1．山东大学公共卫生学院 山东济南 250012；2．德州市中心血站 山东德州 253015
摘要：目的 分析德州地区无偿献血者核酸检测结果。方法 德州血站 2015 年 4月 1 ～ 2017年 9 月 30日采集的血液标本 120681人份，采用ChiTaS汇集和核酸提取设备和ABI 7500荧光PCR仪8例标本混合检测HBV DNA、HCV RNA 和 HIV RNA 3 项联合检测筛查或采用 Roche Cobas S201 核酸检测筛查系统对 酶联免疫检测阴性和单试剂反应性的标本做HBV DNA、HCV RNA 和 HIV RNA 3 项联合筛查，对核酸检测结果为反应性的无偿献血者进行随访。结果 经核酸检测的 120681 例样本，反应性样本检出62 例（阳性率 0. 051% )。随访到 15例，经确认 HBV“窗口期”标本 6 例，其中HIV“窗口期”标本 1例。结论 核酸检测技术应用于无偿献血者血液筛查对于缩短“窗口期”具有重要意义，能有效提高临床用血安全。
关键词：核酸检测；血液筛查；窗口期
输血安全，控制输血传播疾病被国家越来越重视。而ELISA 方法用于血液筛查还存在一定的局限性，如检测“窗口期”较长等。核酸扩增技术相比ELISA 方法具有高度的敏感性和特异性，能够有效缩短ELISA 方法的“窗口期”，为了进一步提高输血安全，国家卫计委提出将核酸扩增技术实现全国血站全覆盖，德州血站2015 年 4 月以来对所有标本均进行了核酸检测。并成功追踪15例，现报道如下：
1 材料与方法
1.1 标本来源 德州血站 2015年 4 月 1 日 ～2017 年 9月 30日采集的无偿献血者血液标本 120681 人份。标本采集后置于 2 ～ 8℃ 冰箱保存，并保证冷链运输，在48h 内完成酶联免疫检测及核酸检测。
1. 2 仪器与试剂MicrolabFAME 全自动酶免分析系统（瑞士 Hamilton )、Hamilton STAR 全自动加样仪、爱康酶免一体机Urinus288、爱康加样仪Xantus、ChiTaS汇集和核酸提取设备、ABI 7500荧光PCR仪、Roche Cobas S201 全自动核酸检测系统、东菱冰箱、三洋冰箱、Thermo低温离心机等。
1.3 酶联免疫检测试剂：
1) HBsAg 检测试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法)（上海科华，批号：201604141 等；北京万泰批号：B20150101 等；厦门新创，批号2016115129等；上海荣盛，批号20150507201等)；
2) 抗-HCV 检测试剂：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（北京万泰四代，批号：20150817等；上海科华，批号201510251等；厦门新创，批号201607004等)；
3) HIV 酶免检测试剂：人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（上海科华，批号：201504111等；万泰四代：批号 201502001 等；上海荣盛，批号：20150302203等 )。
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1.4 核酸检测试剂：
1)上海浩源 乙型肝炎病毒HBV DNA、丙型肝炎病毒HCV RNA、人类免疫缺陷毒HIV RNA（1 型) 核酸联合检测试剂（批号：MF20151012等)；
2)罗氏 乙型肝炎病毒HBV DNA、丙型肝炎病毒HCV RNA、人类免疫缺陷毒HIV RNA（1+2 型) 核酸联合检测试剂（批号：219656、219646等 )。
1.5 酶联免疫检测 采用国产 2 种酶联免疫检测试剂对无偿献血者血液标本进行HBsAg、抗-HCV 和抗-HIV-1 /2检测。对 2 种试剂均阴性的标本，及对其中1种酶联免疫检测试剂有反应性的标本进行核酸检测。
