。本文涉及的实验方法包括生物信息学分析(即芯片上探针和PCR引物的设计、测序序列的检索和比对)、探针和PCR引物的合成、PCR产物直接测序、基因芯片上探针的点样制备方法、血清中病毒的提取方法、PCR扩增和地高辛标记、分子杂交及显色、芯片杂交结果的数据处理等。芯片制备过程中的优化环节包括:尼龙膜型号和探针固定照射剂量的选择,探针3′末端加尾碱基数的确定,利用探针的互补寡核苷酸序列和部分PCR产物的测序验证芯片杂交的特异性,利用PCR扩增直接参入地高辛信号分子,分析其长度、浓度及杂交时间对杂交信号的影响,比较了HBV标本的不同处理方法和不同PCR引物组合的扩增效率。经过二年多的反复实验研究,初步完成HBV基因芯片、HCV基因芯片和HBV、HCV联检芯片的制备。在HBV基因芯片的研制过程中,先后制备了HBV-450S、HBV-90S、HBV-120S、HBV-P/S区75S和HBV-C/X区25S等不同点阵数的基因芯片。最早的HBV-450S芯片包含的基因信息最丰富,理论上可检测HBV的7种基因型、4种血清亚型、4个P基因耐药相关的突变位点、2个S抗原突变位点、6个C区变异和X区的缺失突变,但部分探针特异性较差。在随后的改进中,HBV-P/S区75S是目前临床实验研究较好的芯片,对基因型、血清亚型和拉米夫定耐药突变均能特异检测。同时,利用制备的HBV基因芯片,对45例纳入葛兰素威康公司评价新药拉米夫定疗效临床研究的乙肝患者、270例叁中心医院的门诊慢性乙型肝炎患者和466例来自6个
陈津晶[3]2012年在《118例广西重型β地中海贫血患者TTV，HGV感染状况调查》文中进行了进一步梳理目的：调查TTV，HGV在118例广西重型β地中海贫血患者中的感染率及分布特征。方法：随机收集广西各个地区的重型β地中海贫血患者血清共118例，其中男74例，女44例，年龄2—25岁，输血总量8—960U。采集这些患者血清，以ELISA法检测血清中的TTV及HGV。根据患者的性别，年龄，输血量，居住地进行分组，分别计算各组TTV及HGV的感染率。结果：1.118例广西重型β地中海贫血患者TTV阳性4例，感染率为3.39%。根据患者年龄分为<10岁组和>10岁组，TTV阳性例数均为2例，阳性率分别为2.25%，6.90%（P>0.05）；在性别组中，男性组和女性组的阳性例数分别是3例和1例，对应的阳性率为4.05%，2.27%（P>0.05）；而居住在桂北的TTV阳性例数为3例，桂南的阳性例数为1例，阳性率分别为6.52%，1.39%（P>0.05）；在输血量(<20U，20-100U，>100U)组中，TTV的阳性例数依次为2例，1例，1例，对应的阳性率为7.41%，1.85%，2.70%（P>0.05）。2.118例广西重型β地中海贫血患者HGV阳性8例，感染率为6.78%。根据患者年龄分为<10岁组和>10岁组，HGV阳性例数分别为7例和1例，阳性率分别为7.87%，3.45%（P>0.05）；在性别组中，男性组和女性组的阳性例数分别是5例和3例，对应的阳性率为6.76%，6.82%（P>0.05）；而居住在桂北的TTV阳性例数为7例，桂南的阳性例数为1例，阳性率分别为15.22%，1.39%（P<0.05）；在输血量(<20U，20-100U，>100U)组中，HGV的阳性例数依次为1例，3例，4例，对应的阳性率为3.70%，5.56%，10.81%（P>0.05）。结论：1.广西重型地中海贫血患者TTV的感染率为3.39%，感染率低，感染与患者的性别，年龄，输血量，居住地无关。2.广西重型β地中海贫血患者HGV的感染率为6.78%，感染率低，感染与患者的性别，年龄，输血量无关。
