俞进友 仇建玲 朱正峰
【摘 要】 目的 探讨分析MiR-145在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 选取2013年1月-2015年1月来我院治疗的80例乳腺癌患者以及40例乳腺良性患者进行研究，以miRNA芯片为基础，对患者病变组织采用原位分子杂交法检测miRNA的水平，分析miRNA与患者临床症状之间的关联。结果 随着腋淋巴结累及其数目增多，miR-145的高表达率也逐渐上升，差异存在显著性(P值<0.05) 。miR-145的高表达率也随着临床分期的上升而上升(P值<0.05)。当c-erbB-2出现高表达时，miR-145也显示出较高的高表达率(P值<0.01)。miR-145的高表达率也随着组织学分级的升高表现出有一定的上升趋势，但是各组间无显著性差异(P值>0. 05)。结论 在乳腺癌的发生与发展中，miR-145的表达出现异常，可以作为一个潜在的乳腺癌标记物。
【关键词】 MiR-145； 乳腺癌组织； 表达； 临床意义
微小RNA（miRNA）是一段长度为22核苷酸的内源性非编码RNA，其可以直接切割靶mRNA分子或和靶mRNA的3'端完全/不完全互补结合从而阻断靶mRNA的翻译，在生命活动过程中发挥重要作用，甚至参与肿瘤的发生与发展[1-3]。在近些年的研究中发现，miRNA在多种肿瘤组织中表现出不同程度的表达水平的上调或者下调，受到了广大研究者的关注并成为研究热点之一[4-6]。MiRNA在染色体的5q32-33位点上，目前并没有发现明确的miRNA的靶基因。以往的研究均通过miRNA芯片法得到，本研究对2013年1月-2015年1月来我院治疗的80例乳腺癌患者以及40例乳腺良性患者进行研究，以miRNA芯片为基础，对患者病变组织采用原位分子杂交法检测miRNA的水平，分析miRNA与患者临床症状之间的关联，探讨其中的临床意义，以下为本研究的回顾分析。
资料与方法
1．一般资料
本研究对2013年1月-2015年1月于我院收入的乳腺病变病理资料的石蜡标本较齐全的患者120例进行研究，所有患者均通过2003年WHO制定的乳腺肿瘤分类标准进行判定，将入选研究的病例按照病理学进行分型：其中有80例乳腺癌患者以及40例乳腺良性患者，年龄15-60岁，平均年龄（35.35±10.57）岁。所有入选研究的患者在手术前均没有做过免疫、化疗以及放射等手术。所有采集的患者标本都通过常规10%的福尔马林进行固定，采用石蜡进行包埋，切片厚度以4 μ m为准。
2．方法
2.1 试剂与仪器
原位杂交检测试剂盒（MK1030，武汉博士德公司）；miR-145地高辛标记探针（5′-AAGGGATTCCTGGGAAAACTGGACAAGGGATTCCTGGGAAAACTGGACAAGGGATTCCT GGGAAAACTGGAC-3′，美国）；寡核甘酸探针稀释液（武汉博士德公司）；DEPC（Sigma公司，美国）；DAB显色试剂盒（北京中杉公司，中国）。HT-1组织芯片制备仪（购自辽宁恒泰中国，中国）
2.2 组织芯片制备
采用定位器标记具有代表性的组织位点，对HE染色切片进行复查。在每例样本中择取3个位点，采用HT-1组织芯片制备仪制作组织芯片，核心设为1mm，以4μm的厚度为标准进行连续切片，再进行HE染色。
2.3 原位分子杂交
严格按照原位杂交检测试剂盒上的说明进行操作。具体操作措施如下：将地高辛标记的 mi RNA探针滴加到切片中，比例是(1：400)，在42 ℃下进行恒温杂交16 h。在37 ℃下温水浴处理生物素化鼠抗地高辛抗体1h，在进行SABC孵育后采用DAB显色试剂盒进行显色。并与设立的已知的阳性切片进行对照，并设立阴性对照组：用探针稀释液替代探针。
