1 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 黑龙江省 哈尔滨 150081
2哈尔滨医科大学附属第五医院 职业病科 黑龙江省 大庆市163000
3哈尔滨医科大学附属第五医院 神经内科 黑龙江省 大庆市 163000
摘要 目的：了解哈尔滨地区的呼吸道病毒在成年住院患者中的病原学分布及流行特征，为该疾病的预防及控制提供依据。方法：于2014年8月至2015年7月期间，以420例入住哈尔滨医科大学附属第二临床医院呼吸科的成人患者为研究对象，采用直接免疫荧光法对患者痰液标本中的七种常见呼吸道病毒进行检测，调查这些病毒在成人患者中的感染情况。结果：420例成人住院患者中，检测出61例阳性标本，阳性率为14.5%，其中33例为单一病毒感染，28例为混合病毒感染。在七种常见呼吸道病毒中，以呼吸道合胞病毒感染率最高，为57.4%。不同月份的病毒检出率分布存在显著差异，以1、2月份最高。结论：在哈尔滨地区住院成人患者中，呼吸道合胞病毒高发且感染时间集中在冬春交界，应加强在此期间的病毒感染预防工作。
关键词：呼吸道病毒;感染;病原学;直接免疫荧光法
Investigation of respiratory viral infection in adult inpatients
ABSTRACT Objective: To investigate the pathogenic distribution and epidemiological characteristics of respiratory virus infection in adult hospitalized patients in Harbin, and to provide evidence for disease prevention and control. Methods: Between August 2014 and July 2015, 420 adult patients admitted to the Department of Respiratory Medicine of the SecondClinicalHospitalof Harbin Medical University were enrolled in the study. Seven common sputum samples were obtained by direct immunofluorescence. Respiratory viruses were tested to investigate the infection of these viruses in adult patients. Results: Of the 420 adult hospitalized patients, 61 positive samples were detected, with a positive rate of 14.5%, of which 33 were single virus infections and 28 were mixed virus infections. Among the seven common respiratory viruses, the highest rate of respiratory syncytial virus infection was 57.4%. The distribution of virus detection rates in different months was significantly different, with the highest in January and February. Conclusions:In hospitalized adult patients in Harbin, respiratory syncytial virus was high and the infection time was concentrated at the winter and spring borders. The prevention of viral infection during that period should be strengthened.
Key words: Respiratory viruses; Infections; Etiology;Direct immunofluorescence
中图分类号：R183.3 文献标识码：A 文章编号：
前言