于建国[4]2007年在《新型肝炎病毒研究策略与对策》文中进行了进一步梳理病毒性肝炎是一个古老的传染病。病毒性肝炎的病原学历来是人们研究的一个热点。自从1965 年发现乙肝病毒表面抗原(HBsAg),1975年发现甲肝病毒(HAV)和1977年发现丁肝病毒(HDV)以来,仍有部分肝炎病因得不到明确诊断,查不到病原
杨志国, 许家璋, 隋云华, 何长伦, 孟运运[5]2001年在《159例未定型病毒性肝炎临床和病理分析》文中认为目的 研究未定型病毒性肝炎 (VH)的临床病理特征。方法 选择 15 9例血清甲型肝炎病毒～戊型肝炎病毒 (HAV～HEV)、巨细胞病毒 (CMV)、EB病毒 (EBV)、庚型肝炎病毒 (HGV)、经血传播病毒 (TTV)均阴性且临床和病理均确诊的未定型VH作为研究对象 ,重点分析临床生化检测结果和肝组织的炎症活动度与纤维化程度 ,并比较临床和病理诊断。结果 15 9例未定型VH中临床诊断为急性肝炎 2 4例、慢性肝炎 12 7例、慢重肝 1例、肝硬化 3例和淤胆型肝炎 1例 ,另 3例肝功能正常 ,临床诊断主要依据为TBil和ALT的升高。 15 9例未定型VH中病理诊断为肝细胞浊肿13例、急性肝炎 (轻型 ) 17例、慢性肝炎 12 4例、肝硬化 5例。慢性肝炎中主要是慢性肝炎 (轻度 ) ,纤维化程度普遍较轻 ,78 4% (87/ 111)为 <S1;15 9例未定型VH临床、病理诊断总符合率是 79 9%(12 7/ 15 9)。结论 未定型VH可有不同的临床表现形式 ,以慢性肝炎为主 ,但病变较轻 ,且以炎症活动为主 ;未定型VH的肝组织学表现普遍程度较轻 ,主要表现为小叶内和汇管区的炎症。临床和病理分析结果都提示有新型肝炎病毒存在的可能。
战贤梅, 吕作芝, 朱秀芬[6]2006年在《2003年大连市部分血液透析者肝炎及相关病毒感染现况调查》文中研究表明[目的]了解血液透析患者肝炎及相关病毒感染状况,为采取防治对策提供依据。[方法]2003年,对在大连市部分医疗单位血液透析中心治疗的223例血液透析者进行HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe、抗HCV、抗HGV、抗TTV检测。[结果]检测223人,HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe阳性率分别为10.8%、40.8%、71.3%、6.3%、24.2%,HBV感染率为78.0%;抗HCV、抗HGV、抗TTV阳性率分别为35.0%、4.9%、33.6%。223人中,感染1种病毒的113人,占50.67%;感染2种或2种以上病毒的84人,占37.67%。[结论]血液透析是HBV、HCV、HGV、TTV感染的重要途径。
姚敏, 阮国杰, 冯清贵, 魏小斌, 张燕[7]2003年在《海口市吸毒人群TT病毒感染情况的调查》文中研究说明目的 了解TT病毒在吸毒人群中的感染情况和传播途径。方法 对海口市公安局戒毒所收容的 2 2 1例吸毒者进行不同因素分析 ,采用巢式PCR法检测血清中的TTVDNA ,同时检测血清中的甲型肝炎病毒 (HAV)、庚型肝炎病毒 (HGV)、艾滋病 (HIV)和梅毒。结果 2 11例吸毒者血清中TTVDNA阳性检出率为 31.6% ( 70 /2 2 1) ,HAV、HBV、HCV、HEV、HGV、HIV和梅毒阳性检出率分别为 0 .4% ( 1/2 2 1)、45 .7% ( 10 1/2 2 1)、11.8% ( 2 6/2 2 1)、2 .2 % ( 5 /2 2 1)、10 .4%( 2 3/2 2 1)、0 ( 0 /2 2 1)、5 .9% ( 13/2 2 1)。结论 吸毒人群是TT病毒感染的高危人群 ;静脉注射毒品者、有非固定婚外性伴侣等因素与TT病毒感染密切相关 ;TT病毒与甲 -庚型肝炎病毒的存在合并感染 ,其中乙型及丙型肝炎重迭TT病毒感染较常见 ;另外 ,我们在 1例HAV阳性的血清中也检出TTVDNA ,提示TT病毒除存在血液传播途径外 ,还可能存在非血源性的感染传播途径