1.6核酸检测 采用ChiTaS汇集和核酸提取设备和ABI 7500荧光PCR仪对标本进行检测，每八个样本混样一孔进行检测，每批样本均设置1个阴性质控，一个阳性质控和一个外部阳性质控（外部质控由购置于北京康彻斯坦提供的原浓度为200IU/ml HBV-DNA、2000IU/ml HCV-RNA、2000IU/ml HIV-RNA质控品、用阴性血浆按照标识浓度和所使用核酸检测系统最低检测限，计算稀释倍数，使稀释后的浓度范围在所使用核酸检测系统最低检测限2-5倍：即需配制HBV-DNA质控品浓度为50IU/ml、HCV-RNA 质控品浓度为200IU/ml、HIV-RNA质控品浓度1000IU/ml）。每个孔均含内对照，混检反应性的孔进一步做拆分实验（浩源检测灵敏度HBV6.3IU/ m L、HCV23.3IU/ m L、HIV47.6IU/ m L）；采用 Roche Cobas S201 全自动核酸提取、扩增检测系统对样本进行检测，每六个样本混样一孔，每批检测均设置1个阴性质控和 4 个阳性质控和一个外部阳性质控（外部质控购置于北京康彻斯坦），每个孔均含内对照，混检反应性孔进一步做拆分试验，（罗氏检测灵敏度分别为 12 IU / m L、15IU / m L 和 40 copy / m L)。拆分出单个样本试验结果为反应性标本判定为核酸结果HBV/HCV/HIV其中某项反应性，阴性则判定为核酸HBV/HCV/HIV阴性。
1.7核酸反应性献血者的随访 采用电话随访，电话告知献血者的检测结果，并保证严格保密，在献血者自愿和知情同意的情况下，提前预约献血者来德州市中心血站或本单位其他采血点进行采集血液标本。保证标本的运送条件，采样后48小时内采用 ELISA、核酸进行检测，检测结果及时告知献血者，并给予适当解释以消除献血者疑虑。
2 结果
2.1 核酸检测结果 2015 年 4 月 1 日 ～ 2017 年 9 月 30 日采集的 无偿献血者标本，经 ELISA 筛查 HBs Ag、抗-HCV 和抗-HIV-1 /2 阴性和仅 1 种试剂为反应性的标本共 120681例，经核酸检测发现反应性标本 62 例，其中经后期跟踪确认HIV病毒感染“窗口期”标本 1例，HBV“窗口期”标本 6 例（核酸阳性检出率为0. 051% )。
3 讨论
我们对 120681 例 ELISA 筛查无反应性及单试剂阳性标本进行了核酸 检测，得到的阳性率为 0. 051%，低于济南地区核酸阳性检出率0. 067%［1］，东莞（0.9%)［2］和常州（0. 1% )［3］，分析原因有：1) 人群分布差异，使各地病毒检出率有所不同；2) 各血站所使用酶联免疫检测试剂及流程各不相同，进入核酸检测程序的标本有所不同，各血站选择使用的试管不同，我站所用的国产浩源试剂与系统与进口罗氏试剂与系统间的差异等各种原因。造成我站检出率明显低于其他文献所报道检出率。
在随访的15例反应性献血者中，其中1例被确诊为HIV“窗口期”标本，此标本初次为ELISA 检测万泰四代单试剂灰区标本，经核酸检测反应性，在间隔半个多月二次采样ELISA双试剂转阳性，送疾控中心后确诊阳性，但经统计自从上核酸检测以来，酶免单试剂灰区或反应性，核酸检测反应性仅此一例。其中六例HBV核酸反应性，经追踪后期酶联免疫检测乙肝表面抗原转阳，证实为ELISA乙肝表面抗原“窗口期”。其中三例追踪结果仍是核酸阳性，酶免阴性，怀疑隐匿性感染。其中5例后期酶免和核酸检测均阴性。分析原因，有可能是系统检测假阳性或是献血者一过性感染。
参考文献：
[1]师玲玲，刘赴平，王德文，等． 核酸检测技术在献血者血液筛查中的初步应用． 中国输血杂志，2010，23（1)：11-13．
论文作者:武春艳1，2,王束枚1
论文发表刊物:《健康世界》2017年28期
论文发表时间:2018/3/9
标签：核酸论文; 标本论文; 试剂论文; 批号论文; 阳性论文; 德州论文; 阴性论文; 《健康世界》2017年28期论文;