在世界范围内，呼吸道感染是一个持续存在的公共卫生热点，每年都可能导致数百万人死亡。在发展中国家，呼吸道感染的发病率和死亡率可能更高[1]。近几年来，病毒引起的呼吸道感染逐年增多，临床常见的呼吸道病毒包括甲型流感病毒(Influenza A，FluA)、乙型流感病毒(Influenza B，FluB)、副流感病毒l、2、3、4型(Parainfluenza virus，PIV-1、2、3、4)、腺病毒(Adenovirus,AdV)和呼吸道合胞病毒(Respiratory SyncytialVirus,RSV)。上述病毒具有传播快、流行广等特点，常常导致多重感染，严重的可以引起死亡。一直以来，儿童呼吸道感染广受关注，但针对成年人呼吸道病毒感染情况的调查则十分有限。而对于疾控人员和临床医生来说，了解不同年龄段呼吸道感染患者的病因及其影响因素对该疾病的防治均具有十分重要的意义。本文以哈尔滨地区成人呼吸道感染患者为研究对象，重点探讨该地区常见呼吸道病毒的流行状况，并揭示其流行规律。
1材料与方法
1.1调查对象
调查对象源自2014年8月至2015年7月期间在哈尔滨医科大学附属第二临床医院呼吸科住院的成年患者，共计420人，其中男性213人，女性207人，年龄在18~90岁之间。
1.2 主要试剂与仪器
呼吸道病毒诊断试剂盒购自美国chemicon公司，由甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、副流感病毒l、2、3型(PIV-1、PIV-2、PIV-3)、呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(AdV)共7种呼吸道病毒荧光标记的多克隆抗体混合筛查试剂和各自的单克隆抗体鉴定试剂所组成。荧光倒置显微镜Nikon Eclipse TS100型购自日本尼康公司。
1.3试验方法
1.3.1标本采集
采集住院患者清晨痰液标本，立即送检或置于-80℃冻存。
1.3.2制备细胞涂片
将痰液移至无菌离心管中，加入PBS缓冲液重悬标本。将重悬液在漩涡混合器上震荡混匀，以5000 r／min离心10 min，弃去上清液，并重悬以制备含纤毛柱状上皮细胞的细胞悬液，细胞浓度为1.0×106 个/ml。将细胞悬液点样于多孔玻片上，干燥后利用冷丙酮固定10 min，待用。
1.3.3病毒检测
用Chemicon直接免疫荧光试剂盒检测痰标本中气管纤毛柱状上皮细胞表面表达的常见呼吸道病毒抗原。在荧光显微镜200倍视野下，当有2个或2个以上纤毛柱状上皮细胞呈明亮黄绿色荧光即判定为筛查实验阳性，红色荧光为阴性。筛查实验阳性的标本继续进行鉴定实验，方法同上。
1.4统计分析
使用SAS 8.0统计软件进行数据处理分析，计数资料采用2检验，当P<0.05时差异有统计学意义。
2 结果
2.1 呼吸道病毒检出情况
在420名患有呼吸道疾病的住院患者中，有61人存在病毒感染，阳性率为14.5%。其中33例为单一病毒感染，28例为混合病毒感染。在检测到的阳性样本中, 检出的RSV数最多（35例），占阳性病例的57.4%(35/61)；PIV-2检出例数最少（1例），阳性率为1.6%（1/61）。其他五种呼吸道病毒的检出情况如下：FluA（50.8%，31/61）、PIV-3（21.3%，13/61）、PIV-1（19.7%，12/61）、FluB（8.2%，5/61）、Adv（8.2%，5/61）（表1）。28例混合感染样品的中病毒检出情况见表2。
2.2阳性标本的年龄分布情况
根据本课题中研究病人的资料分布，按制频数分布表的基本原则，将年龄划分为四个组：分别是<45岁、45～59岁、60～74岁、75～90岁。如表3所示，在不同年龄组中，病毒检出率的范围为10.9%（<45）-19.9%（60～75），各年龄组间无显著差异（P>0.05)。
2.3性别分布
在61例阳性患者中，男性为31例，女为30例，男性检出率为14.6％(31/213)，女性检出率为14.5％(30/207)，检出率在二者间无显著差异（P>0.05)。
2.4 阳性标本的时间分布
本研究的标本收集于8月至次年7月，不同月份的病毒检出率分布存在显著差异（P<0.05），11月至次年2月的检出率较高，均在20％以上，其中以1、2月份最高。
3讨论
众所周知，急性呼吸道感染是导致人类发病和死亡的重要原因之一。随着大气环境的变化、空气污染增多，呼吸道感染病例也呈上升的趋势。近年来，随着抗生素的广泛应用，呼吸道细菌感染得到了控制，但呼吸道病毒感染却尚未得到有效控制，有研究表明70%～80%的急性呼吸道感染来自于病毒。患有呼吸道感染的成年人，特别是老年人经常面临着沉重的住院负担，由于呼吸道病毒感染而导致世界直接或间接的经济损失可达1亿美元以上。监测病毒病原体的不断变化对公共卫生当局至关重要。在本研究中，我们利用直接免疫荧光法检测临床痰液标本中的七种常见呼吸道病毒，拟了解呼吸道病毒在哈尔滨市成人中的流行规律，有益于该地区成人特别是老年人的呼吸道病毒感染疾病的预防和治疗。