3．原位杂交结果的判断方法及标准
采用半定量积分法对采集的染色强度对结果进行判定。阳性染色：乳腺癌细胞胞质或者乳腺腺上皮中miR-145染色显示明显的黄色或棕黄色。染色强度分级：弱染色或无色为记1分；中等强度染色记为2分；强染色记为3分。阳性细胞数分级：阳性细胞数 <10%记为1 分；阳性细胞数在10%-50%范围内记为2分；阳性细胞数>50%记为3分。染色强度分级得分乘以阳性细胞数分级得分记为最后的统计得分，>3分为强阳性，即为高表达，1-3分为弱阳性，即为弱表达。
4．统计学方法
本研究采用SPSS19.0对统计数据进行分析，计数采用%表示，采用x2检验，当P值＜0.05时认为差异具有统计学意义。
结 果
1．mi R-145在乳腺癌和乳腺良性病变组织中表达和分布
在乳腺癌细胞胞质或腺上皮上常见miR-145阳性信号，有时也出现在间质细胞胞质中。miR-145弥漫性地分布于纤维腺瘤以及乳腺腺病的病变组织中，显现出66.7%的高表达率，其次在导管和小管的腺上皮细胞上长显示强表达，此外，也有少量表达于肌上皮，如图1所示。miR-145主要定位于乳腺癌组织上，表现出阳性的弥散分布，但是显示出较弱的阳性表达，为31.9%的高表达率，如图2所示。两者差异显著性(P值<0.05)。
图1 miR-145在乳腺良性病变组织中表达；图2乳腺癌病变组织中表达
2．乳腺癌 mi R-145表达与患者临床病理特征的关系
随着腋淋巴结累及其数目增多，miR-145的高表达率也逐渐上升，差异存在显著性(P值<0.05) 。miR-145的高表达率也随着临床分期的上升而上升(P值<0.05)。当c-erbB-2出现高表达时，miR-145也显示出较高的高表达率(P值<0.01)。miR-145的高表达率也随着组织学分级的升高表现出有一定的上升趋势，但是各组间无显著性差异(P值>0. 05)，详见表1。
讨 论
微小RNA（miRNA）是一段长度为22核苷酸的内源性非编码RNA，其可以直接切割靶mRNA分子或和靶mRNA的3'端完全/不完全互补结合从而阻断靶mRNA的翻译，在生命活动过程中发挥重要作用，甚至参与肿瘤的发生与发展[7-8]。在近些年的研究中发现，miRNA在多种肿瘤组织中表现出不同程度的表达水平的上调或者下调，受到了广大研究者的关注并成为研究热点之一。MiRNA在染色体的5q32-33位点上，目前并没有发现明确的miRNA的靶基因[9-10]。
本研究对2013年1月-2015年1月来我院治疗的80例乳腺癌患者以及40例乳腺良性患者进行研究，以miRNA芯片为基础，对患者病变组织采用原位分子杂交法检测miRNA的水平，分析miRNA与患者临床症状之间的关联。结果显示：随着腋淋巴结累及其数目增多，miR-145的高表达率也逐渐上升，差异存在显著性(P值<0.05) 。miR-145的高表达率也随着临床分期的上升而上升(P值<0.05)。当c-erbB-2出现高表达时，miR-145也显示出较高的高表达率(P值<0.01)。miR-145的高表达率也随着组织学分级的升高表现出有一定的上升趋势，但是各组间无显著性差异(P值>0. 05)。
综上所述，在乳腺癌的发生与发展中，miR-145的表达出现异常，可以作为一个潜在的乳腺癌标记物。
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论文作者:俞进友,仇建玲,朱正峰
论文发表刊物:《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期
论文发表时间:2016/7/14
标签：乳腺癌论文; 组织论文; 患者论文; 乳腺论文; 阳性论文; 临床意义论文; 原位论文; 《中华临床医师杂志》(电子版)2016年2月第4期论文;