范 薇, 周育森, 遇秀玲, 田克恭, 王海涛[8]1999年在《恒河猴中 TTV 感染的回顾性实验研究》文中提出目的：了解接种患者血清的恒河猴能否复制 Ｔ Ｔ 病毒（ Ｔ Ｔ ｖｉｒｕｓ， Ｔ Ｔ Ｖ），正常恒河猴中是否有 Ｔ Ｔ Ｖ 感染，分析猴中 Ｔ Ｔ Ｖ 基因结构特点。方法：用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测血清标本中的 Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ，对 Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 阳性的标本进行序列测定。结果：健康猴中无 Ｔ Ｔ Ｖ 感染；１０ 只接种患者血清的恒河猴中，经检测有 ４ 只为 Ｔ Ｔ Ｖ 阳性。将其中一株 Ｔ Ｔ Ｖ 进行序列测定，该序列与日本 Ｔ Ｔ Ｖ 部分基因相对应位置的核苷酸同源性为 ９６％ ，与中国株 Ｔ Ｔ Ｖ 全基因相对应位置的核苷酸同源性为 ９８％ 。结论：健康猴群中无 Ｔ Ｔ Ｖ 自然感染。恒河猴可感染 Ｔ Ｔ Ｖ，可作为研究 Ｔ Ｔ Ｖ 的动物模型。
邹圣强, 张园海, 史正全, 龚玉华, 张建军[9]2002年在《103例重型病毒性肝炎患者病因学与生存因素分析》文中研究指明重型病毒性肝炎(重肝)起病急骤,病死率较高.预后较差.我国主要以乙型肝炎病毒(HBV)感染所致。近年发现甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎病毒及TTV感染,或2种以上病毒重迭感染,与重型肝炎的发生和病情转归存在一定关联。为探讨重型肝炎的不同病毒病因发生率与存活率的关系,我们对本院103例重型肝炎患者的死亡和存活病例进行分析讨论。
佚名[10]2001年在《中华实验和临床病毒学杂志2001年第15卷主题词索引》文中认为(以汉语拼音为序 )Ａ癌基因蛋白质类 Ｂｃｌ 2对ＨＳＶ 1感染原代培养鼠皮层神经元的调节作用 (王佳伟 ,王得新 ,冯子敬等 ) (3 ) :2 2 8氨基酸类 7株ＴＴ病毒部分核苷酸及氨基酸序列分析 (方芳 ,王华梁 ,王爱华等 )(4) :3 6
参考文献：
[1]. 新型肝炎相关病毒(HGV和TTV)的实验研究[D]. 任浩. 第二军医大学. 2001
[2]. 肝炎病毒（HBV、HCV）基因诊断芯片的研制和新型肝炎病毒SENV的实验研究[D]. 高英堂. 南开大学. 2003
[3]. 118例广西重型β地中海贫血患者TTV，HGV感染状况调查[D]. 陈津晶. 广西医科大学. 2012
[4]. 新型肝炎病毒研究策略与对策[C]. 于建国. 广东省肝脏病学会2007年年会论文集. 2007
[5]. 159例未定型病毒性肝炎临床和病理分析[J]. 杨志国, 许家璋, 隋云华, 何长伦, 孟运运. 江苏医药. 2001
[6]. 2003年大连市部分血液透析者肝炎及相关病毒感染现况调查[J]. 战贤梅, 吕作芝, 朱秀芬. 预防医学论坛. 2006
[7]. 海口市吸毒人群TT病毒感染情况的调查[J]. 姚敏, 阮国杰, 冯清贵, 魏小斌, 张燕. 中国热带医学. 2003
[8]. 恒河猴中 TTV 感染的回顾性实验研究[J]. 范 薇, 周育森, 遇秀玲, 田克恭, 王海涛. 军事医学科学院院刊. 1999
[9]. 103例重型病毒性肝炎患者病因学与生存因素分析[J]. 邹圣强, 张园海, 史正全, 龚玉华, 张建军. 中西医结合肝病杂志. 2002
[10]. 中华实验和临床病毒学杂志2001年第15卷主题词索引[J]. 佚名. 中华实验和临床病毒学杂志. 2001