本实验室长期致力于对哈尔滨市住院患者呼吸道病毒的检测, 并关注该地区呼吸道病毒的流行情况。本研究呼吸道病毒的总检出率为14.52%，与本课题组在2009年（14.2%）]和2011年(15.4%)的检测结果相近，与2009年至2013年在全国范围内针对14岁以上的年龄组进行的研究结果（16.8％）相似[2]。在对全国呼吸道感染住院患者进行调查后发现，成人患者的流感病毒检出率最高，为8.0％，中国山东省16岁以上年龄组呼吸道病毒检出率为24.2％，2011年至2013年为流感病毒（8.7％）。2012年至2015年，北京和山东地区14岁以上住院患者的呼吸道病毒检出率为38.9％，其中流感病毒的发病率最高，为8.0％[3]。而另一篇报道显示，2014至2017年呼吸道病毒总阳性率为18.14%，检出率最高的为流感病毒。与北京、山东和中国其他地区最近的调查相比，本研究显示，在哈尔滨成年患者中，呼吸道合胞病毒的感染率最高。据文献报道，气温是与呼吸道病毒感染相关的主要气象变量，我国领土范围辽阔，各地气候差异较大，工业环境及饮食习惯也各不相同，使得不同地区的呼吸道病毒的感染率存在差异。此外，本研究中发现哈尔滨地区呼吸道感染的流行季节存在显著差异。哈尔滨作为我国东北部纬度较高、全年平均气温较低的大中型城市，具有四季分明、冬季寒冷漫长、夏季短暂凉爽的气候特点，因此在冬春季是呼吸道感染的高发期。该结果与以往的报道中认为呼吸道感染在南方秋季多发、北方春季高发的说法一致。地区性的研究结果对于制定未来的公共卫生疫情控制策略至关重要。呼吸道病毒混合感染情况比较多见，我们的研究结果显示检出的阳性样本中，46%存在二重或三重感染，该结果高于国内外文献报道的数据[4]，这可能与不同地域的病原体感染特点有关。
在本研究中，我们将420名住院患者按年龄分组进行分析。除45~59岁年龄组中，RSV检出率位居第二位以外，在其他各年龄组检出率均是最高。在所有年龄组中，60～74岁年龄组的感染率最高，可能与老年人免疫力低下有关，且此类人群与外界接触较多，受感染的机会也随之增多，但各年龄组呼吸道病毒的总检出率没有统计学差异。性别对呼吸道病毒总检出率没有明显影响，无统计学差异，该结果与以往文献报道一致，因此不同性别的人群在呼吸道病毒感染的预防与控制中应予以相同的重视程度。
总之，通过对哈尔滨地区2014年8月至2015年7月呼吸道疾病住院患者的常见呼吸道病毒病原学的研究发现，呼吸道合胞病毒是哈尔滨是呼吸道病毒感染的主要病原体，冬春季交界时高发，应加强在此期间对RSV病毒感染的预防工作。
参考文献(References)
[1] Ngghavi M, Abajobir AA, Abbafati C, et al. Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the global burden of disease study 2016[J]. Lancet,2017,390(10100):1151-1210.
[2] Feng L, Li Z, Zhao S, et al. Viral etiologies of hospitalized acute lower respiratory infection patients in China, 2009-2013[J].PLoS One,2014,9(6):e99419.
[13] Yu J, Xie Z, Zhang T, et al. Comparison of the prevalence of respiratory viruses in patients with acute respiratory infections at different hospital settings in North China, 2012-2015[J]. BMC Infect Dis, 2018,18(1):72-81.
[4] 许宏涛,李毅,陈东科,等.北京地区成人呼吸道病毒感染流行病学分析[J].检验医学，2016，31(6):499-502.
论文作者:高虹1 刘英姿2王东升3,曲章义1▲
论文发表刊物:《中国结合医学》2019年第03期
论文发表时间:2019/5/15
标签：呼吸道论文; 病毒论文; 检出论文; 哈尔滨论文; 患者论文; 阳性论文; 病毒感染论文; 《中国结合医学》2019年第03期论文;